对上皮组织局部施用使癌或癌前期组织选择性地染色的染剂来确定染色部位，在该染色部位获得组织样品，通过分子分析来确定细胞是否显示与细胞分化或癌相关的特征。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在组织外观显示癌可能已经扩散之前，对含有疑似扩散性癌细胞的组织进行早期定位和预测的联合方法，而前述观察组织外观的方法通常会延误通过常规的定位、切除和组织学方法对癌前期或癌性组织进行的诊断。另一方面，本专利技术涉及对含有这种疑似扩散性癌细胞的组织进行定位和检测的联合方法，含有疑似扩散性癌细胞的组织通常表现为外观异常，当外观已经表现异常时会导致延误诊断和治疗。
技术介绍
如果患癌的诊断延迟2个月以上，则患者的死亡危险性将大大高于在较早获得诊断的患者(见Cancer，922885-2891，2001)。因此，如果对患者经常进行癌检，并用确定的方法进行早期预测或诊断，就可以降低癌的死亡危险性。因此，本专利技术提供对最终发展为扩散性癌进行早期预测或确诊的扩散性癌预测和诊断方法，该方法可有步骤、快速而且准确地在临床应用。癌前期和癌性组织的发展肿瘤的发展需要两个独立的突变事件。其中一个可出现于生殖系并可遗传。另一个出现于体细胞。另外，这两个突变事件也可只在个体的体细胞中出现。癌检方法传统的目测查法能够正常观察到的细胞突变已有大量记载，所述细胞突变可包括增厚、变色、非典型的痣或硬化。本领域技术人员已知区分早期的黑色素瘤和良性的黑素细胞痣的若干组织学特征。例如 然而，这些病变组织通常发展到晚期才会明显表现出这些通常可见的征状及其特点。因此，需要一种简单、快速并相对精确的检查方法，以使临床医生在癌性或癌前期组织出现通常可见的特征之前将可疑组织定位。对疑似癌性组织早期定位的体内癌检方法现在已开发出了体内检查技术，这种技术能够在采用传统的观察法揭示可疑组织之前，快速并且非侵入性地鉴定患者身体上可能含有肿瘤或癌性表型细胞的大体或特定部位。这种确定此类疑似癌变尤其是上皮癌的部位的体内检查技术甚至对普通的临床工作者来说也十分便捷而易行。大体解剖检查大体解剖检查的一个实例是对单一的唾液样品的聚合酶链反应(PCR)分析。唾液含有来自头部和颈部区域(大的表面区域，其是癌细胞的常见来源，尤其是对于这些区域接触了尼古丁、酒精和其他已知或可疑的致癌物的患者)的脱落的细胞。PCR分析是一种大体初步检查方法，该方法可确定患者唾液中发现的脱落的细胞是否表现癌性表型，若为癌性表型则表明在此大体解剖区域内有癌的发展。例如，见Spafford，M.F.等，“采用微卫星分析法对脱落的黏膜细胞进行头部和颈部鳞片细胞癌的检查(Detection of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma AmongExfoliated Mucosal Cells by Microsatellite Analysis)”癌的临床研究(Clin.Cancer.Res.)，2001年3月，7(3)607-612。通过选择性体内染剂染色法进行特异性定位检查本领域已知的选择性体内组织染色技术使用甲苯胺蓝O(TBO)染剂和其他的阳离子超活体标记剂以便选择性地定位癌性或癌前期组织。授予Mashberg的美国专利4,321,251和授予Tucci等的美国专利5,327,801概述了以Mashberg命名的染色方法(Mashberg法)。在授予Burkett的美国专利6,086,852和6,194,573中公开了用于检测和识别癌或前期癌的TBO染色技术的改进。Burkett公开了合成TBO产物的方法、高产率TBO的生产方法及用于检测发育异常组织的改进方法。在授予Pomerantz的美国专利5,882,627中公开了对体内癌的识别有效的其他染剂，这些染剂包括天青A、天青B、天青C染剂和某些其他恶嗪染剂和噻嗪染剂。基于分子分析的预测和诊断突变通常由分子内基因重组产生，例如核苷酸(DNA和RNA各自的亚单位)的取代、添加或缺失。然而最近，遗传图谱已发展了检测表征癌和前期癌的核苷酸突变的方法，例如DNA和RNA的甲基化模式和酶活性，这是核苷酸序列或“遗传密码”改变的直接结果。也已确定可通过线粒体的改变检测癌活性。I.基因突变DNA分析DNA多态性分析揭示正常细胞和肿瘤细胞间的显著差异正常细胞在许多位点是杂合的，而肿瘤细胞在相同位点是纯合的(杂合性丧失)。肿瘤抑制基因通常与一条染色体或部分染色体的缺失相关，该缺失通过消除肿瘤抑制基因的一个等位基因及周围的标记，导致其变为纯合性。肿瘤抑制基因剩余的等位基因由于遗传突变或体细胞突变而失活。根据大量文献的记载，肿瘤抑制基因的实例包括腺瘤样结肠息肉基因(APC)、家族性乳腺/卵巢癌基因1和2(BRCA1和BRCA2)、钙粘着蛋白1(上皮的钙粘着蛋白或E-钙粘着蛋白)基因(CDH1)、多发性内分泌腺瘤1型基因(MEN1)、神经纤维瘤1型基因(NF1)、蛋白激酶A的1型(α)调控亚基基因(PRKAR1A)、成视网膜细胞瘤基因(RB1)、丝氨酸/苏氨酸激酶11基因(STK11)和希-林综合征基因(VHL)。因此，关键的染色体位点可能预示扩散性癌的开始。DNA分析的实例包括测定“染色体臂”或“微卫星”的突变或不稳定性的微卫星分析。微卫星是短的重复DNA序列，据观察其包含核苷酸错配、错误比对或核苷酸滑动(环化或缩短)。将诸如这些突变称为微卫星不稳定性，其与多种上皮癌相关。新近的研究鉴定了新的微卫星标记，该微卫星标记用于在细胞发生异常形态改变前检测异质性的丧失。见Guo，Z等，“Allelic Losses inOra Test-directed Biopsies of Patients with Prior UpperAerodigestive Tract Malignancy”，Clinical Canc.Res.，第7卷，1963-1968，2001年7月。本领域技术人员知道，具有染色体不稳定性和微卫星不稳定性的肿瘤之间在组织学水平、基因水平和解剖水平就右侧/左侧而言有显著区别。还已知在白血病和淋巴瘤中，主要的中间缺失和易位发生在大体的染色体水平。当已显示丢失了主要的染色体臂时，在各种上皮瘤中例如，发生了不同的变化。肿瘤明显按一条途径或另一条途径发展但不同时按两条途径发展。(Oncology News International，第9卷，第8期，增刊2，2000年8月)MSI分析通常需要使用5个MS标记——两个单核苷酸重复单元和三个双核苷酸重复单元。RNA分析现在可在1000个野生型mRNA分子背景中检测1个体细胞突变的mRNA分子。该技术在包含少至10-20个细胞的样品中测定基因表达的水平，并具有在若干已知变化频繁的位点测定体细胞点突变的能力。因此，在发育异常和癌性细胞小簇中可观察到基因表达概图中的微不均一性。使用与滚环式扩增(RCA)单分子测定系统偶联的靶定向的DNA连接步骤，在寡核苷酸微阵列上完成序列测定。DNA连接步骤可适用于测定包含点突变的mRNA。Lizardi，P.M.“Messenger RNA Profiling by SingleMolecule Counting”，耶鲁大学，(2000)，http//otir.cancer.gov/tech/imat_awards.html，(2001年11月28日)。端粒DNA和相关蛋白，端粒酶端粒是DNA序列，其是染色体末端专有的复合物本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测和诊断癌性或癌前期组织的预测／诊断方法，所述方法包括结合并顺序地实施以下步骤： （ａ）对上皮组织局部应用使癌性和癌前期组织选择性染色的染剂以定位可疑组织； （ｂ）自所述的可疑组织分离细胞；并 （ｃ）对所述细胞进行分子分析以确定所述提取的细胞是否显示与细胞分化或癌相关的特征。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：道格拉斯D伯克特，
申请(专利权)人：日拉生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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