建立微生物鉴别用标准化检测系统的方法技术方案

一种建立微生物鉴别用标准化检测系统的方法，其包含：　　　　（ｉ）提供一测试细胞系；　　　　（ｉｉ）在含有及不含该微生物的条件下培养该测试细胞系；　　　　（ｉｉｉ）测定在含有及不含该微生物的条件下培养的测试细胞系的基因表达模式；　　　　（ｉｖ）选择一组基因为标记，其在不含该微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达，明显异于其在以该微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达；及　　　　（ｖ）将所获得的标记数据储存为标准化检测系统。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及建立一微生物鉴别用标准化检测系统的方法。
技术介绍
随分子生物学的发展，人们已发现了多种基于DNA或rDNA序列分析的微生物鉴别方法〔参看Torriani等人所著的“利用recA基因衍生引物通过recA基因序列分析及多重聚合酶链反应(PCR)分析鉴别胚芽乳杆菌、L.pentosus及L.paraplantarum的分化”(Differentiation of Lactobacillus plantarum，L.pentosus and L.paraplantarum by recA Gene Sequence Analysis and Multiplex PCRAssay with recA Gene-Derived Primers.Appl Environ Microbiol.2001Aug；67(8)3450-3454)〕。该方法的实例为(1)随机扩增多态DNA(RAPD分析)，其中具10-15个碱基对之引物参与了待分析微生物指纹图之生成〔参看Hayford等人所著的“利用保守随机扩增多态DNA(RAPD)片段及RAPD型表征Ghanaian发酵玉米面中的发酵乳杆菌”(Use of Conserved Randomly Amplified Polymorphic DNA(RAPD)Fragments and RAPD Pattern for Characterization ofLactobacillus fermentum in Ghanaian Fermented Maize Dough.ApplEnviron Microbiol.1999 Jul；65(7)3213-3221)〕；(2)通过在待鉴别微生物的染色体DNA的限制酶消化片段所形成的DNA印迹图上，进行核糖类型确定；(3)脉冲场电泳(PFGE)，其可在电泳后提供欲鉴别微生物基因组DNA的特定型式；及(4)利用种属特异性引物进行16S rRNA或16S-23S rRNA基因间隔区间序列的PCR分析〔参看Tannock等人所著的“通过16S-23S rRNA基因间隔区间序列比较对来自消化道、青贮饲料及酸乳酪的乳杆菌属分离菌实施鉴别”(Identification of Lactobacillus Isolates from theGastrointestinal Tract，Silage，and Yoghurt by 16S-23S rRNA GeneIntergenic Spacer Region Sequence Comparisons.Appl EnvironMicrobiol.1999 Sep；65(9)4264-4267)；Matsuki等人所著的“利用16S rRNA-基因定向种属特异性引物检测的人体肠道微生物系中双歧杆菌属的分布”(Distribution of Bifidobacterial Species in HumanIntestinal Microflora Examined with 16S rRNA-Gene-TargetedSpecies-Specific Primers.Appl Environ Microbial.1999 Oct；65(10)4506-4512)；Rossi等人所著的“通过使用定向于编码16SrRNA基因的引物对环境样品中的乳品丙酸杆菌实施种属特异性PCR测定”(Genus-and Species-Specific PCR-Based Detection ofDairy Propionibacteria in Environmental Samples by Using PrimersTargeted to the Genes Encoding 16S rRNA.Appl Environ Microbiol.1999 Sep；65(9)4241-4244)；以及Harmsen等人所著的“用于检测人体排泄物中的细菌的16S rRNA探针延伸組”(Extensive Set of 16SrRNA-Based Probes for Detection of Bacteria in Human Feces.ApplEnviron Microbiol.2002 Jun；68(6)2982-2990)〕。
技术实现思路
本专利技术提供了建立一微生物鉴别用标准化检测系统的方法，该标准化检测系统通过比较在含有及不含微生物的条件下培养的测试细胞系中的基因表达模式(expression pattern)，以鉴别一微生物。本专利技术的一个目的是提供一，其包含(i)提供一测试细胞系；(ii)在含有及不含该微生物的条件下培养该测试细胞系； (iii)测定在含有及不含该微生物的条件下培养的测试细胞系的基因表达模式；(iv)选择一组基因为标记，其在不含该微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达，明显异于其在以该微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达；及(v)将所获得的标记数据储存为标准化检测系统。本专利技术的另一目的是提供一种鉴别一未知微生物是否为一标准化且已受到识别的微生物的方法，其包含(a)为一标准化且已受到识别的微生物提供一标准化检测系统，其中该检测系统通过以下步骤建立(i)提供一测试细胞系；(ii)在含有及不含该标准化且已受到识别的微生物的条件下培养该测试细胞系；(iii)测定在含有及不含该标准化且已受到识别的微生物的条件下培养的测试细胞系的基因表达模式；(iv)选择一组基因为标记，其在不含该标准化且已受到识别的微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达，明显异于其在以所述标准化且已受到识别的微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达；及(v)将所获得的标记数据储存为标准化检测系统；(b)在含有及不含该未知微生物的条件下培养该测试细胞系；(c)测定在含有及不含该未知微生物的条件下培养的测试细胞系的基因表达模式；(d)选择一组基因为标记，其在不含该未知微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达，明显异于其在以该未知微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达；(e)将在步骤(d)中获得的标记数据与在步骤(a)中获得的标记数据加以比较，若在步骤(d)中获得的标记数据在一可接受的量内与在步骤(a)中获得的标记数据相似，则可藉此鉴别该未知微生物为该标准化且已受到识别的微生物。本专利技术还提供了一种建立用于检测一微生物中之一特定功能的标准化检测系统的方法，其包含(i)提供一测试细胞系；(ii)在含有及不含一具有一特定功能的参考微生物的条件下培养测试细胞系；(iii)测定与在含及不含该参考微生物的条件下培养的测试细胞系的特定功能相关的基因表达模式；(iv)选择一组基因为标记，其在不含该参考微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达，明显异于其在以该参考微生物的条件下培养的测试细胞系中的表达；及(v)将所获得的标记数据储存为标准化检测系统。本专利技术的另一目的是提供一种用于检测一测试微生物是否具有一特定功能的方法，其包含(a)提供一用于鉴别一参考微生物中的特定功能的标准化检测系统，其中该检测系统通过以下步骤建立(i)提供一测试细胞系；(ii)在含有及不含该参考微生物的条件下培养测试细胞系；(iii)测定与在含有及不含该参考微生物的条件本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：许清祥，
申请(专利权)人：景岳生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：