猪常见传染病诊断性基因芯片及其用途制造技术

本发明专利技术涉及用于诊断猪常见传染病的基因芯片，以及利用所述诊断性基因芯片的制备方法以及用于检测传染病的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于诊断猪常见传染病的诊断性基因芯片，以及利用所述诊断性基因芯片的制备方法以及用于检测传染病的用途。
技术介绍
近年来，我国畜牧业获得了高速的发展。长期以来，妨碍畜牧业发展和影响养殖业生产的主要问题是所述家禽和/或家畜罹患疫病的威胁，特别是鸡和猪罹患传染病的威胁。由于采用了集约化的饲养方式，鸡、猪的交易流通加快，使得猪和鸡的传染病变得更为复杂，常常表现为多种致病病原混合感染，造成疾病诊断上的困难，防治难度也大大相应增加。据报道，在调查的27种鸡的传染病中，混合感染两种或两种以上的传染病，占病例总数的65.1％，其中以传染性法氏囊病的合并感染最多，常常同时并发鸡新城疫，有时也合并大肠杆菌、传染性喉气管炎等病。还有报道，1995年初北京部分规模化养猪场仔猪大量死亡，死亡率为63.21％，十日龄仔猪的死亡率为100％，就是由于猪传染性胃肠炎、流行性腹泻和轮状病毒合并感染而致。目前，对于上述家禽和/或家畜常见疫病的检测存在诸多困难。对家禽和/或家畜，特别是猪和鸡传染病的诊断目前虽然有一些方法，如病毒分离法、血凝(HA)法、血凝抑制(HI)法、琼脂扩散法和ELISA法等，但上述传统检测方法存在较多缺陷。一方面，由于待测家畜一般都已接种了所述疾病的疫苗，所以不能用检测抗体的血清学进行诊断。而常用病毒分离的方法，一般需要一到两周的时间才出结果。还有检测病毒的ELISA法、荧光抗体法等都比较复杂，需要时间一般要三天，特异性和敏感性不如基因芯片。至于PCR法是比较敏感，但易于污染造成假阳性，特别是RT-PCR难以操作，不易推广。上述所有方法每次只能检测一种病原，费时费力，不利于同时大批量检测复合致病病原的感染。生物芯片技术是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，它主要是通过微加工技术和微电子技术在固相芯片表面构建的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、DNA及其他多种生物成份的准确、快速、大量信息的检测。常用的生物芯片分为三大类即基因芯片，蛋白质芯片和芯片实验室。生物芯片的主要特点是高通量，微型化和自动化。本专利技术人首次将上述生物芯片技术应用于家禽和/或家畜，特别是鸡和猪的传染病检测领域，制备了能通过一次检测诊断多种病原的诊断性基因芯片，从而有效地解决了现有疫病诊断技术不能一次试验同时检测多种病原的问题，实现了所需样品量少、灵敏、特异、快速、费用低廉的家禽和/或家畜，特别是猪和/或鸡的传染病检测。专利技术概述本专利技术的一个方面涉及一种用于诊断家禽和/或家畜疾病的基因芯片，其选自1)猪常见传染病诊断基因芯片，用于诊断猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、和/或猪繁殖和呼吸综合征；2)猪病毒病诊断基因芯片，用于诊断猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、猪传染性胃肠炎、猪繁殖和呼吸综合征、猪流感、猪细小病毒病、猪呼吸道冠状病毒病、猪轮状病毒病、猪流行性乙型脑炎；3)猪传染性腹泻病诊断基因芯片，用于检测猪大肠杆菌病、猪痢疾、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、轮状病毒病；4)猪繁殖障碍综合症基因诊断芯片，用于检测狂犬病、细小病毒病、猪流行性乙型脑炎、猪繁殖和呼吸综合征；5)鸡常见传染病诊断基因芯片，用于检测鸡新城疫、禽流感、鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、禽霍乱、鸡沙门氏菌病、大肠杆菌病；6)鸡病毒病诊断基因芯片，用于诊断病毒病鸡新城疫、禽流感、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊病、鸡传染性喉气管炎、鸡马立克氏病、减蛋综合症、禽网状内皮组织增生症、鸡脑脊髓炎、鸡传染性贫血症；7)鸡呼吸道传染病诊断基因芯片，用于诊断鸡呼吸道传染病，鸡新城疫疫、禽流感、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、鸡毒支原体、滑液支原体。8)动物细菌检测基因芯片，用于测定相应的致病病原。本专利技术的另一个方面，涉及一种本专利技术所述基因芯片用于检测家畜和/或家禽疫病的方法，包括如下步骤1)依照待测个体和疾病类型，选用至少一种本专利技术所述的基因芯片；2)标记待测样品，3)在适于与所选基因芯片进行杂交的条件下，加入经标记的待测样品并使之反应足够的时间；和4)检测杂交反应的结果。专利技术详述根据目前我国对畜牧业影响最大的猪、鸡的传染病发生情况，本专利技术设计了用于检测多种致病病原的诊断用基因芯片，其中所述诊断用基因芯片上具有用于鉴定特定致病病原的DNA片段，其被固定在适于检测反应的固相载体上。本专利技术中所述固相载体可选用本领域周知的那些，只要所述载体与所述反应物相容，不会影响检测结果。优选的，本专利技术所述固相载体为硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、载玻片等。本专利技术所述诊断用基因芯片可包含在一个诊断试剂盒中，其中还包括用于诊断反应的相应试剂、缓冲液以及说明书。本专利技术的一个方面，公开了一种由猪瘟病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、和/或猪繁殖和呼吸综合征病毒病原基因特征性片段构成的猪常见传染病诊断基因芯片，用于诊断猪瘟(Classical Swine Fever(CSF)或Hog Cholera(HC))、口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease(FMD))、伪狂犬病(Pseudorabies(PR)或Aujeszky’s Disease)、猪繁殖和呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRS)，其中采用如下所述病原基因的特征性片段猪瘟病毒(CSFV)的cDNA片段(参见M.Harding等人，1994年J.Clin.Microbiol.，第31卷10期第2600-2602页，SEQ ID NO1)。所述猪瘟病毒特征性片段能够检测出美国的Baker、BAI株，德国的Glentorf、Osterode、V622株，法国的Alfort、Bas-rhin株，英国的Classical株，加拿大的Windsor株，荷兰的Henken株，比利时的1821株，马来西亚的VRI株，巴西的EVI株。而其他病毒和致细胞病变和不致细胞病变的牛病毒腹泻病毒(BVDV)及边界病毒(BDV)呈阴性；口蹄疫病毒(FMDV)的cDNA片段(参见，M.C.Hfner等人，1993年J.Virol.Methods第42卷第53-62页，SEQ ID NO2)，所述特征性片段能检测出FMDV的O、A、C、SAT 1、SAT 2、SAT 3和Asia1型各毒株，而其他病毒和猪水泡病病毒(SVDV)及牛肠道病毒(BEV-1和BEV-2)呈阴性；伪狂犬病病毒(PRV)的特征性DNA片段(参见，H.Hasebe等人，1993年Vet.Microbiol.第34卷第221-231页，SEQ ID NO3)，其用于检测如Becker、Iowa、Shope、4892、5894、Bartha、Bukarest等株PRV，而其他的各种病毒呈阴性；猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)的特征性cDNA片段(参见，S.A.Gilbert等人，1997年J.Clin.Microbiol.第35卷第264-267页，SEQID NO4)，用于检测Minnesota MN-1b、Quebec LHVA3、AlbertanPRRS B-9、H-5、U-28、European LV等株PRRS，而其他的各种病毒呈阴性。在本专利技术的一个实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断猪常见传染病的基因芯片，其中包括：固定在固相载体上的与待检致病病原种类相对应的待测致病病原特征性ＤＮＡ和／或ｃＤＮＡ片段，其中采用的特征性片段由猪瘟病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、和／或猪繁殖和呼吸综合征病毒病原基因特征性片段组成，其分别相应于ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１、２、３和４的序列的序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴时友，尹燕博，
申请(专利权)人：山东澳兰生物工程研究院，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]