淋巴管和血管的内皮细胞基因制造技术

本发明专利技术提供了在淋巴管内皮细胞和血管内皮细胞中差异表达的多核苷酸和基因。这些基因可用于治疗涉及淋巴管的疾病，所述疾病例如淋巴水肿，各种炎性疾病，和通过淋巴管系统进行的癌转移。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及在淋巴管内皮细胞中特异性表达的多核苷酸和蛋白。
技术介绍
近来关于淋巴血管生长因子(lymphangiogenic growth factors)和癌症的淋巴管内生长和转移(Mandriota等，EMBO J.20672-682(2001)；Skobe，等，Nat.Med.7192-198(2001)；Stacker，等，Nat.Med.7186-191(2001)；Karpanen等，Cancer Res.611786-1790(2001))的联系的证据表明，淋巴管可用作肿瘤治疗的又一个靶点。癌细胞通过直接侵入周围组织，扩散到体腔，侵入血管系统(血管源性转移)在体内扩散，也通过淋巴系统扩散(淋巴转移)。局部淋巴结播散是多种常见癌症转移的第一步，并且和疾病的预后高度相关。参与从肿瘤区引流组织液的淋巴结称为哨兵淋巴结(sentinel nodes)，在适当的位置上通过诊断发现这些淋巴结，并在疑有癌细胞转移的情况下，则去除它们。然而，虽然其与临床相关(relevance)，对于导致通过血流或通过淋巴系统转移的机制却知之甚少。直到最近，尽管淋巴管在医学上很重要，它们受到的重视远小于血管。淋巴管从大多数组织的组织间隙收集富含蛋白质的液体和白细胞，并将它们作为淋巴这种白色不透明的液体运输到血液循环。小淋巴管汇合成较大的淋巴管，将淋巴液通过胸导管引流到颈部的大静脉。淋巴结是沿淋巴管分布的过滤站，收集淋巴管(collecting lymphatic vessels)周围的平滑肌收缩和身体的运动(bodily movements)驱动淋巴的运动，流动的方向由静脉内的瓣膜控制，就像在静脉中一样。淋巴毛细管内覆内皮细胞，它们之间具有很多大的内皮间隙并有明显的接点。淋巴毛细管还缺乏连续的基底膜，而且没有周细胞。锚丝(Anchoring filaments)连接淋巴管内皮细胞的近腔表面和血管周围的细胞外基质，并在组织水肿时锚丝牵引内皮细胞以保持淋巴管的开放。淋巴管缺乏或堵塞通常由感染，外科手术或放疗造成，极少数情况下由遗传缺陷造成，使得蛋白富集液在组织中聚集，即淋巴水肿。淋巴系统对于肠脂肪吸收和免疫应答也很重要。细菌，病毒和其他外来物质被淋巴管吸收并运送到淋巴结，在淋巴结中，外来物质被呈递给免疫细胞，而树突细胞则在此借由淋巴来穿行。对操纵淋巴管的理解和能力进展缓慢。淋巴管内皮细胞的发育或功能异常可导致淋巴管肿瘤或畸形，例如淋巴管瘤或淋巴管扩张。Witte等，Regulation of Angiogenesis(eds.Goldber，I.D.& Rosen，E.M.)65-112(Birk_user，Basel，Switzerland，1997)。VEGFR-3酪氨酸激酶受体在正常淋巴内皮中表达，并在多种类型的血管肿瘤中发生上调，包括卡波奇肉瘤(Kaposi’s sarcomas)。Jussila等，Cancer Res 58，1955-1604(1998)；Partanen，等，Cancer 862406-2412(1999)。由感染，手术，放射治疗或遗传缺陷造成的淋巴管缺失或功能障碍导致淋巴水肿，其特征是富含蛋白的液体在该组织中的慢性累积，从而导致肿胀。VEGFR-3信号对淋巴管生成的重要性在家族性淋巴水肿的遗传学中得到了揭示，所述疾病的特征是皮肤淋巴管发育不全，导致外貌变丑和肢体肿胀致残。Witte，等，Regulationof Angiogenesis(eds.Goldber，I.D.& Rosen，E.M.)65-112(Birk_user，Basel，Switzerland，1997)；Rockson，S.G.，Am.J.Med.110，288-295(2001)。一些患有淋巴水肿的家族成员是编码酪氨酸激酶结构域的VEGFR3外显子的错义突变杂合子，这种突变导致受体蛋白失活。Karkkainen，等，Nature Genet.25153-159(2000)；Irrthum，等，Am.J.Hum.Genet.67295-301(2000)。本领域需要关于控制内皮细胞多样性的转录程序的信息，以及血管生成和淋巴管生成的机制的信息。本领域还需要新的血管标志物，所述标志物可用作研究包括肿瘤转移在内的多种涉及淋巴管的疾病的有价值的靶点。
技术实现思路
本专利技术的组合物包括分离的多核苷酸，具体为淋巴管内皮细胞基因，多肽，这些多核苷酸编码的分离的多肽，重组DNA分子，克隆的基因或其简并变体，尤其是天然存在的变体例如等位基因变体，以及特异性识别一种或多种存在于所述多肽上的表位的抗体。本专利技术的组合物还包括含有本专利技术的多核苷酸的载体(包括表达载体)，经遗传改造含有这种多核苷酸的细胞，和经遗传改造表达这种多核苷酸的细胞。在选定的实施方案中，本专利技术这种分离的多核苷酸包含序列表中所述的多核苷酸序列，例如SEQ ID NO1-30之一。本专利技术的多核苷酸还包括，但不限于，与SEQ ID NO1-30的核苷酸序列的互补序列在高度严格的条件下杂交的多核苷酸；与SEQ ID NO1-30的核苷酸序列的互补序列在中等严格的条件下杂交的多核苷酸；上述任一种多核苷酸的等位基因变体多核苷酸；编码上述任一种蛋白的种同源物(species homologue)的多核苷酸；编码包含SEQ ID NO1-30之一编码的多肽的特定结构域或截短部分(truncation)的多肽的多核苷酸。示例性的高度严格的杂交条件是在42℃，含有50％甲酰胺，5xSSPE，5x Denhardt′s溶液，0.1％SDS和0.1mg/ml变性的鲑精DNA的溶液中杂交20小时，然后用1xSSC，0.1％SDS在65℃洗涤30分钟。本专利技术的另一方面涉及LEC和BEC多肽，包括上述多核苷酸编码的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是本专利技术多肽的成熟形式。特别是经纯化并分离的多肽，所述多肽包含SEQ ID NO31-44，46，48，50，52，81，187，207，211，221，235，241，293，和391之一的氨基酸序列；以及经纯化并分离的多肽，所述多肽包含选自以下序列的氨基酸序列(a)SEQ ID NOs31-34，46，48，207，676，859，和861；和(b)(a)中的氨基酸序列的包括至少10个氨基酸的胞外区片段。此外，本专利技术还包括上述纯化并分离的可溶性多肽，所述多肽包含SEQ ID NO31-34，46，48，207，676，859，和861之一的氨基酸序列的胞外区片段，其中所述多肽缺乏任何跨膜区。这种多肽还缺乏任何细胞内区。本专利技术还涉及融合蛋白，所述蛋白包含与有含免疫球蛋白恒定区的免疫球蛋白片段融合的上述多肽。相关地，本专利技术还提供了一种组合物，所述组合物包含上述的多肽或蛋白，以及可药用的稀释剂，载体或佐剂。本专利技术的多肽组合物可包含可接受的载体，如亲水的载体例如可药用的载体。还提供了包含这样一种组合物的试剂盒，以及给药受试哺乳动物所述药物组合物来调节受试动物体内的淋巴系统的方案。本专利技术还提供了特异性结合上述多肽的抗体，在一些实施方案中所述抗体是人源化的。本专利技术还提供了包含特异性结合上述多肽的抗体的抗原结合区的蛋白，其中所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
差异调节血管内皮细胞（ＢＥＣ）或淋巴管内皮细胞（ＬＥＣ）的生长或分化的方法，包括使内皮细胞和一种组合物接触，所述组合物包含差异调节血管和淋巴管内皮细胞的制剂，所述制剂选自以下物质：（ａ）包含ＢＥＣ多肽或ＬＥＣ多肽的氨基酸序列的多肽， 或者所述多肽的活性片段；（ｂ）包含编码（ａ）的多肽的核苷酸序列的多核苷酸；（ｃ）特异性结合（ａ）的多肽的抗体；（ｄ）包含（ｃ）的抗体的片段的多肽，其中所述片段和抗体与该多肽结合；（ｅ）编码（ａ）的多肽的人基因 或ｍＲＮＡ的反义核酸；（ｆ）编码（ａ）的多肽的人基因或ｍＲＮＡ的干扰ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：卡里阿利塔洛，泰加马基嫩，塔蒂亚娜彼得罗娃，皮普萨萨哈里嫩，朱亚萨哈里嫩，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究院，利森蒂亚有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]