T细胞受体CDR3序列和检测方法技术

本发明专利技术大体涉及自身免疫病，如多发性硬化（ＭＳ）、类风湿关节炎（ＲＡ）及其它疾病的治疗领域。本发明专利技术公开了通过利用Ｔ细胞受体肽治疗和监控自身免疫病的方法。本发明专利技术也公开了在ＭＳ患者群体中发现的Ｔ细胞受体的核酸和肽序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体涉及自身免疫病，如多发性硬化(MS)的治疗领域。更具体而言，本专利技术涉及在某些MS患者中发现的T细胞受体核酸和肽，以及检测这些序列的方法。另外，本专利技术涉及T细胞受体肽序列在治疗自身免疫病，如MS方面的用途。
技术介绍
位于细胞毒性T淋巴细胞或T辅助细胞上、由T细胞受体(TCR)形成的细胞间识别复合体，和位于抗原呈递细胞(APC)上的MHC/肽复合体是在多种类型的细胞间相互作用中的共同识别成分，它们在个体生物体内T细胞所有组成成分的发育期间(正选择；负选择；外周存活)和适应性免疫应答的控制(T辅助细胞)与效应期(T杀伤细胞)期间均可活化TCR。在适应性免疫应答中，抗原由超变分子，例如抗体或TCR识别，这些超变分子的表达具有充分多样的结构，因而能够识别任何抗原。抗体可结合抗原表面的任意部分。而TCR则仅限于通过与特定抗原来源的短肽结合，而感知该抗原的存在，其中该抗原呈递在与主要组织相容性复合体(MHC)的I或II类分子结合的APC表面。肽/MHC复合体的TCR识别可触发T细胞的活化(克隆扩充)。TCR是由两条链组成的异二聚体，这两条链可以是αβ(α-β)或γδ(γ-δ)。TCR的结构与免疫球蛋白(Ig)非常相似。每条链均含有两个胞外域，即免疫球蛋白折叠。氨基末端区域高度可变，被称为可变(V)区。最接近膜的区域是恒定(C)区。上述两个区与免疫球蛋白的两个区相似，类似Fab片段。每条链的V区均含有三个互补决定区(CDR)。各TCR链在邻近膜处均具有一个带半胱氨酸残基的短连接序列，在两条链之间形成了二硫键。编码αβ和γδ异二聚体的基因仅在T细胞系中表达。四个TCR基因座(α、β、γ和δ)均具有与Ig的基因座非常相似的种系组构。α和γ链均为V和J片段重排的产物，而β和δ链则为V、D和J片段重排的产物。对TCR链而言，除δ链基因片段位于α链的V和J基因片段之间外，其它基因片段均位于不同染色体上。δ链基因片段的位置具有下述意义α链基因片段的有效重排去除了δ链的C基因，因此在特定细胞中，αβ异二聚体不能与γδ受体共表达。小鼠体内存在大约100个Vα和50个Jα基因片段，并仅存在一个Cα片段。δ链基因家族含有大约10个V、2个D和2个J基因片段。β链基因家族含有20-30个V片段和两个均含有1个Dβ、6个Jβ和1个Cβ的相同重复。最后，γ链基因家族含有7个V和3个不同的J-C重复。人体内的该组构与小鼠类似，但片段数量不同。α和β链中基因片段的重排与Ig中的情况相似。α链与Ig的轻链相似，由V、J和C基因片段编码。β链则与Ig的重链相似，由V、D和J基因片段编码。α链基因片段的重排导致VJ连接，β链重排则导致VDJ连接。重排基因转录、RNA加工并翻译后，α和β链通过T细胞膜中的二硫键被表达连接。TCR基因片段的侧翼为含有一个七聚体和一个九聚体的识别信号序列(RSS)，以及一个包含12个核苷酸(一个转角)或23个核苷酸(两个转角)的间插序列。对Ig而言，由重组活化基因(RAG-1和RAG-2)编码的酶负责重组过程。RAG1/2识别RSS并以在Ig重排中的相同方式连接V-J和V-D-J片段。简言之，上述酶在基因片段与RSS之间切下一条DNA链，并催化编码序列中形成发夹结构。信号序列随后被切除。α链中V和J片段与β链中V、D和J片段的组合连接产生了大量可能的分子，从而造成了TCR的多样性。通过可变连接基因片段也可在TCR中实现多样性。与Ig相比，β和δ基因片段可以可变方式连接。β和δ基因片段中的RSS侧翼基因片段可在β链中形成VJ和VDJ，在δ链上形成VJ、VDJ和VDDJ。和在Ig的情况中一样，基因片段连接中的可变性也可产生多样性。TCR中被称为互补决定区(CDR)的超变环可识别由MHC分子与结合肽形成的复合表面。α和β的CDR2环仅接触APC表面的MHC分子，而CDR1和CDR3环则与上述肽和MHC分子二者均接触。与Ig相比，TCR在CDR1和CDR2中的多样性更为有限。不过，TCR中CDR3的多样性高于Ig，因为TCR可连接多于1个的D片段，从而提高了连接多样性。许多自身免疫病的病理被认为是对生物体内存在的自身抗原的自身免疫T细胞应答的缘故。与克隆选择模式相反，胸腺中并非缺失所有自身反应性T细胞。这些具有适合广谱自身抗原的TCR的T细胞代表了正常T细胞所有组成成分的一部分，并在外周自然循环。自身反应性T细胞在进化期间为何可以经历胸腺中的分化，并被容纳在外周的原因尚未清楚。虽然其生理学作用尚未被充分理解，但当被活化时，这些自身反应性T细胞在诱导自身免疫病理方面便具有了潜在威胁。自身反应性T细胞也可分离自并未患有自身免疫病的正常个体中。已被证实的是其自身反应性的抗原识别不足以介导自身破坏的过程。自身反应性T细胞致病的前提之一是其必须被活化。自身反应性T细胞被指出涉及了自身免疫病，如多发性硬化(MS)和类风湿关节炎(RA)的病理。MS中自身反应性T细胞的病理通常被认为是T细胞应答于髓磷脂抗原，尤其是髓鞘碱性蛋白(MBP)的缘故。与对照个体相比，MBP反应性T细胞被发现经历体内活化，以较高的前体频率出现在MS患者体内的血液和脑脊髓液中。上述MBP反应性T细胞产生了Th1细胞因子，如IL-2、TNF和γ-干扰素，而这些细胞因子有助于炎症细胞迁移进中枢神经系统，并加剧MS中的髓鞘破坏性炎症应答。MBP反应性T细胞也被证明涉及了动物体内实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的病理，该病类似多发性硬化。通过注射乳化于佐剂中的MBP，或被动地通过注射MBP反应性T细胞系和来源自MBP-敏化动物的克隆，可在易感动物体内主动诱导EAE。体外活化时，诱导EAE所需MBP反应性T细胞的量非常少，而具有相同反应性的静息T细胞即使100倍上述量以上仍然不能介导上述疾病。已证实接种灭活的MBP-反应性T细胞可减少EAE中的MBP反应性T细胞，该操作被称为T细胞接种，被用于预防和治疗EAE。Ben-Nun et al.，Nature 29260-61(1981)。虽然T细胞接种的潜在机制尚未被完全理解，还是有一种看法是通过与TCR的相互作用，以及据推测可与T细胞活化标记反应的所谓抗-ergotypicT细胞应答，从而涉及独特型调节网络。独特型和抗-ergotypic调节网络被认为是T细胞接种所诱导的保护性免疫的基础，因为T细胞接种所赋予的保护性免疫对接种所用自身免疫T细胞可诱导的疾病具有特异性。另外，分离自免疫的啮齿类的抗独特型T细胞可特异性识别免疫T细胞克隆/系，而不识别表达了稀疏TCR结构特征的T细胞。抗独特型T细胞识别的TCR决定簇被认为最可能位于CDR3或CDR2内，与根据这些区域内的特征序列多样性所预测的结果相同。在EAE中，致脑炎MBP-反应性T细胞被限定在MBP上非常有限的几个表位。这些在致病T细胞应答多样性方面的限制允许特定免疫干扰。在预防敏化动物体内EAE的发展方面，人们针对TCR的Vβ区已相应设计了多种治疗方案。例如，已有针对Vβ基因产物的单克隆抗体，和以负责的Vβ基因的CDR2区为基础设计的肽疫苗。对EAE的若干研究已延伸至人类自身免疫病。例如，与TCR Vβ5.2相应的肽已被应用在治疗MS患者的临床试验中，Vβ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寡核苷酸，长度大约为１５－３０个核苷酸，包含一个特定序列的至少１０个连续核苷酸或其互补序列或由其衍生的序列，该特定序列编码选自ＳＥＱＩＤＮＯ：４、５和６的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧敬五，
申请(专利权)人：贝勒医学院，奥佩艾克萨药品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]