二氧化碳含量测定方法及二氧化碳诊断试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种测定二氧化碳（碳酸氢根）含量的方法，同时还涉及二氧化碳（碳酸氢根）诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该试剂盒包括缓冲液、磷酸烯醇式丙酮酸、肌苷、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、脲酶、稳定剂、还原型色原体组合，通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生酶偶联反应，再将最终反应物置于生化分析仪下，检测主波长吸光度变化的情况（速度），从而测算出二氧化碳（碳酸氢根）的含量大小。采用本发明专利技术完全可以通过生化分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定二氧化碳(碳酸氢根)含量的方法，同时本专利技术还涉及二氧化碳(碳酸氢根)诊断试剂盒，属于医学检验测定

技术介绍
血液内二氧化碳的含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。血液pH的恒定是维持生命活动必不可少的条件，血浆中的多种缓冲系统中以碳酸氢盐缓冲系统最为重要，直接影响血液的pH。血液内二氧化碳的含量变化主要反映代谢性酸碱平衡紊乱。单纯代谢性酸或碱中毒时，血液碳酸氢根下降或升高，总二氧化碳也随之下降或升高。而单纯呼吸性酸或碱中毒时，血液碳酸氢根升高或下降。总二氧化碳和碳酸氢根的测定方法较可分为直接测定和间接推算两类。直接测定主要有量气法、量压法、滴定法、比色法、Conway微量扩散法、流动注射气体扩散法等。间接推算是利用血气分析仪测得的PH与PCO2，根据H-H方程的变换形式HCO3-(m mol/L)＝0.03×PCO2(mm Hg)×antilog(PH-p ka)或HCO3-(m mol/L)＝0.225×PCO2(k Pa)×antilog(PH-p Ka)计算获得。式中PH为37℃时测得值，p ka在37℃为6.10。目前，以间接推算法应用较普遍，由血液分析仪的微处理计算机并与血气分析结果一起报告，准确性基本可以符合临床要求。直接测定法以滴定法应用最广泛，但由于受多种因素影响，测定误差较大。酶法测定适合自动化分析，结果可靠，应当是很有前途的测定方法，但目前尚有待深入研究。检索中国专利发现，申请号为96190276.0、申请日为1996.02.06的专利技术专利申请公开了一种用来导出病人血液中气体含量的非侵入性的系统和方法。该系统相应于体积测量呼气中的二氧化碳浓度。然后处理该数据导出动脉血中二氧化碳气体水平。若数据为时间域，处理可将时间域数据转换成体积域。该方法也经迭代评估了多个变量的显著性，所得的关系可供快速和准确地对健康人和患肺病病人进行血中气体含量的测定。近年来，申请号为02282386.7、申请日为2002.10.29的技术专利公开了一种医用的血液碳酸氢根测定仪，主要由操作面板、进样检测机构、定滴加液机构、搅拌机构和以单片机为主控元件的电器控制部分组成。以上专利均与酶法测定无关，这从一个侧面说明，国内此方面的实验研究十分缺乏。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种可以克服以上现有技术缺点的二氧化碳(碳酸氢根)含量的测定方法。同时本专利技术还给出实现该方法的二氧化碳(碳酸氢根)诊断试剂盒。采用该试剂盒中的试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪上进行二氧化碳(碳酸氢根)含量测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。本专利技术测定二氧化碳(碳酸氢根)含量的步骤如下1)、将样品与主要由肌苷、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、脲酶、还原型色原体组合组成的试剂混合，使之发生如下方法原理的反应二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根肌苷+磷酸根核苷磷酸酶次黄嘌呤+1-磷酸核糖次黄嘌呤+水+氧黄嘌呤氧化酶尿酸+过氧化氢尿酸+水+氧脲酶尿囊素+过氧化氢2过氧化氢+2还原型色原组合过氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亚胺色原+水2)、检测最终反应物在主波长400--600nm吸光度上升的速度，测算出二氧化碳(碳酸氢根)含量的大小。通常步骤2)将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪器下，检测主波长400--600nm吸光度上升的速度，测算出二氧化碳(碳酸氢根)的含量的大小。以上样品与试剂的混合比例按体积为1/10到1/250，以上过程的测定温度控制在常规的20℃到50℃范围，反应时间控制在常规的2-30分钟。二氧化碳(碳酸氢根)的含量。本专利技术直接应用二氧化碳(碳酸氢根)和磷酸烯醇式丙酮酸经磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶作用后产生磷酸根，再酶偶联核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、脲酶、过氧化物酶等酶偶联反应以及还原型色原体(Chromogen)组合系统，将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料，因此测量染料含量的高低(不同染料吸收波长不同，介于400--600nm之间)可以直接反映二氧化碳(碳酸氢根)含量的大小。这个酶偶联反应系统的优点有(1)它利用将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原或者吲嗒胺色原染料来反映二氧化碳(碳酸氢根)含量，有精确度好的优点。(2)这个酶偶联反应系统组成的反应成分都是外加的，不受内、外源物质的污染，测试结果精确。用于实现本专利技术方法的二氧化碳(碳酸氢根)诊断试剂盒可以是单剂，包括缓冲液40--200mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 0.2--20mmol/l肌苷 0.2--10mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶2000--20000U/l核苷磷酸酶500--50000U/l黄嘌呤氧化酶 500--50000U/l过氧化物酶500--50000U/l脲酶 500--50000U/l稳定剂10--80％(总体积)还原型色原体组合 0.1--20mmol/l以上还原型色原体组合可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙(3-methy1-2-benzothiazolinone-hydrszone简称MBTH)或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒(4-aminoantipyrine)与0.1--20mmol/l以下十四种成分之一组合而成石碳酸(phenol)N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine简称ESPAS)N，N-双乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)2，4-双氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid简称TBHB)3，5-双氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenol sulfonic acid)3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid简称DHBS)N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium简称TOOS)仨溴羟基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)双甲基苯胺(Dimethylaniline简称DMA)N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine简称EHSPT)2，2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)(2，2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)简称ABTS4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid)简称HMB)3-甲基-乙基-羟基苯胺(3-methy本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二氧化碳含量测定方法，包括以下步骤：１）、将样品与主要由肌苷、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、脲酶、还原型色原体组合组成的试剂混合，使之发生如下方法原理的反应：二氧化碳＋磷酸烯醇式丙酮酸 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸＋磷酸根肌苷＋磷酸根核苷磷酸酶次黄嘌呤＋１－磷酸核糖次黄嘌呤＋水＋氧黄嘌呤氧化酶尿酸＋过氧化氢尿酸＋水＋氧脲酶尿囊素＋过氧化氢２过氧化氢＋２还原型色原 组合过氧化物酶２吲嗒胺色原或醌亚胺色原＋水２）、检测最终反应物在主波长４００－－６００ｎｍ吸光度上升的速度，测算出二氧化碳（碳酸氢根）含量的大小。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：王尔中，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]