三种鱼病病毒的单管RT-PCR检测的阳性对照的制备方法技术

技术编号:1755482 阅读:473 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术是一种病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒和传染性胰脏坏死症病毒的单管RT-PCR检测的阳性对照的制备方法,其特征在于,分别选取病毒性出血性败血症病毒的G基因、鱼传染性造血器官坏死症病毒的VP基因和传染性胰脏坏死症病毒的N基因作为目的基因片段,将目的基因片段插入pUC57质粒载体,再转染DH5α大肠杆菌,进行体外大量表达,分别扩增出625bp、371bp、206bp的片段。本发明专利技术方法制备的阳性对照安全、易保存,避免了现有技术中直接使用病毒感染材料易造成病毒扩散、直接用病毒感染材料提取RNA作阳性对照易降解、不易长期保存等缺陷,便于作为商品化试剂盒的阳性对照,具有很高的实用价值。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒和传染性胰脏坏死症病毒的单管RT-PCR检测的阳性对照的制备方法,其特征在于,分别选取病毒性出血性败血症病毒的G基因、鱼传染性造血器官坏死症病毒的VP基因和传染性胰脏坏死症病毒的N基因作为目的基因片段,将目的基因片段插入pUC57质粒载体,再转染DH5α大肠杆菌,进行体外大量表达,分别扩增出625bp、371bp、206bp的片段,其中,    插入的VHSV目的基因片段序列是:    agggaagatt  cctttgtccc  gattcgacca  gctcaactca  ggtgtcctca    tgaatttgaa  gacataaaca  agggactggt  ttccgtccca  actcagatca    tccatctccc  gctatcagtc  accagcgtct  ccgcagtagc  gagtggccac    tacctgcaca  gagtgactta  tcgagtcacc  tgttcgacca  gcttctttgg    agggcaaacc  atcgaaaaga  ccatcttgga  ggcgaaactg  tctcgtcagg    aggccacaaa  cgaggcaagc  aaggatcacg  agtacccgtt  cttccctgaa    ccctcctgca  tctggatgaa  aaacaatgtc  cataaggaca  taactcacta    ttacaagacc  ccaaaaacag  tatcggtgga  tctctacagc  aggaaatttc    tcaaccctga  tttcatagag  ggggtttgca  caacctcgcc  ctgtcaaact    cattggcagg  gagtctattg  ggtcggtgcc  acacctaaag  cccattgccc    cacgtcggaa  acactagaag  gacacctgtt  caccaggacc  catgatcaca    gggtggtcaa  ggcaattgtg  gcaggccatc  atccctgggg  actcacaatg    gcatgcacag  tgacattctg  cgggacagaa  tggatcaaga  ccgacctgg...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:段宏安张睿姚燕林王海涛周毅李金华刘小琴
申请(专利权)人:中华人民共和国连云港出入境检验检疫局
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

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