本发明专利技术公开了一种ＰＰＡＲ－α和ＰＰＡＲ－γ基因多态性检测芯片的制备方法和用途。在载体上设有如右所示探针。本发明专利技术的优点是：实现了对ＰＰＡＲ－α基因ｌｅｕ１６２ｖａｌ、ｖａｌ２２７ａｌａ多态性和ＰＰＡＲ－γ基因ｐｒｏ１２ａｌａ多态性进行检测，具有快速、简捷、高通量的特点，有助于肥胖、糖尿病等易感者的筛选，推动基因诊断和治疗的发展，具有重要的社会和经济效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种PPAR-α和PPAR-γ基因多态性检测芯片的制备方法和用途。
技术介绍
过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor，PPARs)由Isseman等在1990年研究小鼠肝脏cDNA文库时首先发现，是一类由配体激活的核转录因子，属于核受体超家族的成员。PPARs超家族有三个亚型PPARα、PPARγ、PPARβ/δ，均由不同的基因编码。PPARs各亚型在不同组织的表达程度不一样，PPARα主要分布在代谢活性较高的组织中，如肝、肾、心脏、肌肉组织。PPARγ主要表达于脂肪组织及免疫系统，与胰岛素抵抗关系密切。Yamakawa-Kobayashi K等研究发现PPARα的Val227Ala多态性与血脂水平有关，Ala227携带者的总胆固醇水平明显低于非Ala227携带者。Kolehmainen等对30例肥胖者进行PPARgamma2基因Pro12Ala多态性分析发现Ala12等位基因频率是13.3％，各基因型间体重、脂肪厚度及空腹血清瘦素水平没有区别。Gonzalez Sanchez JL发现肥胖男性Ala12等位基因频率(15％)明显高于非肥胖男性(8％)。携带Pro12Ala突变的患者的瘦素水平(31.4ng/ml)比非突变者(17.5ng/ml)更高。用于SNPs做基因分析是特指检测人类基因组中大量存在的单核苷酸变异，这与疾病易感性和毒物易感性有关。SNPs不仅是人类种族和个体差异的标记，亦是决定不同人群种族和个体差异的标记，可以成为寻找疾病相关基因，进行疾病诊断、预防和药物筛选的基础。用于SNPs检测的常规方法有等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交，限制性内切酶法(RFLP)，位点特异性引物PCR(PCR-SSP)和直接测序等。基因芯片技术的发展为新的SNPs的检测方法提供了可能性。寡核苷酸芯片技术是新近发展起来的一种基因检测技术，它可将大量的寡核苷酸探针有规律地排列在一张玻片上，这些探针可以与信号显示物质标记的样品DNA的扩增序列的互补序列进行相结合，通过对信号物质进行检测，对杂交结果进行计算机软件处理分析，从而获得杂交信号的强度及其分布模式图。1.Yamakawa-Kobayashi K，Ishiguro H，Arinami T，et al.A Val227Ala polymorphism inthe peroxisome proliferator activated receptor alpha(PPARalpha)gene isassociated with variations in serum lipid levels.J Med Genet.2002，39(3)189-191. 2.Kolehmainen M，Uusitupa MI，Alhava E，Laakso M，Vidal H.Effect of the Pro12Alapolymorphism in the peroxisome proliferator-activated receptor(PPAR)gamma2 gene 3.on the expression of PPARgamma target genes in adipose tissue of massively obesesubjects.J Clin Endocrinol Metab.2003 Apr；88(4)1717-1722. 4.Serrano Rios M，Fernandez Perez C，Laakso M，Martinez，Larrad MT.Effect of thePro12Ala polymorphism of the peroxisome proliferator-activated receptor gamma-2gene on adiposity，insulin sensitivity and lipid profile in the Spanish population.Eur J Endocrinol.2002；147(4)495-501. 5.Simon I，Vendrell J，Gutierrez C，Fernandez-Real JM，Vendrell I，Gallart L，FontovaR，Richart C.Pro12Ala substitution in the peroxisome proliferator-activatedreceptor-gamma is associated with increased leptin levels in women with type-2diabetes mellitus.Horm Res.2002；58(3)143-149. 6.Khner M K，Beerli P，Yamato J，et al.Usefulness of single nucleatide polymorphismdata for estimating population parameters.Genetics，2000，156439-4477.Hirschlhorn J N，Sklar P，Lindblad-Toh K，et al.SBE-TAGSan array-based method forefficient single-nucleotide polymorphism genotyping.Proc Natl Acad SciUSA，2000，9712164-12169
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种PPAR-α和PPAR-γ基因多态性检测芯片的制备方法和用途PPAR-α和PPAR-γ基因多态性检测芯片在载体上设有如下探针 PPAR-α和PPAR-γ基因多态性检测芯片制备方法步骤为1)芯片载体的处理玻片用铬酸洗液浸泡过夜，水洗，24～26％氨水中过夜，水洗，玻片浸入氨丙基三甲氧基硅烷的95％乙醇溶液中，用冰醋酸调节pH值至4～4.5，95％乙醇超声清洗，150～160℃烘干3～5小时，9～11％戊二醛处理成醛基化；2)引物及探针的合成针对PPAR-α基因leu162val、val227ala多态性和PPAR-γ基因pro12ala多态性设计了一组探针，它的长度范围在14~16个碱基(表1)，针对PPAR-α基因leu162val、val227ala多态性和PPAR-γ基因pro12ala多态性设计合成了3对引物，它的长度范围在21-22个碱基(表2)，每条引物中各有一条Cy3信号分子标记，合成后用浓氨水50～60℃脱保护，切割13～17小时，OPC柱纯化，紫外定量后真空干燥浓缩，-20℃保存备用；3)基因芯片制备及后处理将探针稀释至终浓度为100μmol/L；与点样液(750mmol/LNACl，75mmol/L 乙酸钠，5％ glycerol，1％ Ficoll and 0.1％)1∶1稀释，并取10μL至96孔板，用芯片点样仪点至醛基化玻片上，每点体积约为0.5nL，点心间距为500μm，点直径约为200μm，每条探针重复点2次，点样完毕后，室温放置24小时固相化本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ＰＰＡＲ－α和ＰＰＡＲ－γ基因多态性检测芯片，其特征在于：在载体上设有如下探针： １ＰＰＡＲ－αｌｅｕ１６２ｖａｌＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴＴＣＴＧＴＣ ２ＰＰＡＲ－αｌｅｕ１６２ｖａｌ ＣＡＡＧＴＧＣＧＴＴＴＣＴＧＴＣ ３ＰＰＡＲ－αｌｅｕ１６２ｖａｌＣＡＡＧＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＴＣ ４ＰＰＡＲ－αｌｅｕ１６２ｖａｌＣＡＡＧＴＧＣＴ ＴＴＴＣＴＧＴＣ ５ＰＰＡＲ－αｖａｌ２２７ａｌａＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＣＴＣＴ６ ＰＰＡＲ－αｖａｌ２２７ａｌａＣＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＴＣＴ７Ｐ ＰＡＲ－αｖａｌ２２７ａｌａＣＣＧＧＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴ８ＰＰＡＲ－αｖａｌ２２７ａｌａＣＣＧＧＧＴＣＡＴＣＣＴＣＴ９ＰＰＡＲ－γｐｒｏ１２ａｌａＣＴＡＴＴ ＧＡＣＡＣＡＧＡＡＡＧ１０ＰＰＡＲ－γｐｒｏ１２ａｌａＣＴＡＴＴＧＡＣＧＣＡＧＡＡＡＧ１１ＰＰＡＲ－γｐｒｏ１２ａｌａＣＴＡＴＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＡ Ｇ１２ＰＰＡＲ－γｐｒｏ１２ａｌａＣＴＡＴＴＧＡＣＴＣＡＧＡＡＡＧ。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：厉有名，陈韶华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。