污水中细菌的基因芯片检测方法技术

本发明专利技术涉及一种污水中细菌的基因芯片检测方法。本发明专利技术该方法步骤包括：目的细菌的选择、根据所选取的不同目的细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计ＰＣＲ引物和种、属检测探针、根据所设计的检测探针，制备基因芯片、目的细菌的ＤＮＡ的抽提、ＰＣＲ扩增反应、ＰＣＲ扩增反应产物的杂交、杂交后的产物清洗、干燥后扫描。本发明专利技术根据所选取的不同细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计ＰＣＲ引物和种、属检测探针，所设计的引物具有良好的特异性，对目的细菌扩增效果良好，无非特异性扩增。纯细菌ＤＮＡ的抽提方法简单易行，２ｈ内即可抽提目的细菌的ＤＮＡ且得率较高；ＰＣＲ扩增和杂交方法、条件易于实施，杂交检测结果稳定，有利于该技术的实际应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种污水中细菌的基因芯片检测方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：ａ．目的细菌的选择；ｂ．所选细菌的特异引物和种、属检测探针的设计：根据所选取的不同目的细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计ＰＣＲ 引物和种、属检测探针；ｃ．根据所设计的检测探针，制备基因芯片；ｄ．目的细菌的ＤＮＡ的抽提；ｅ．ＰＣＲ扩增反应：用所抽提的目的细菌的ＤＮＡ作为ＰＣＲ扩增反应的模板，进行线性扩增；　ｆ．ＰＣＲ扩增反应产物的杂交： 按以下配方配制杂交体系进行杂交，试剂体积６×杂交液２μＣｙ３（生物素）１μｌＳＡＣｙ３１μｌ其中，杂交液的为：２０×ＳＳＣ３０ｍｌ，５０×Ｄｅｎｈａｒｔ’ｓ１０ｍｌ，１０％ ＳＤＳ５ｍｌ，１０ｍｇ／ｍｌＳａｌｍｏｎＤＮＡ１ｍｌ，去离子水５４ｍｌ，充分混匀后，用０．４５ｕｍ滤膜去杂质；ｇ．杂交后的产物清洗、干燥后扫描。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何池全，胡永隽，肖华胜，缪金明，张庆华，徐高田，
申请(专利权)人：上海大学，上海生物芯片有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]