HPV CD8*T细胞表位制造技术

本发明专利技术提供了鉴定任何感兴趣蛋白质中的功能性ＣＤ８↑［＋］Ｔ细胞表位的方法。本发明专利技术还进一步提供了多种多样蛋白质的ＣＤ８↑［＋］Ｔ细胞表位。在另外的实施方案中，本发明专利技术提供适合在预防和／或治疗疫苗中使用的表位。在特别优选的实施方案中，本发明专利技术提供适合用于预防和／或治疗疫苗中的修饰表位。在一些优选的实施方案中，本发明专利技术提供了用于开发ＨＰＶ疫苗的方法，特别是用于预防由高危ＨＰＶ病毒株发生感染的多价疫苗。具体而言，本发明专利技术提供了在诸如ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８的ＨＰＶ病毒株中鉴定ＣＤ８↑［＋］Ｔ细胞表位的方法。在另外的实施方案中，本发明专利技术提供用于开发抗高危ＨＰＶ型的治疗疫苗的方法，该疫苗防止良性和／或恶性肿瘤在被感染个体内的发展。本发明专利技术还进一步提供了适合在预防和治疗疫苗中应用的表位。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供在任何感兴趣蛋白质中鉴定功能性CD8+T细胞表位(CD8+T-cell epitopes)的方法。本专利技术进一步提供了多种多样蛋白质的CD8+T细胞表位(CD8+T-cell epitopes)。在一些优选的实施方案中，本专利技术提供了人乳头瘤病毒(human papillomavirus(HPV))的CD8+T细胞表位。在另外的实施方案中，本专利技术提供了适合用在预防和/或治疗疫苗中的表位(epitopes)。在一些特别优选的实施方案中，本专利技术提供适合用在预防和/或治疗疫苗中的修饰表位(modified epitopes)。
技术介绍
淋巴细胞，特别是B细胞和T细胞，是参与人和其他动物的免疫应答的两种主要的细胞类型。B细胞参与免疫应答的体液方面，负责产生抗体，而T细胞参与免疫应答的细胞介导方面。然而，这两种淋巴细胞种类(two lymphocyte classes)通过由识别因素、细胞因子和免疫应答的其它成分(element)组成的复杂网络共同工作。在T细胞内，存在两种主要细胞种类，即细胞毒性T细胞(cytotoxic T-cells(Tc))和辅助T细胞(helper T-cells(Th))。一经激活，细胞毒性T细胞杀灭受感染细胞，而辅助T细胞则激活其它细胞，例如B细胞和巨噬细胞。原初T细胞 T-cells)在暴露于特定抗原之际则被激活而产生“武装的(armed)”效应T细胞，该特定抗原与主要组织相容性复合体的一个组分结合、呈递在抗原呈递细胞的表面上。这两种主要的T细胞经常被根据其细胞表面受体进行描述。细胞毒性T细胞经常被称做“CD8”(“CD8+”)细胞，辅助T细胞经常被称做“CD4”(“CD4+”)细胞。尽管它们的功能不同，CD4+和CD8+并不是彼此独立地工作。实际上，已知CD8+细胞经常依靠CD4+细胞而发动对免疫原(immunogen)的反应。因此，在杀灭受感染细胞中，CD8+细胞经常需要CD4+细胞的激活。另外，在一些情况下，似乎CD8+细胞可以有效地杀灭受感染细胞；而在有些情况下，这些细胞是无效的。然而，尽管近年来对免疫反应的了解不断加深，仍然需要可以可靠鉴定有效的CD8+细胞表位的方法，以及将有效的表位和无效的表位区分开来的方法。专利技术概述本专利技术提供在任何有价值的蛋白质上鉴定功能性CD8+T细胞表位(CD8+T-cell epitope)的方法。本专利技术进一步提供了多种蛋白的CD8+T细胞表位(CD8+T-cell epitope)。在一些实施方案中，本专利技术提供了人乳头瘤病毒(human papillomavirus(HPV))的CD8+T细胞表位。本专利技术进一步提供了适合用在预防和/或治疗疫苗中的表位(epitope)。在一些特别优选的实施方案中，本专利技术提供适合用在预防和/或治疗疫苗中的修饰表位(modified epitope)。该专利技术提供检测CD8+T细胞以功能性方式进行反应的手段。具体而言，本专利技术提供了体外方法来评估在抗体存在下的CD8+T细胞反应，这模拟了体内T-细胞激活。在一些优选的实施方案中，本专利技术提供用于鉴定感兴趣蛋白质的免疫原性(immunogenicity)的方法，包含以下步骤取得感兴趣的蛋白质；制备该感兴趣蛋白质的众多氨基酸片段，使得每一个片段在序列上都和与其相邻的片段重叠；使该感兴趣蛋白质的这些氨基酸片段与包含原初人CD8+T细胞和树突状细胞的溶液接触，其中树突状细胞已经被分化(differentiated)，并且其中CD8+T细胞在它们与树突状细胞和肽接触之前已经暴露于抗CD40抗体；以及利用该感兴趣蛋白质的这些氨基酸片段鉴定表位区域，其中鉴定步骤包括测量该表位区域刺激这些原初人CD8+T细胞的增殖的能力。在一些特别优选的实施方案中，树突状细胞和CD8+细胞从同一血液来源获得。在另外特别优选的实施方案中，在CD8+T细胞、树突状细胞(dendritic cells)和肽被组合到一起之后，抗-CD40抗体(anti-CF40antibody)被加入到该溶液中。本专利技术进一步提供了用于修饰感兴趣蛋白质的免疫原性(immunogenicity)的方法，包括以下步骤取得感兴趣蛋白质；制备该感兴趣蛋白质的众多氨基酸片段，使得每一个片段都和与其相邻的片段在序列上重叠；使包含原初人CD8+T细胞和树突状细胞的溶液与该感兴趣蛋白质的这些氨基酸片段接触，其中树突状细胞已经经过分化，并且其中CD8+T细胞在其与树突状细胞和肽接触之前已经暴露于抗CD40的抗体；以及利用该感兴趣蛋白质的这些氨基酸片段鉴定表位区域，其中鉴定步骤包括测量该表位区域刺激原初的人CD8+T细胞的增殖的能力；以及，然后，修饰该感兴趣蛋白质的该业已鉴定的表位区域，使得修饰表位的免疫原性大于或低于原始的感兴趣蛋白质的免疫原性。在一些实施方案中，多个表位被修饰。在一些特别优选的实施方案中，树突状细胞和CD8+细胞从单一血液来源获得。在另外特别优选的实施方案中，在将CD8+T细胞、树突状细胞和肽结合到一起之后，抗CD40抗体被加入到溶液中。在一些实施方案中，本专利技术提供了鉴定病毒的表位的方法和组合物，这些病毒包括但不限于HPV。具体而言，本专利技术提供修饰T细胞检测系统的应用(即I-MUNE试验)，来进行多种病毒(包括HPV)中的CD8+T细胞表位的鉴定。在另外的实施方案中，本专利技术提供用于鉴定各种HPV型的序列中的HPV表位的方法，以及肽的生产方法；当该肽被引入到HPV序列中时，可以引发CD8+T细胞反应。在一些实施方案中，该专利技术提供方法用于鉴定HPV序列中CD8+T细胞表位的方法和可以引发CD8+T细胞反应的肽的生产。具体而言，本专利技术提供用来增加HPV表位的免疫原性的方法和组合物，该HPV表位适合用于HPV疫苗制备中。在这些实施方案中，该专利技术提供用于确定人T细胞对抗多种表位，包括感兴趣蛋白质的反应的方法。在另外的实施方案中，一旦显著表位被通过使用这里描述的I-MUNE检测系统所鉴定，显著表位(significant epitopes)就被改变，从而产生可诱导针对该蛋白质的增强的免疫反应的表位。因此，如上面指出的，当与由它们的前体DNA编码的天然蛋白质比较时，本专利技术的蛋白质表现出修饰的免疫原性应答(modifiedimmunogenic responses)(例如抗原性和/或免疫原性)。例如，表现出增强的免疫原性应答的HPV(比如，变异体HPV表位)，可以在治疗和预防的疫苗组合物中发现是有用的。本专利技术还提供来自两株(human papillomavirus(HPV))的、在E7蛋白质中的CD8+T细胞表位。在一些优选的实施方案中，本专利技术提供用于开发HPV疫苗的方法，特别是开发预防由高危HPV病毒株感染的多价疫苗(multivalent vaccines)。在另外的实施方案中，本专利技术提供用于开发抗高危HPV型的治疗疫苗的方法，该疫苗适合用于阻止在受感染个体中良性和/或恶性肿瘤的发展。本专利技术进一步提供了适合用在预防和/或治疗疫苗中的表位。在一些优选的实施方案中，本专利技术提供了由序列SEQ.ID NOS1-25所示的表位。在格外优选的实施方案中，本专利技术提供了适合用在预防和/或治疗疫苗中的修饰表位。本专利技术进一步本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于鉴定ＣＤ８↑［＋］表位的方法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：FA哈丁，JM穆乔，
申请(专利权)人：金克克国际有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]