本发明专利技术提供一种液体试样中的微生物的检测试剂盒,它能够除去游离的ATP、容易而迅速地从捕捉的微生物中提取ATP并检测提取所得ATP,微生物损失少且无需熟练也能高灵敏度地稳定地检测试样中的微生物。预先在第1注射器2中吸入凝集剂3,再吸入液体试样LS进行搅拌,然后立即在其前端安装1次过滤器5和2次过滤器6,过滤该混合液15,只取下2次过滤器6,预先用第2注射器7吸入洗涤液8清洗2次过滤器6。然后,用溶菌剂9装满2次过滤器6,反应约30秒钟,将反应液16挤出到检测用试管10,加入预先调制好的发光试剂(11a+11b),安装连接器12轻轻搅拌,立即用光度计测定发光量。(*该技术在2024年保护过期,可自由使用*)
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能够以高灵敏度迅速而容易地检测那些采用通常的ATP法难以对微生物进行检测的固体食品、牛奶、乳制品等,含有大量游离ATP(体细胞ATP)的食品、水、化妆品等液体试样中的微生物的检测试剂盒和检测方法和检测装置。
技术介绍
食品等中的微生物的检测一般采用标准琼脂平板法,但该方法直到能够检测为止需要24~48小时的所谓的较长的时间,因而发生微生物污染时,无法采取迅速的对策。此外,作为更简便而迅速的微生物检出方法,已知有使用光度计测定发光量来检测微生物中的三磷酸腺苷(ATP)的量,从而计算出微生物数的生物发光法(ATP法)。但是,该方法对于微生物数少的检体液的情况,例如,微生物数103~104个/ml以下在光度计的检测限以下就无法被检出。另一方面,几乎所有的食品都含有非微生物来源的游离ATP,该游离ATP浓度很多情况会比来自微生物的ATP浓度高好几个数量级,如果不预先排除这一障碍,具有出现无法正确检测微生物中的ATP的问题。为解决这些问题,提出了过滤检体液或使用作为ATP分解酶的三磷酸腺苷双磷酸酶等预先将非微生物来源的游离ATP分解后再使用ATP法的方法。但是为了使游离ATP在短时间内分解,检测试样中的ATP分解酶的浓度必须充分高,该分解酶的浓度过高时,就会产生后续工序中抑制来自所提取的微生物的ATP的发光,检测浓度显著下降的问题。此外,也提出了过滤检体液,在过滤材料上捕捉其中含有的微生物,洗流过滤材料和附着在过滤材料上的微生物的ATP分解试剂以提甲亚砜的灭菌蒸馏水。DMSO作为溶菌剂很优异,但灭菌蒸馏水中的DMSO的含有率过少,溶菌作用(ATP提取作用)也会急剧下降,且含有率过低会使发光量下降影响检测。为此,本专利技术人经过深入实验研究的结果,发现作为溶菌剂使用含有约15容量%~约20容量%的DMSO的灭菌蒸馏水时能够得到充分的溶菌作用,且不会降低发光量,在此认知基础上实现了本专利技术。这样,制成一种液体试样中的微生物的检测试剂盒或检测方法或检测装置,它能够容易且迅速地从捕捉到的微生物中提取ATP和检测提取所得ATP,且无需熟练也可以在食品生产现场或化妆品等开发现场检查的、高灵敏度地稳定地检测试样中的微生物。权利要求15的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测试剂盒或检测方法或检测装置为,作为过滤促进剂使用乙二胺四乙酸(EDTA)的碱金属盐,反式-1,2-环己二胺四乙酸(CyDTA)的碱金属盐,乙二醇醚二胺四乙酸(GEDTA)的碱金属盐,二乙撑三胺五乙酸(DTPA)的碱金属盐,或氨基三乙酸(NTA)的碱金属盐。这里,作为碱金属优选钠或钾。这些过滤促进剂是一般作为螯合剂使用的化合物,但与凝集剂联合使用时,一般为牛奶等液体试样中含有的矿物质如使钙形成螯合物(水溶性)容易过滤。上述的过滤促进剂的添加量根据使用的过滤促进剂或液体试样的种类而不同,不能一概而论,一般来讲每1ml液体试样1mg~20mg就足够了,当过滤促进剂为EDTA的钠盐时,每1ml市售牛奶1mg~20mg就足够了。权利要求16的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测方法或检测装为,固体试样或高粘性试样与凝集剂混合前添加灭菌蒸馏水后,进行均化制成液体试样。本专利技术所述的液体试样中的微生物的检测方法不仅可应用于象牛奶等这类的最初就是液体的试样,也可用于象食肉等的固体试样中的微生物量的检测。其时,添加灭菌蒸馏水后,进行均化制成液体试样。取微生物中的ATP的方法。但是该方法仅限用于容易过滤的食品试样(醇饮料或调味料汁等),像市售牛奶或乳制品那样的、含有大量蛋白质或脂质、无脂肪固体成分的浊度高的试样,由于过滤困难而不适用此法。也提出了稀释处理这种难以过滤的乳制品试样,检测其稀释液中的微生物ATP的方法。在该方法中,采取试样0.1ml,向其中加入处理液0.1ml,稀释液0.7ml,ATP消除剂0.1ml进行混合,从此混合物1.0ml中分取0.1ml到检测试管放置30分钟,然后添加发光试剂0.1ml,用光度计测定发光量。这种方法中,由于是检测0.01ml的所谓极微量的试样中的微生物ATP,发光量也极少。因此,如果试剂空白值不是比通常的发光量(RLU)50以下的低值,就无法得到正确的检测结果。因此出现需要检查所使用的处理液、稀释液、提取剂、高灵敏度发光试剂有无污染等诸多问题。于是,本专利技术人在专利文献1中公开了以下方法,即,将食品试样与磷酸系凝集剂和乙二胺四乙酸盐等过滤促进剂混合,通过重力进行自然过滤后,将滤液用膜滤器减压过滤,捕捉浓缩滤膜上的试样中的微生物,用洗涤液洗涤滤膜上的非微生物来源的游离ATP,将其除去后,向微生物中加入ATP提取试剂(溶菌剂),向提取液中加入发光试剂,通过检测产生的发光量检测食品中的微生物的方法。该方法能够比以往的方法更显著容易、迅速且高灵敏度地检测微生物。专利文献1特开2003-284589号公报
技术实现思路
专利技术要解决的课题但是,上述专利文献1所公开的方法中,由于使用了磷酸系凝集剂,若非熟练技术人员,有时在凝集反应时使蛋白质和微生物无差别地凝集,造成了试样中的微生物的损失,并且,提取ATP时磷酸系凝集剂覆盖住了微生物而使溶菌剂难以奏效,必须使用大量洗涤液来清洗,这有可能成为检查结果不稳定的主要原因。因而,本专利技术的课题是提供一种液体试样中的微生物的检测试剂盒和检测方法及检测装置,它可以除去游离的ATP,容易而迅速地从捕捉的微生物中提取ATP并检测所提取的ATP,完全无需用洗涤液清洗,或无需用大量洗涤液清洗,试样中的微生物的损失少,而且无需熟练,可以在食品生产现场或化妆品等开发现场检查的、高灵敏度稳定地检测试样中的微生物。解决课题的手段权利要求1的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测试剂盒具备以下构成采集液体试样的第1注射器,在上述第1注射器中使上述液体试样中的蛋白质凝集的凝集剂,配有捕捉上述凝集的蛋白质和体细胞并透过游离ATP(三磷酸腺苷)微生物的1次膜滤器并能安装在上述第1注射器上的1次过滤器,配有捕捉上述微生物并透过上述游离ATP的2次膜滤器并能够安装在上述1次过滤器上的2次过滤器,能够安装在上述2次过滤器的前端的第2注射器,用于清洗上述2次膜滤器的洗涤液,溶解被上述2次膜滤器捕捉到的上述微生物并使ATP溶出的溶菌剂,收集上述溶出的ATP和溶菌剂的检测用试管,和使上述溶出的ATP发光的发光试剂。权利要求2的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测试剂盒为在权利要求1的构成中还具备用于测定发光量的光度计,和用于使上述检测用试管的前端能够到达上述光度计的发光检测部而安装在上述检测用试管上的连接器。权利要求3的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测试剂盒为在权利要求1或权利要求2的构成中还配备有用于使过滤在短时间内进行的过滤促进剂,或使用预先混入了上述过滤促进剂的物质作为上述凝集剂。权利要求4的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测试剂盒为在权利要求1至权利要求3中任一项的构成中,上述1次膜滤器和上述2次膜滤器分别组装入上述1次过滤器和上述2次过滤器成为一体并在使用完毕后被弃去。权利要求5的专利技术所述的液体试样中的微生物的检测方法包括将液体试样与使该液体试样中的蛋白质凝集的凝集剂混合的工序,用1次膜滤器加压过滤或减压过滤以捕捉上述凝集的蛋白质和体细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种液体试样中的微生物的检测试剂盒,其特征在于,具备以下构成:采集液体试样的第1注射器,在上述第1注射器中使上述液体试样中的蛋白质凝集的凝集剂,配有能捕捉上述凝集的蛋白质和体细胞并可透过游离ATP(三磷酸腺苷)和微生 物的1次膜滤器并可安装在上述第1注射器上的1次过滤器,配有能捕捉上述微生物并可透过上述游离ATP的2次膜滤器并可安装在上述1次过滤器上的2次过滤器,能够安装在上述2次过滤器的前端的第2注射器,用于清洗上述2次膜滤器的 洗涤液,溶解被上述2次膜滤器捕捉到的上述微生物并使ATP溶出的溶菌剂,同时收集上述溶出的ATP和溶菌剂的检测用试管,和使上述溶出的ATP发光的发光试剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员:田中孝二郎,
申请(专利权)人:株式会社DML,
类型:发明
国别省市:JP[日本]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。