一种具槽石斛组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种具槽石斛组织培养方法，包括具槽石斛种子培养萌发成原球茎，壮苗培养，诱导生根，炼苗四个步骤，所述具槽石斛种子培养萌发成原球茎中使用的种子培养基包含以下成分：硝酸钾1600mg/L、硝酸铵1250mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙440mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸锰16.9mg/L、硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化钾0.83mg/L、钼酸钠0.25mg/L、Na2‑EDTA 37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、NAA0.1‑1.8mg/L、6‑BA0.5‑1.5mg/L、马铃薯100000mg/L、碳粉250mg/L、蔗糖30000mg/L、水解乳蛋白700mg/L、琼脂4500mg/L。该方法的具槽石斛种子萌发率高，在90％以上，繁殖率得到极大的提高。

A method for tissue culture of Dendrobium

The invention discloses a tissue culture method of Dendrobium groove, including sulcate seed culture of Dendrobium protocorm germination, seedling culture, rooting and seedling of four steps, the cultivation of Dendrobium seed germination with a groove into the protocorms of seed culture medium comprises the following components: potassium nitrate, ammonium nitrate 1250mg/L 1600mg/L Magnesium Sulfate, 370mg/L, 170mg/L potassium dihydrogen phosphate, calcium chloride 440mg/L, copper sulfate, cobalt chloride, 0.025mg/L 0.025mg/L, 16.9mg/L 8.6mg/L, manganese sulfate, zinc sulfate, boric acid 6.2mg/L, sodium molybdate, potassium iodide 0.83mg/L 0.25mg/L Na2 EDTA 37.3mg/L, ferrous sulfate 27.8mg/L, glycine 2.0mg/L, thiamine hydrochloride, pyridoxine hydrochloride, 0.1mg/L 0.5mg/L, 0.5mg/L 100mg/L, inositol nicotinate NAA0.1 1.8mg/L, 6 BA0.5 1.5mg/L, potato 100000mg/L, sucrose 30000mg/L, 250mg/L powder, hydrolyzed milk Protein 700mg/L, agar 4500mg/L. The seed germination rate of Dendrobium officinale was higher than 90%, and the reproduction rate was greatly improved.

【技术实现步骤摘要】
一种具槽石斛组织培养方法
本专利技术涉及一种具槽石斛组织培养方法。
技术介绍
具槽石斛(学名：DendrobiumstuposumLindl.)：茎通常直立，肉质，扁棒状，下部收狭为细圆柱形，不分枝，具纵条纹和数个节。叶纸质，数枚，互生于茎的近顶端，常斜举，长圆形。总状花序从当年生具叶的茎上端发出，长8-15厘米，下垂，密生少数至多数花；花质地薄，白天张开，晚间闭合，奶黄色；花瓣近倒卵形，长2.4厘米，宽1.1厘米，先端锐尖，基部收狭为短爪，具5条脉；唇瓣的颜色较深，呈橘黄色，近基部两侧各具1个褐色斑块，近圆形。生于海拔700-800米的密林中树干上。产中国云南南部，锡金、印度东北部、缅甸、泰国、老挝也有分布。具槽石斛观赏价值极高，花姿优雅，玲珑可爱，花色鲜艳，气味芳香，被喻为“四大观赏洋花”之一，既可作切花，也可盆栽观赏，家有数盆热闹非凡，具有非常好的市场前景。具槽石斛是一种喜阴凉的多年生草本植物，喜在温暖、潮湿、以年降雨量1000毫米以上、半阴半阳的环境，1月平均气温高于8℃的亚热带深山老林中生长为佳，适宜生长温度为15到28度，适宜生长空气湿度为60％以上，对土肥要求不甚严格，野生多在疏松且厚的树皮或树干上生长，有的也生长于石缝中。每年春末夏初，具槽石斛二年生茎上部节上抽出花序，开花后从茎基长出新芽发育成茎，秋冬季节进入休眠期。为了满足市场需求，具槽石斛目前通过人工培养方式进行快速繁殖，通常采用的繁殖方式有扦插繁殖和组织培养快繁。其中，组织培养快繁虽然在一定程度上加快了具槽石斛繁殖，但是不管采用瓶外生根或者瓶内生根的方法，仍然存在萌发率低及生根率低的问题，而且苗的成活率很低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具槽石斛组织培养方法。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用以下技术方案：一种具槽石斛组织培养方法，包括具槽石斛种子培养萌发成原球茎，壮苗培养，诱导生根，炼苗四个步骤，其中所述具槽石斛种子培养萌发成原球茎、壮苗和诱导生根中使用的培养基分别如下：表1.种子培养基配方试剂名称含量(mg/L)试剂名称含量(mg/L)硝酸钾1600硫酸亚铁27.8硝酸铵1250甘氨酸2.0硫酸镁370盐酸硫胺素0.1磷酸二氢钾170盐酸吡哆醇0.5氯化钙440烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇100氯化钴0.025NAA0.1-1.8硫酸锰16.96-BA0.5-1.5硫酸锌8.6马铃薯100000硼酸6.2碳粉250碘化钾0.83蔗糖30000钼酸钠0.25水解乳蛋白700Na2-EDTA37.3琼脂4500mg/L表2.壮苗培养基配方试剂名称含量(mg/L)试剂名称含量(mg/L)硝酸钾2000硫酸亚铁27.8硝酸铵1750甘氨酸2.0硫酸镁370盐酸硫胺素0.2磷酸二氢钾170盐酸吡哆醇0.65氯化钙550烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇50氯化钴0.025NAA0.1-1.8硫酸锰16.96-BA0.5-1.5硫酸锌8.6香蕉200000硼酸6.2碳粉500碘化钾0.83蔗糖30000钼酸钠0.25琼脂4500Na2-EDTA37.3表3.生根培养基配方所述种子培养萌发成原球茎步骤中，成熟具槽石斛种子经消毒处理后播种于种子培养基中培养，7-10天转绿，继续培养20-30天，经过种胚膨大、萌发形成绿色原球茎；培养条件为25-26℃，光照为1600-1800lx，光照时间为8-12h/d。所述的消毒处理过程为：自来水加洗洁精冲洗3分钟后用75％酒精消毒30秒，之后用35％双氧水消毒10分钟，然后用无菌水冲洗三次。所述壮苗步骤中，原球茎转入壮苗培养基中进行壮苗培养，经过80-90天壮苗培养，获得高度达到1.5-4cm的幼苗，培养条件：温度25-26℃，光照度1900-2100lx，光照时间为10-15h/d。本专利技术具有以下优点：1.本专利技术提供具槽石斛的组织培养方法，具槽石斛种子萌发率高，在90％以上，繁殖率得到极大的提高。所获得的幼苗粗壮，主根系发达，种植成活率在95％以上。2.种子培养基对具槽石斛种子的萌发有重要影响，本专利技术提供的种子培养基可以使具槽石斛种子萌发在90％以上，并缩短了转绿时间。3.本专利技术采用的壮苗培养基可以促进原球茎生成粗壮的幼苗。4.本专利技术采用的生根培养基可以促进幼苗生根，所得的主根系发达，有利于在炼苗及种植中成活。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求范围内所做的有限修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围内。实验例一取成熟具槽石斛种子进行消毒处理，用自来水加洗洁精冲洗3分钟，然后75％酒精消毒30秒，再用35％双氧水消毒10分钟，最后用无菌水冲洗三次后播种于种子培养基中培养，待转绿后，继续培养20-30天，经过种胚膨大、萌发形成绿色原球茎。培养条件为25-26℃，光照为1600-1800lx，光照时间为10h/d。本专利技术采用的种子培养基为在种子改良MS培养基(以下简称为种子改良MS)的基础上添加NAA0.1-1.8mg/L、6-BA0.5-1.5mg/L、马铃薯100000mg/L和水解乳蛋白700mg/L构成。其中的种子改良MS培养基包含以下组分：硝酸钾1600mg/L、硝酸铵1250mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙440mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸锰16.9mg/L、硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化钾0.83mg/L、钼酸钠0.25mg/L、Na2-EDTA37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、碳粉250mg/L、蔗糖30000mg/L、琼脂4500mg/L。表4不同种子培养基种子萌发情况种子培养基及组合萌发率％转绿时间(天)MS培养基5515种子改良MS7512种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯8010种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯+NAA0.1+6-BA0.58010种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯+NAA0.6+6-BA0.8808种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯+NAA0.9+6-BA1.0957种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯+NAA1.2+6-BA1.64010种子改良MS+水解乳蛋白+马铃薯+NAA0.6+6-BA0.3709由表4结果可见，本专利技术提供的种子培养基较普通MS培养基大大地提高了种子萌发率，而且芽转绿时间也明显缩短，说明本专利技术的种子培养基与现有MS培养基相比更适合具槽石斛种子的萌发和生长，而且其中，激素组合优选NAA0.9mg/L和6-BA1.0mg/L。实验例二将具槽石斛原球茎转入壮苗培养基中进行壮苗培养，进行80-90天壮苗培养，培养条件：温度25-26℃，光照度1900-2100lx，光照时间为12h/d。本专利技术采用的壮苗培养基为在壮苗改良MS培养基(以下简称为壮苗改良MS)的基础上添加NAA0.1-1.8mg/L、6-BA0.5-1.5mg/L和香蕉200000mg/L构成。其中，壮苗改良MS培养基包含以下组分：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1750mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具槽石斛组织培养方法，包括具槽石斛种子培养萌发成原球茎，壮苗培养，诱导生根，炼苗四个步骤，其特征是，所述具槽石斛种子培养萌发成原球茎中使用的种子培养基包含以下成分：硝酸钾1600mg/L、硝酸铵1250mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙440mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸锰16.9mg/L、硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化钾0.83mg/L、钼酸钠0.25mg/L、Na2‑EDTA 37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、NAA 0.1‑1.8mg/L、6‑BA 0.5‑1.5mg/L、马铃薯100000mg/L、碳粉250mg/L、蔗糖30000mg/L、水解乳蛋白700mg/L、琼脂4500mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种具槽石斛组织培养方法，包括具槽石斛种子培养萌发成原球茎，壮苗培养，诱导生根，炼苗四个步骤，其特征是，所述具槽石斛种子培养萌发成原球茎中使用的种子培养基包含以下成分：硝酸钾1600mg/L、硝酸铵1250mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙440mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸锰16.9mg/L、硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化钾0.83mg/L、钼酸钠0.25mg/L、Na2-EDTA37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、NAA0.1-1.8mg/L、6-BA0.5-1.5mg/L、马铃薯100000mg/L、碳粉250mg/L、蔗糖30000mg/L、水解乳蛋白700mg/L、琼脂4500mg/L。2.根据权利要求1所述的具槽石斛组织培养方法，其特征是，所述壮苗培养中使用的壮苗培养基包含以下成分：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1750mg/L、硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙550mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸锰16.9mg/L、硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化钾0.83mg/L、钼酸钠0.25mg/L、Na2-EDTA37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.2mg/L、盐酸吡哆醇0.65mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇50mg/L、NAA0.1-1.8mg/L、6-BA0.5-1.5mg/L、香蕉200000mg/L、碳粉500mg/L、蔗糖30000mg/L、琼脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂湘炎，曾少兰，吴华球，
申请(专利权)人：容县明曦铁皮石斛种植场，
类型：发明
国别省市：广西,45