人类肝脏表达序列标签H组制造技术

本发明专利技术公开了一类人类肝脏表达序列标签。利用本发明专利技术的在人类肝脏中表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝脏中表达的相关基因，从而在研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一类表达序列标签，尤其涉及一类人类肝脏表达序列标签。
技术介绍
肝脏是人体内最大的消化腺。也是体内新陈代谢的中心站。据估计，在肝脏中发生的化学反应有500种以上，实验证明，动物在完全摘除肝脏后即使给予相应的治疗，最多也只能生存50多个小时。这说明肝脏是维持生命活动的一个必不可少的重要器官。肝脏的血流量极为丰富，约占心输出量的1/4。每分钟进入肝脏的血流量为1000-1200ml。肝脏的主要功能是进行糖的分解、贮存糖原；参与蛋白质、脂肪、维生素、激素的代谢；解毒；分泌胆汁；吞噬、防御机能；制造凝血因子；调节血容量及水电解质平衡；产生热量等。在胚胎时期肝脏还有造血功能。肝脏疫病分为肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等。现代医学实验证明，肝病病毒侵入人体后，并不直接引起肝细胞的损害，只是在肝细胞内吸收营养赖以生存，并在肝细胞内复制、繁殖。其复制病毒的“零部件”如表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)释放在肝细胞膜上，引起人体免疫系统对这些抗原物质产生免疫反应，这种反应造成肝细胞的损伤、坏死。免疫反应的强弱决定于肝脏受损程度及临床症状轻重。这场由病毒引发的、免疫系统对肝细胞的战争，使大约25％的患者的肝脏成为战火连绵的战场，肝脏的损伤由此加重。肝病的危害绝不仅仅限于肝脏本身，它还可以引起其它多种疾病。常见的有(1)糖尿病；(2)胰腺炎；(3)胆道感染；(4)功能性肾衰竭；(5)胆汗性肾病；(6)肾小球肾炎；(7)肾小管酸中毒；(8)溶血性贫血；(9)再生障碍性贫血；(10)心肌炎和心包炎；(11)结节性动脉炎；(12)消化性溃疡；(13)自发性腹膜炎；(14)性激素代谢紊乱；(15)甲状腺功能改变；(16)肝性骨病，等等。肝病不仅对患者的身体甚至生命造成危害，而且对患者心理上的打击也是十分沉重的。无论是肝病患者还是病毒携带者，在生活、社交、求职、升学等方面都会受到严重影响。生物基因组中可转录表达的序列(即基因)仅占总序列的3-5％，对这部分序列进行测定，将直接导致新基因的发现，并获取基因组中与产业化关系最为密切的信息。20世纪80年代，高通量的自动测序的出现，使从质粒互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库随机选取许多cDNA克隆和决定来自非载体两端的几百个碱基的DNA序列成为可能。这些短的DNA序列叫做“表达序列标签”(Expressed Sequence Tags，简称ESTs)。表达序列标签的概念最早是由Adams等在1992年提出来的(Nature，355，642-644)。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic Acids Res.19，1837-1843；Matsubara，et al.Nature Genetics，2，173-179)针对获得大量信使核糖核酸(mRNA)序列的迫切需要，提出大规模互补脱氧核糖核酸(cDNA)测序的研究战略。随后Venter创立了大规模表达序列标签技术。其基本特征就是从以质粒为载体，构建完成的目的组织互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库中，随机选择许多cDNA克隆，利用质粒上携带的通用引物对cDNA两端进行一轮脱氧核糖核酸序列测定，所获得的来自3’端或5’端的几百个碱基的非载体短脱氧核糖核酸(DNA)序列。简而言之，表达序列标签是来自表达基因片段3’端或5’端的短脱氧核糖核酸序列，代表一个表达基因的部分转录片段。表达序列标签可用于新基因克隆、人类基因组图谱绘制、基因组序列编码区的确定等。如果一个表达序列标签在基因组中只出现一次，那么它可以作为序列标签位点(STS)。由表达序列标签构建的物理图谱叫表达图或转录图(expression ortranscript map)。利用表达序列标签进行基因图制作，可以加快序列标签位点的制作和新基因的染色体定位。表达序列标签可以作为基因特异性探针，对组织特异性基因表达的研究具有重要的作用。表达序列标签还可以进行新基因的遗传进化关系分析。表达序列标签可以对所有动植物的基因作为一种数据库，通过不同的序列比较可以获得保守序列片段，从而获得基因的遗传进化图谱。正因为表达序列标签具有如此的优越性，因此表达序列标签测序已经成为许多基因组研究机构的工作重点。由于本专利技术人类肝脏表达基因与一些肝脏疾病相关，因此，研究人类肝脏中表达的表达序列标签对探索肝脏疾病的发病机理及研制肝病的治疗药物具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一类人类肝脏表达序列标签。本专利技术要解决的技术问题通过如下技术方案实现本专利技术提供一类人类肝脏表达序列标签的序列，其包括(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列；(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列的互补序列；(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列，及(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。较佳地，所述序列包括具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列。本专利技术还提供了一种探针分子，所述的探针分子含有上述序列中约8-100个连续的核苷酸。由本专利技术的在人类肝脏中表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝脏中表达的相关基因，从而在研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物中发挥重要作用。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不是限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1人肝脏组织的mRNA的分离组织分离(Tissue isolation)肝脏来源于5个成年男性，在肝脏切除手术后，将肝脏组织立即置于液氮中冷冻保存。mRNA的分离(mRNA isolation)取出肝脏组织，用研钵研碎，加入盛有裂解液的50ml管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内，匀浆后移至50ml新管，抽提总RNA(TRIzol Reagents，Gibco，NY，USA)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量。用带Oligod(T)的纤维素柱分离总RNA中的mRNA，定量。实施例2cDNA文库的构建(Constuction of cDNA library)以mRNA为模板，合成双链cDNA。补平末端后，加含EcoRI切点的接头。磷酸化EcoRI末端后，用XhoI限制性内切酶消化1.5小时，再进行片断分离。过柱筛选长度＞500bp的片段，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，无菌水溶解，连接至Uni-ZAP XR载体(Strategene，CA9203，USA)，以ZAP-cDNA Gigapack III Gold Cloning Kit(Strategene，CA9203，USA)进行包装，宿主菌使用XL 1 Blue MRF’(Strategene，CA9203，USA)细菌。涂板并测定滴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一类人类肝脏表达序列标签的序列，其包括：（ａ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．５０所示的序列；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．５０所示的序列中每条序列的互补序列；（ｃ）与 ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．５０所示的序列中每条序列有至少７０％同源性的序列，及（ｄ）上述（ａ）～（ｃ）中一条或数条的组合。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄健，韩泽广，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]