多态性位点基因型预测同型半胱氨酸水平的用途、方法和试剂盒技术

ＭＴＨＦＲ基因的多态性位点基因型用于预测同型半胱氨酸水平和／或同型半胱氨酸相关联疾病发生的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的多态性位点基因型用于预测同型半胱氨酸水平和/或同型半胱氨酸相关联疾病发生的用途。本专利技术还涉及一种用于测定MTHFR基因的多态性位点基因型的多态性分型寡核苷酸，一种通过测定MTHFR基因的多态性位点基因型，预测同型半胱氨酸水平和/或同型半胱氨酸相关联疾病发生的方法和试剂盒。本专利技术属于医药领域。
技术介绍
人体内同型半胱氨酸(Hcy，homosysteine)作为蛋氨酸代谢的中间产物，其本身并不参与蛋白质的合成。同型半胱氨酸主要通过两条途径进行代谢再甲基化途径和转硫途径。再甲基化途径约有50％同型半胱氨酸在蛋氨酸合酶的作用下，以维生素B12为辅因子，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，发生再甲基化，重新合成蛋氨酸，参加体内蛋白质的代谢。这一反应中的甲基供体(N-5甲基四氢叶酸)是由N-5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR，methylene tetrahydrofolate reductase)作用于N-5，10-亚甲基四氢叶酸形成的。另外，约50％的同型半胱氨酸也可通过转硫途径在胱硫醚β合酶(CBS，cystathionine β-synthase)的催化下，与丝氨酸缩合成胱硫酶，后者进一步生成半胱氨酸和α-酮丁酸，此过程需要磷酸吡哆醛(活性维生素B6)作为辅助因子TIPS，1990，11411-416。高Hcy血症的形成涉及多种因素，包括遗传、营养、药物及其他因素等Cattaneo M.Hyperhomocysteinemia，atherosclerosis and thrombosis.Thromb Haemost，1999，81165-176。遗传性Hcy血症主要是由于胱硫醚β合成酶、甲硫氨酸合成酶(MS)及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性降低所致。MTHFR是N5-甲基四氢叶酸形成的关键酶，MTHFR基因C677T突变可致酶活性下降，使蛋氨酸循环障碍，血中Hcy水平升高。在已经发现的人类MTHFR基因突变中，多数是可以导致酶活性严重下降甚至酶活性缺失的突变，在人群中罕见，而第677位核苷酸的基因突变(C→T)引起该酶活性轻中度降低，同型半胱氨酸浓度增高Circulation，1996，943074-3078。Brattstrom等Circulation，1998，98(23)2520-2526总结了3年中所进行的13项血浆Hcy水平与MTHFR基因型的研究和23项病例对照研究，共涉及5869例心血管病患者和6644例健康对照者，发现TT型血浆Hcy水平显著高于CC型。高同型半胱氨酸血症与多种疾病以及疾病的并发症相关。高同型半胱氨酸血症可造成血管内皮损伤和功能异常，刺激血管平滑肌细胞增生，引起血管舒缩因子平衡紊乱，导致妊娠高血压综合征(PIH)。因此，多数研究认为MTHFR基因是PIH的主要候选基因中国公共卫生，2004，20，6762-764。目前广泛认为，除心血管病的传统危险因素外，同型半胱氨酸是动脉粥样硬化性血管疾病又一个强有力的预测因子。血液中总的同型半胱氨酸(total homocysteine，tHcy)水平升高可导致冠心病、脑血管病、外周血管病、动静脉血栓栓塞性疾病等。近年来基础与临床研究均显示，tHcy是心脑血管疾病独立的危险因素。高tHcy血症可促发所有重要的心脑血管疾病发生，包括冠心病、脑卒中、肾功能损害、外周血管疾病等心血管病学进展，2000，2129。大量的事实表明轻度到中度tHcy血症(tHcy浓度≥12μmol/L，但≤100μmol/L)是动脉粥样硬化所致心血管疾病最广泛、最强的、独立的危险因素。Sutton等Circulation，1997，961745认为血Hcy水平与单纯收缩期高血压独立相关。有报道认为，Hcy代谢关键酶的基因多态性与单纯收缩期高血压的发生关系密切。MTHFR可能是单纯收缩期高血压的易感基因，tHcy是单纯收缩期高血压的重要中间表型中华心血管病杂志，2003，31269-273。Lim等Am J Epidemiol，2002，1561105-1113认为高水平的Hcy可增加发生高血压的危险性。高同型半胱氨酸血症(HHcy)是高血压病人死亡和左心室射血分数(LVEF)低的独立预测因子Arterioscler Thromb Vasc Biol2005，25115-121。高血压病患者中tHcy水平较高，可能是较易发生心、脑、肾等靶器官损害的一个重要因素。Jacques等Am J Clin Nutr.1999，69(3)482-489在美国第三次全国营养与健康调查研究的基础上，对具有美国人口代表性的、年龄在12岁以上的3766例男性和4819例女性血清Hcy水平进行了检测。结果显示，在非西班牙裔白人中，血清Hcy浓度的几何均数分别为男性9.6μmol/L、女性7.9μmol/L；在非西班牙裔黑人分别为男性9.8μmol/L、女性8.2μmol/L；在墨西哥裔男性9.7μmol/L、女性7.4μmol/L。对北京城乡35～64岁男女两性1168例血浆Hcy水平分布特点和相关因素进行的研究中华流行病学杂志，2002，23(1)32-36结果显示，血浆Hcy几何均数男性高于女性(15.4μmol/L vs 12.2μmol/L，P＜0.001)；血浆Hcy分布存在着城乡差别，农村男性(18.0μmol/L)是城市男性(12.0μmol/L)的1.5倍(P＜0.001)，农村女性(12.9μmol/L)是城市女性(9.6μmol/L)的1.3倍(P＜0.001)；北京城乡35～64岁人群中高Hcy血症(Hcy≥16μmol/L)的患病率为15.3％。相关因素分析显示，北京地区人群血浆Hcy水平的分布存在着年龄、性别和城乡间差别；北京地区人群Hcy水平及高Hcy血症的患病率明显高于西方发达国家，尤其是农村地区；城乡间Hcy水平的差别可能更大程度反映了环境因素的影响。在血浆中，Hcy有三种形式Hcy、双硫Hcy-Hcy和双硫Hcy-半胱氨酸。在正常人体内游离型Hcy仅为血中总tHcy的2％左右。约80％Hcy以双硫键与白蛋白结合。双硫Hcy-Hcy和Hcy-半胱氨酸约为血中tHcy的10％～15％。测定Hcy的方法较多，目前常用的有①高效液相色谱法(HPLC)；②酶免疫分析法(EIA)；③离子色谱法；⑤荧光偏振免疫分析法。目前临床常用且比较成熟的方法是高效液相色谱和气相色谱质谱联用法。但是都存在操作比较复杂、试验耗时较长、重复性欠佳、成本较高、不易普及推广等缺陷。一项孕前基因报警诊断试剂盒及其检测方法已于2001年4月2日申请专利，专利申请号为01107305.5，授权公告号为CN1155722C。该专利技术为孕前基因报警诊断试剂盒及其检测方法。所说的报警基因包括亚甲基四氢叶酸还原酶基因和甲硫氨酸合酶还原酶基因，其突变位点分别为C677T和A66G，并且分别提供了相应的引物序列，可在孕前诊断子代是否发生神经管畸形。由于同型半胱氨酸为很多疾病特别是心脑血管性疾病的危险因素，同型半胱氨酸的水平与疾病的发生、发展以及预后等密切相关，而临床常用的测定同型半胱氨酸的检测方法存在一定缺陷，而且缺乏预见本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐希平，戴成祥，王燕，蒋善群，张克荣，毛广运，张善春，王梦德，刘平，王玉，邢厚恂，
申请(专利权)人：北京华安佛医药研究中心有限公司，安徽省生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：