禽流感病毒PCR扩增和杂交检测与分型方法及其试剂盒技术

本发明专利技术涉及禽流感病毒的ＰＣＲ扩增和核酸杂交检测与分型的方法，以及禽流感病毒的检测试剂盒。本发明专利技术所述的禽流感病毒检测及分型方法，是对ＡＩＶ的基因组核酸进行ＰＣＲ反应后利用ＰＣＲ产物进行核酸杂交，通过酶标记的ＡＩＶ通用型和亚型特异性探针进行禽流感病毒的检测和分型。涉及的禽流感病毒包括通用型和Ｈ１、Ｈ３、Ｈ５、Ｈ７、Ｈ９、Ｎ１、Ｎ２等目前主要流行的亚型。本发明专利技术还提供了一种禽流感病毒的检测试剂盒。本发明专利技术提供的检测方法使用的主要试剂均来源于本发明专利技术所包括的试剂盒，实验流程少，操作简便易行，消耗费用低。和其他禽流感病毒检测的方法相比较，本发明专利技术的优势还在于进行检测的同时可以对禽流感病毒进行分型。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种禽流感病毒ＰＣＲ扩增和杂交检测与分型方法，其特征在于，包括以下步骤：　　　　ａ）分析在国际基因数据库ＧｅｎＢａｎｋ中登录的所有禽流感病毒即ＡＩＶ基因组全序列，确定针对ＡＩＶ通用型和ＡＩＶ主要亚型即Ｈ１、Ｈ３、Ｈ５、Ｈ７、Ｈ９、Ｎ１、Ｎ２亚型的高度保守的特异性核酸序列作为靶序列；　　　　ｂ）针对所述靶序列设计并合成ＡＩＶ通用型和各主要亚型的特异性引物；　　　　ｃ）针对所述靶序列位于所述引物之间的序列设计并合成ＡＩＶ通用型和各主要亚型的扑获探针和生物素标记的杂交探针；　　　　ｄ）提取待检样本ＲＮＡ，在包含所述引物的ＲＴ－ＰＣＲ反应液中进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到样本ｃＤＮＡ；　　　　ｅ）将所述的生物素标记杂交探针和变性液加入ＰＣＲ产物中，进行变性反应；　　　　ｆ）将变性产物与杂交液加入包含所述扑获探针的检测条中，进行杂交反应；以及　　　　ｇ）显色和终止反应，通过检测条的显色条带，判断待检样本是否含有禽流感病毒以及确定病毒的分型。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈守义，刘金株，
申请(专利权)人：广州市疾病预防控制中心，珠海汇康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]