本发明专利技术公开了一种检测肺癌易感性的试剂盒。该试剂盒包括同时检测ＥＲＣＣ２基因上的ｒｓ１７９９７９３号ＳＮＰ位点、ＣＹＰ１Ａ１基因上的ｒｓ１０４８９４３号ＳＮＰ位点和ＸＲＣＣ１基因上的ｒｓ２５４８７号ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针、用于荧光定量ＰＣＲ检测的常规组件等。本发明专利技术的试剂盒通过同时检测分析个体的ＥＲＣＣ２基因、ＣＹＰ１Ａ１基因和ＸＲＣＣ１基因上的ＳＮＰｓ位点基因携带型来预测个体对肺癌的易感性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，尤其是一种检测肺癌易感性的试剂盒，通过同时检测切 除修复复合物2 (Excision Repair Cross-complementing Rodent Repair Deficiency, Complementation Group 2， ERCC2)、细胞色素P4501A1酶基因(cytochrome P450， family 1 ， subfamily A， polypeptide 1, CYP1A1)和 X射线交错互补修复基因l (X-ray repair cross--complementing gene 1, XRCC1)的单核苷酸多态性位点 (SNP)来预测个体对肺癌的易感性。
技术介绍
原发性支气管肺癌，简称肺癌，为当前世界各地最常见的恶性肿瘤之一，是一种严重威胁人类健康和 生命的疾病。肿瘤细胞源于支气管粘膜或腺体，常有区域性淋巴结和血行转移，早期常有刺激性咳嗽、痰 中带血等呼吸道症状，病情进展速度与细胞的生物特性有关。半个世纪以来，世界各国肺癌的发病率和病死率都有明显增高趋势。世界卫生组织(WHO)2000年报告 1997年全世界死于恶性肿瘤的共706.5万人，占死亡人数的12.6%，其中肺癌占恶性肿瘤死亡的19%,居 恶性肿瘤死因的第一位。我国1990 1992年的抽样调査显示，在城市人口的肿瘤死亡中，肺癌由原来的 第4位上升为第1位，农村上升最快的也是肺癌。云南锡矿的肺癌发病率在1954 1959年间为28.02/10 万，1960 1969年间为197.87/10万，1970 1979年间上升到219.10/10万，这在全世界也是罕见的。英国 著名肿瘤学家R.Peto预言如果我国不及时控制吸烟和空气污染，到2025年我国每年肺癌将超过100万， 成为世界第一肺癌大国。病因和发病机制迄今尚未明确。 一致认为肺癌的发病与下列因素有关①吸烟(包括主动吸烟和被动 吸烟)；②职业致癌因子，已被确认的致人类肺癌的职业因素包括石棉、无机砷化合物、二氯甲醚、铬及 其化合物、镍、氡、芥子气、氯乙烯、煤烟、焦油和石油中的多环芳烃、烟草的加热产物等；③空气污染 (包括室内小环境和室外大环境污染)；④电离辐射；⑤饮食与营养，美国纽约和芝加哥开展的前瞻性人 群观察的结果说明，食物中天然维生素A类、e胡萝卜素的摄入量与十儿年后癌症的发生呈负相关，其中 最突出的是肺癌；⑥其他，美国癌症学会将结核列为肺癌的发病因素之一。有结核病者患肺癌的危险性是 正常人群的10倍。其主要组织学类型是腺癌。此外，病毒感染、真菌毒素(黄曲霉)、机体免疫功能低下、 内分泌失调以及家族遗传等因素，对肺癌的发生可能也起一定的综合作用。近年研究表明，肺癌的发生与某些癌基因的活化及抑癌基因的失活密切相关。己经证明的几个癌基因 家族包括引起突变的ras族、放大基因的myc族、C-erB2、机制不明的bcl-2、 Kit及由野生型变异的抗癌 基因p53、 p16和RB等。大量研究表明C-myc、 L-myc、 N-myc和RAF在小细胞肺癌中均有过度表达。 非小细胞肺癌中则常可见ras族基因的过度表达。这些深入的研究将为基因预防和治疗肺癌提供理论基础。SNP(single nucleotide polymorphism)，即单核苷酸多态性标记，是一类基于单碱基变异引起的DNA 多态性，被遗传学界称为第三代遗传标记。主要是指由基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性， 包括单碱基转换、颠换，以及单碱基的插入/缺失等。它是基因组中最为广泛存在的一类多态性标记，占 大约90%。这些基因组序列变异可以导致个体间表型的差异以及不同个体对疾病，特别是复杂疾病的易感 性和对环境因素、药物反应的差异。ERCC2,位于第19号染色体19ql3.3位置，共有23个外显子，基因全长19.0kb， mRNA全长2355bp， 编码含761个氨基酸的蛋白。由ERCC2编码的蛋白参与转录偶联的核苷酸切除修复，它可识别与修复结 构无关的大范围的损伤，如大的加合物和胸腺嘧啶二聚体，并且是基本转录因子复合物BTF2ATIIH的一 个组成成分。该蛋白具有ATP依赖性的DNA解旋活性，属于RAD3/XPD解旋酶亚家族。ERCC2的功能 缺失导致基本转录因子复合物不能正确识别DNA损伤位点，从而使碱基切除修复无法正确进行,导致DNA 上的致癌损伤积累。ERCC2基因的突变或者失活可能导致的疾病包括癌症、着色性干皮病、毛发硫营养 不良、柯凯因氏综合症。rsl799793是位于第19号染色体ERCC2基因第10号外显子段Asp312Asn的G/A 多态。世界人群中的频率约为G:A=0.778:0.222,中国人群中的频率约为G:A=0.94:0.06。目前的多项研究表明，该位点的多态会导致ERCC2参与构成的转录因子复合物的性能发生弱化，从而使得对DNA损伤修 复的能力下降，转录因子的能力也同时发生下降，导致一系列诸如肺癌，前列腺癌等疾病的发生。ERCC2 Asp312Asn多态性与肺癌特别是肺鳞癌发生有显著关联，该位点的多态现象被认为是中国人群中肺癌遗传 易感因素之一。CYP1A1基因位于第15号染色体15q22-q24位置，全长6.0kb， mRNA全长2601bp，共有7个外显子， 编码513个氨基酸的细胞色素P4501Ah P450JA1是重要的活化多环芳烃类致癌物的主要酶类，被激活的 CYP1A1能将多种环境中的有机物质如PAH (polycycHc aromatic hydrocarbons)多环芬芳碳氮化合物转 化为细胞毒素或其他致癌物质，从而增加癌症发生的危险。国内外的众多研究显示CYP1A1的多态与野生 型相比有更高的酶接触反应活性和可诱导性，从而增加肝癌、肺癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌等疾病的 危险度。细胞色素P450酶(CYP450)是细胞内重要的I相代谢酶，在致癌物的活化和解毒过程中起着重 要的作用。P4501A1(CYP1A1)是活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。CYP1A1作为一种微神经元体细胞酶 与一些致癌物质的生物激活有关，例如benzopyrene。同时，CYPAi易于被TCDD和多环的芳香族化 合物所诱变，包括3-甲基胆:乾等实验室用致癌物质。目前的动物实验表明，CYP1A1的表达与芳基碳氨化 合物受体(AhR)和Arnt (AhR Nuclear Translocator)的激动剂，以及USF1 (Upstream Stimulatory Factor) 的拮抗剂有关。同时，CYPIAI通过C2羟基化作用参与雌激素的代谢活动。rsl048943是位于CYPlM基 因上的一个A/G多态，位于第7外显子462号氨基酸由Ile转化为Val。目前NCB1公布的世界人口频率 A:G为0,8%:0.104，杂合度0.186。世界人群的关联分析表明，CYP1A1 11e462Val位点ValVal和Vallle基 因型在肺癌病例组中的频率明显高于对照组，在女性中风险度尤其突出。基于多个中国人群肺癌发病与 CYP1A1 Ue462Val位点的关联分析研究，上千例肺癌个体与健康对照个体的分析，显示CYP本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测肺癌易感性的试剂盒，包括：同时检测ＥＲＣＣ２基因上的ｒｓ１７９９７９３号ＳＮＰ位点、ＣＹＰ１Ａ１基因上的ｒｓ１０４８９４３号ＳＮＰ位点和ＸＲＣＣ１基因上的ｒｓ２５４８７号ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ混合液、ＭｇＣｌ↓［２］溶液、荧光定量ＰＣＲ反应缓冲液、去离子水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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