一种沙冬青组培苗的繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种沙冬青组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：1)将沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子；2)将所述消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗；3)从所述无菌苗上获取带节茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽；4)将步骤3)获得的腋芽接种于生根培养基中培养10～15天获得组培苗。本发明专利技术所述沙冬青组培苗的繁殖方法，从无菌苗上采集外植体进行组培苗的繁殖，操作简单，用时短，污染率为零，出苗率高。

A breeding method for tissue culture seedlings of holly

The present invention provides a method for propagating Ammopiptanthusmongolicus seedlings, which comprises the following steps: 1) sand Holly seeds followed by rinsing, alcohol immersion disinfection, HgCl2 solution immersion disinfection and aseptic water flushing after disinfection of seed; 2) the disinfection seeds were inoculated on 1/ 2MS solid culture medium for 10~20 days to obtain aseptic seedling; 3) to obtain the stem segment with node inoculated on axillary bud induction culture medium for 15~20 days to obtain axillary buds from the sterile seedlings; 4) in step 3) was inoculated on axillary bud rooting culture plantlets cultured for 10~15 days to obtain medium. The propagation method of the tissue culture seedlings of the holly is obtained from the aseptic seedlings, and the explants are propagated in tissue culture seedlings. The operation is simple, the time is short, the pollution rate is zero, and the seedling emergence rate is high.

【技术实现步骤摘要】
一种沙冬青组培苗的繁殖方法
本专利技术属于沙冬青育苗
，具体涉及一种沙冬青组培苗的繁殖方法。
技术介绍
沙冬青(Ammopiptanthusmongolicus)是中亚荒漠地区特有种，为我国珍稀濒危保护植物，主要分布在内蒙阿拉善左旗、乌海、伊盟杭锦旗、甘肃景泰、宁夏灵武等地区的沙地、戈壁或石质山坡上。该物种起源古老，是古地中海湿热植物旱生化类型的孑遗种，在中亚及我国西部漫长的环境演变和西北干旱气候带形成过程中逐渐进化成为抗旱、耐寒、耐热的沙旱生植物类型，具有特殊的形态适应特征、生理适应机制和抗逆性分子遗传基础，因而具有极其重要的保护遗传学价值。沙冬青属典型的旱生植物，能够抗风沙，生长季节茂密、碧绿，由于沙冬青是北方惟一的常绿灌木，是良好的蜜源植物，更是人烟稀少的荒漠和难以管护的荒山秃岭营造水土保持林的优良树种。现有技术中沙冬青的繁殖培育多利用沙冬青种子进行容器育苗，操作复杂，出苗率低，育苗周期长。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种操作简单、出苗率高、用时短的沙冬青组培苗繁殖方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种沙冬青组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：1)将沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子；2)将所述消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗；3)从所述无菌苗上获取带节的茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽；4)将步骤3)获得的腋芽接种于生根培养基中培养10～15天获得组培苗；所述步骤2)、3)和4)中的培养温度独立为24～26℃。优选的，步骤1)所述酒精浸泡消毒的时间为15～25min。优选的，步骤1)所述HgCl2的质量分数为0.05～0.15％。优选的，所述HgCl2浸泡消毒的时间为8～12min。优选的，步骤2)中所述的1/2MS固体培养基中包括蔗糖和琼脂；所述蔗糖在1/2MS固体培养基中的浓度为12～18g/L，所述琼脂在1/2MS固体培养基中的浓度为6～9g/L；所述1/2MS固体培养基的pH值为5.7～5.9。优选的，步骤3)所述腋芽诱导培养基为添加6-BA和IBA的MS培养基。优选的，所述6-BA在腋芽诱导培养基中的浓度为1～2mg/L；所述IBA在腋芽诱导培养基中的浓度为0.5～1.5mg/L。优选的，所述腋芽诱导培养基中还包括蔗糖和琼脂；所述蔗糖在腋芽诱导培养基中的浓度为25～35g/L，所述琼脂在腋芽诱导培养基中的浓度为6～9g/L；所述腋芽诱导培养基的pH值为5.7～5.9。优选的，步骤4)中所述的生根培养基为添加IBA的1/2MS培养基；所述IBA在生根培养基中的浓度为0.8～1.2mg/L。本专利技术的有益效果：本专利技术所述沙冬青组培苗的繁殖的方法，从无菌苗上采集外植体进行组培苗的繁殖，操作简单，克服了采用实生苗外植体污染率高的情况，污染率为零，出苗率高。根据实施例记载本专利技术所述的方法用时短，繁殖系数高，35～45天可繁殖一批再生组培苗。具体实施方式本专利技术提供了一种沙冬青组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：1)将沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子；2)将所述消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗；3)从所述无菌苗上获取带腋芽的茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽；4)将步骤3)获得的腋芽接种于生根培养基中培养10～15天获得组培苗；所述步骤2)、3)和4)中的培养温度独立为24～26℃。在本专利技术中，从沙冬青的荚果中剥出沙冬青种子，将所述沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子。本专利技术中，所述流动水冲洗的时间优选的为15～25min，更优选的为20min；所述流动水冲洗的目的是去除种子表面杂物。在本专利技术中所述流动水冲洗的具体方法优选的为：将种子放入烧杯，杯口盖3层纱布，然后在自来水龙头上接一根硅胶管，从烧杯嘴处穿入烧杯高度3/4高度，最后用线绳将纱布和硅胶管绑定于烧杯杯沿处，打开水龙头持续冲洗，流水速度以不使纱布被冲掉为宜，根据实际情况掌握。本专利技术所述沙冬青种子经流动水冲洗后，用酒精浸泡消毒；所述酒精的体积浓度优选的为70～80％，更优选的为75％；所述酒精浸泡消毒的时间优选的为15～25min，更优选的为18～22min，最优选的为20min。本专利技术所述沙冬青种子酒精浸泡消毒后，用HgCl2溶液浸泡消毒，所述HgCl2溶液的质量分数优选的为0.07～0.12％，更优选的为0.1％；所述HgCl2溶液浸泡消毒的时间优选的为8～12min，更优选的为10min；所述HgCl2溶液浸泡消毒的目的是对种子进行深度消毒，保证种子表面完全无菌的状态。本专利技术所述沙冬青种子在所述HgCl2溶液浸泡消毒后，用无菌水进行冲洗；所述无菌水冲洗的次数优选的为4～6次，更优选的为5次，每次无菌水冲洗的时间优选的为8～12min，更优选的为10min；本专利技术所述无菌水冲洗的目的是去除沙冬青种子表面残留的HgCl2。本专利技术在所述无菌水冲洗后优选的用无菌滤纸吸干种子表面水分获得消毒种子。本专利技术在获得消毒种子后，将所述消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗。在本专利技术中所述1/2MS固体培养基为将常规MS培养基中的组分浓度减半获得；所述1/2MS固体培养基中优选的还包括蔗糖和琼脂；所述蔗糖在1/2MS固体培养基中的浓度优选的为12～18g/L，更优选的为15g/L；所述琼脂在1/2MS固体培养基中的浓度优选的为6～9g/L，更优选的为8g/L；在本专利技术中所述1/2MS固体培养基的pH值优选的为5.7～5.9，更优选的为5.8。在本专利技术中，所述接种过程中优选的将沙冬青种子的种孔端向下没入培养基0.1～0.5cm，更优选的为0.3cm。在本专利技术中在1/2MS固体培养基上培养所述无菌苗的时间为10～20天，优选的为12～18天；本专利技术中培养所述无菌苗的温度优选的为24～26℃，更优选的为25℃；培养所述无菌苗的光照条件优选的为组培专用光谱灯提供。本专利技术在培养获得无菌苗后，从所述无菌苗上获取带节茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽。在本专利技术中优选的从所述无菌苗上剪取带节的茎段；所述带节茎段长度优选的1～2cm，更优选的为1.5cm。在本专利技术中所述腋芽诱导培养基为添加6-BA和IBA的MS培养基。所述MS培养基为常规的无机盐培养基，在具体实施过程中采用市售或自制的MS培养基；在本专利技术中所述6-BA在腋芽诱导培养基中的浓度优选的为1～2mg/L，更优选的为1.2～1.8mg/L，最优选的为1.5mg/L；所述IBA在腋芽诱导培养基中的浓度优选的为0.5～1.5mg/L，更优选的为0.8～1.2mg/L，最优选的为1.0mg/L。在本专利技术中所述腋芽诱导培养基中优选的还包括蔗糖和琼脂；所述蔗糖在腋芽诱导培养基中的浓度优选的为25～35g/L，更优选的为30g/L；所述琼脂在腋芽诱导培养基中的浓度优选的为7～9g/L，更优选的为8g/L。在本专利技术中，所述腋芽诱导培养基的pH值优选的为5.7～5.9，更优选的为5.8。在本专利技术中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙冬青组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：1)将沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子；2)将所述步骤1)获得的消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗；3)从所述步骤2)获得的无菌苗上获取带节的茎段，将所述茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽；4)将所述步骤3)获得的腋芽接种于生根培养基中培养10～15天获得组培苗；所述步骤2)、3)和4)中的培养温度独立为24～26℃。

【技术特征摘要】
1.一种沙冬青组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：1)将沙冬青种子依次经过流动水冲洗、酒精浸泡消毒、HgCl2溶液浸泡消毒和无菌水冲洗后获得消毒种子；2)将所述步骤1)获得的消毒种子接种于1/2MS固体培养基培养10～20天获得无菌苗；3)从所述步骤2)获得的无菌苗上获取带节的茎段，将所述茎段接种于腋芽诱导培养基中培养15～20天获得腋芽；4)将所述步骤3)获得的腋芽接种于生根培养基中培养10～15天获得组培苗；所述步骤2)、3)和4)中的培养温度独立为24～26℃。2.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤1)所述酒精浸泡消毒的时间为15～25min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述HgCl2溶液的质量分数为0.05～0.15％。4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述HgCl2溶液浸泡消毒的时间为8～12min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的1/2MS固体培养基中还包括蔗糖和琼脂；所述蔗糖在1/2MS固体培养基中的浓度为12～18g/L，所述琼脂在1/2MS固...

【专利技术属性】
技术研发人员：张莹花，尉秋实，王方琳，张进虎，
申请(专利权)人：甘肃省治沙研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62