公开了一种番茄酱中主要腐败微生物的检验方法。针对国内外没有报道检测番茄酱中主要腐败微生物的方法。通过对采用前增菌培养,按重量体积百分比计,取番茄酱8%~12%,加入200mL~250mL生理盐水,混合均匀制成混悬液,将8%~12%混悬培养液分别接种于平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌琼脂培养液和胰大豆胨肉汤培养液或改良BCP培养液中,在35℃~37℃中培养24-48h,分离培养和前增菌相同的培养液,经过系列生化试验,鉴定确定番茄酱中主要存在芽孢菌、葡萄球菌为主要腐败微生物。对促进番茄酱产业的快速发展,维护国际市场中番茄酱贸易的优势地位,均具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及食品检验
具体的说,本专利技术涉及一种番茄酱中主要 腐败微生物的检验方法领域。技术背景当前进出口番茄酱中微生物检测的项目主要是霉菌,其检验方法是采用标准GB/T4789.15-2003,对其它微生物项目的检测很少涉及。随着国际贸易的日益发 展,对商品检测技术的要求越来越高,很多国家和地区要求增加番茄酱中主要 腐败微生物的检测,而目前相关的研究工作在中国仍是一片空白。番茄酱属酸性罐头食品(pH4.5以下),在其中存活的微生物多为耐酸、抗 热性极强的杆菌、球菌等,它们的存在常常会导致罐头食品的腐败。国外有文 献报道,尼日利亚乳酸菌是番茄酱中的优势微生物,但是近年报道,世界各地 番茄酱中的优势微生物并不是尼日利亚乳酸菌,其缺乏相应科学数据支持。而 经过大量试验研究表明,经新疆进出口的番茄酱其微生物的种群构成与国外报 道不相同。番茄酱中的微生物种类很丰富,近6年对新疆进出口番茄酱中微生 物研究中分离出的芽孢杆菌占50%,葡萄球菌占25%,其它杆菌占15%,酵母 菌占3%,乳酸菌占2%及霉菌占1%,大肠菌群、厌氧菌等占4%。数据表明芽 孢杆菌为优势菌群,其次为葡萄球菌。可见当前番茄酱中主要腐败微生物为芽 孢杆菌及葡萄球菌,而当前国内外还没有报道建立一套完整的检测番茄酱中主 要腐败微生物中芽孢杆菌和葡萄球菌的方法。国内外没有公开报道番茄酱中微生物指标的具体检测方法标准体系。我国 有关番茄酱中孩吏生物4全验方法的标准有GB4789.15-94、 GB4789.26-94,这两个 标准只描述了番茄酱罐头直接镜检霉菌数和商业无菌的检测方法。因此,探索和研究引起番茄酱中腐败微生物的种类,建立番茄酱中主要腐败微生物的检验 方法体系,对促进番茄酱产业的快速发展,维护国际市场中番茄酱贸易的优势 地位,均具有重要意义。
技术实现思路
针对目前进出口番茄酱中微生物检测的项目主要是霉菌,关于番茄酱中霉菌的检测方法,国外已有文献报道;对其它微生物项目的^r测^艮少涉及,随着 国际贸易的日益发展,对商品检测技术的要求越来越高,很多国家和地区要求 增加番茄酱中主要腐败微生物的检测,关于番茄酱中芽孢杆菌及葡萄球菌检测 方法,未见国内外文献报道,而目前相关的研究工作在中国仍是一片空白。而 本领域熟知,番茄酱罐头虽经高温处理,但仍有很多微生物如芽孢菌等难以灭 活。本专利技术研究表明,将分离出的枯草芽孢杆菌及地衣芽孢杆菌分别接入番茄 酱中,37。C培养24h后,均能引起番茄酱总酸量增加,还原糖量减少,从而导 致番茄酱发生酸败现象。这两种菌均属于能主体引起番茄酱腐败的微生物。实 验证明,部分葡萄球菌也能导致番茄酱腐败变质。本专利技术提供了 一种番茄酱中主要腐败微生物的检验方法。本专利技术具体提供了番茄酱中主要腐败微生物的检验方法,建立了番茄酱中 芽孢杆菌、葡萄球菌主要腐败菌的检验方法。本专利技术的技术方案通过对进出口的番茄酱开展了各类微生物的分离培养 研究。研究中发现,进出口番茄酱中主要存在芽孢菌、葡萄球菌以及极少量的 酵母菌。将分离培养出的微生物进行鉴定后,对其特性进行了相关资料的查询, 均为能引起番茄酱腐败的微生物种类。为此,本专利技术建立了番茄酱中芽孢菌和 葡萄球菌的分离培养方法。本领域所熟知,腐败^f鼓生物(Corrw; f mfcraorgm'sms)主要作为判定番茄 酱中被污染程度的标志,本专利技术通过将袋装或罐装番茄酱,经过一定条件的培 养后(如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等),所培养分离出的主要芽孢杆菌、葡萄球菌。本专利技术具体提供了 一种番茄酱中主要腐败微生物的检验步骤如下一、 增菌培养1. 检样处理以本领域所熟知的无菌操作,按重量体积百分比(g/100mL) 计,取番茄酱8% ~ 12%,加入200 mL ~ 250 mL生理盐水,混合均匀制成混悬液。2. 增菌培养按重量体积百分比(g/100mL)计,将8% ~ 12%混悬培养液将 接种于相应的培养液,即吸取20mL 30mL上述混悬液,接种于平酸菌增菌培 养液或嗜热耐酸杆菌琼脂培养液和胰大豆胨肉汤培养液或改良BCP培养液中, 在35°C ~ 37°C中培养24-48h。二、 分离培养和鉴定1. 本领域熟知,在其他食品中分离目标菌, 一般前增菌培养基与分离培养 基有所差异,导致生产步骤复杂,生产成本加大,本专利技术前增菌和分离培养基 均相同,都采用平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌琼脂培养液和胰大豆胨肉汤 培养液或改良BCP培养液。2. 本专利技术中培养基的筛选是基于根据番茄酱属酸性罐头的特征,从广谱性 芽孢杆菌和葡萄球菌的分离培养基角度,在众多培养基中确定了分离效果最好 的四种培养基平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌培养液和胰大豆胨肉汤培养 液或改良BCP培养液。而在检测其它食品中芽孢杆菌和葡萄球菌的分离方法不 完全适合番茄酱中两种菌的分离。3. 将上述培养物,划线转种于平酸菌增菌培养基平板或嗜热耐酸杆菌琼脂培 养基平板和胰大豆胨肉汤培养基或改良BCP培养基中,35°C ~ 37°C中分别培养 24-48h,观察菌体形态。4. 生化特性经过单糖发酵试验、K gas-/Vo^"wer (V-P)试验、曱基红试验、 接触酶实验、柠檬酸盐反应、石蕊牛奶的反应和革兰氏染色方法,这些方法都是熟知的常用技术手段,通过上述系列实验得知芽孢杆菌可利用葡萄糖、麦芽糖、乳糖及柠檬酸盐,接触酶阳性,石蕊牛 奶呈还原胨化反应。葡萄球菌不能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖;曱基红阳性;V-P为弱阳性。三、结果报告结合上述特征及相应数据,结合相应菌体的菌落特点,可 以清楚的判断,从番茄酱中检出或未检出芽孢杆菌、葡萄球菌。 本专利技术上述生产方法中选用的菌种,为已公开报道的。 本专利技术中所涉及到的°/。均以体积重量百分比计。本专利技术引用了 GB/T4789. 28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养 基和试剂。通过实施本专利技术具体的技术指标,实现本
技术实现思路
,可以达到以下有益效果。1. 通过本专利技术提供的检测检验方法,经革兰氏染色呈阳性,能够准确的判定 袋装或罐装番茄酱中有腐败微生物存在,以及科学判定作为流通的番茄酱商品 被污染的程度。2. 本专利技术建立了增菌培养体系,有效的将番茄酱中的主要腐败菌检验出来。3. 在食品等商品中分离目标菌, 一般前增菌培养基与分离培养基有所差异, 导致其工艺步骤复杂,其生产成本加大,本专利技术前增菌和分离培养基均相同。 附图说明图1所示为芽孢杆菌对番茄酱液还原糖量的影响,选取四种代表性的芽孢 杆菌在番茄酱液中37。C培养24h,对番茄酱液还原糖量的影响,其中枯草芽孢 杆菌- ,矮小芽孢杆菌-■,地衣芽孢杆菌-A,淀粉液化芽孢杆菌-x。图2所示为芽孢杆菌对番茄酱液总酸量的影响,选取四种代表性的芽孢杆 菌在番茄酱液中37。C培养24h,对番茄酱液还原糖量的影响,其中枯草芽孢杆 菌-令,矮小芽孢杆菌-園,地衣芽孢杆菌-A,淀粉液化芽孢杆菌-x。图3所示为葡萄球菌对番茄酱总酸量的变化情况,选取两种代表性的葡萄 球菌接种菌液后番茄酱总酸量的变化情况,其中腐生葡萄球菌-沃氏葡萄球菌-B-。图4所示为葡萄球菌对番茄酱还原糖量的变化情况,选取两种代表性的葡 萄球菌接种菌液后番茄酱还原糖量的变化情况,其中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种番茄酱中主要腐败微生物的检验方法,通过选择合适的培养基或培养液培养、分离培养,经过单糖发酵试验、Voges-Proskauer试验、甲基红试验、接触酶实验、柠檬酸盐反应、石蕊牛奶的反应和革兰氏染色方法检验,鉴定获得具体腐败微生物的方法,其特征在于,A.采用前增菌培养,按重量体积百分比计,取番茄酱8%~12%,加入200mL~250mL生理盐水,混合均匀制成混悬液,将8%~12%混悬培养液分别接种于平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌琼脂培养液和胰大豆胨肉汤培养液或改良BCP培养液中,在35℃~37℃中培养24-48h;B.分离培养和鉴定采用与步骤A前增菌相同平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌琼脂培养液和胰大豆胨肉汤培养液或改良BCP培养液;C.将上述培养物划线分别转种于平酸菌增菌培养基或嗜热耐酸杆菌琼脂培养基和胰大豆胨肉汤培养基或改良BCP培养基的平板中,35℃~37℃中分别培养24-48h。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:黄玲,田延河,蒋刚强,郑树桐,季新成,窦辉,刘小兰,曾献春,吴海文,
申请(专利权)人:新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心,
类型:发明
国别省市:65[]
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