一种用于胃组织的高表达ｐｉＲＮＡ探针及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于胃组织的高表达ｐｉＲＮＡ探针及其检测方法，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，寡聚核苷酸编码片段为至少一种下述ｐｉＲＮＡ序列：ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００９４６６，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００５２７０，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０００６６３，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０１２５１８，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００１３０２，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０００５６２，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００１０４８，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００２０６２和ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０１１１８６；用上述高表达ｐｉＲＮＡ探针对胃组织的ｐｉＲＮＡ进行杂交检测，能检测出胃组织中异常高表达的ｐｉＲＮＡ，作为胃组织发生癌变的一种诊断标志，这些ｐｉＲＮＡ进一步可作为设计定向胃癌药物的靶点，因此本发明专利技术为胃癌的诊断和定向治疗提供了有利的依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及piRNA，具体涉及一种用于检测胃组织的高表达piRNA探针及其检测方法。
技术介绍
真核基因组中除了有编码蛋白质的基因外，还有一大部分DNA被转录成非编码RNA(noncoding RNAs，ncRNAs)。近年来的研究发现，许多ncRNA可在多个层次上调节着基因的表达，特别是小RNA在基因表达调控中的作用及其与疾病发生、发展的关系越来越引起了人们的重视。前期研究已经发现了2类对基因表达有重要调控作用的小RNA——短干扰RNA(short interfering RNA，siRNA)和微小RNA(microRNA，miRNA)。 2006年俄罗斯、日本和美国的四家实验室几乎同时报道，在生物体内存在除siRNA和miRNA以外的另一类小RNA。这些小RNA与前2类小RNA的主要区别在于其长度更长(约为30个核苷酸)和采用不同的机制实现对基因表达的调控。因此，这类RNA被称为第三类小RNA。目前已从多种生物中发现了第三类小RNA。研究发现，它们可与小鼠和大鼠的阿格蛋白亚家族Piwi相互作用，因此根据其功能将其命名为Piwi相互作用RNA(Piwi-interacting RNA，piRNA)。 阿格蛋白(argonaute protein)的主要功能与小分子RNA相关的基因沉默作用有密切关系。RNA沉默作用通过降解mRNA、抑制翻译和重建染色体等方式调节基因的表达。RNA沉默主要通过RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)和转录的基因沉默RNA诱导起始复合物(RNA-induced initiation of transcriptional genesilencing，RITS)来发挥作用。这些复合物的主要成分包括小分子RNA和阿格蛋白。阿格蛋白家族是在所有RISC和RITS复合物中均存在的唯一共同成分。这说明阿格蛋白在小分子RNA相关的RNA沉默机制中具有独特的功能。也说明piRNA在基因表达调控中起着重要作用。 我国是胃癌高发区，现有的技术中均没有涉及到胃组织的癌变与哪些高表达的piRNA有关。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种用于检测胃癌组织的piRNA异常表达的探针，还提供了利用该探针检测胃癌组织的piRNA高表达的方法。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为一种用于胃组织的高表达piRNA探针，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，所述的寡聚核苷酸编码片段为至少一种下述piRNA序列hsa_piR_009466，hsa_piR_005270，hsa_piR_000663，hsa_piR_012518，hsa_piR_001302，hsa_piR_000562，hsa_piR_001048，hsa_piR_002062和hsa_piR_011186。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa piR_009466序列。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa_piR_009466序列和hsa_piR_005270序列组成。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa_piR_009466序列、hsa_piR_005270序列和hsa_piR_000663序列组成。 所述的寡聚核苷酸编码片段还包括下述piRNA序列hsa_piR_001809，hsa_piR_000139，hsa_piR_001184，hsa_piR_001205，hsa_piR_001318，hsa_piR_011187，hsa_piR_000775和hsa_piR_000651。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa_piR_009466序列和hsa_piR_001809序列组成。 所述的寡聚核苷酸编码片段还包括下述piRNA序列hsa_piR_001040，hsa_piR_001159，hsa_piR_000823，hsa_piR_000121、hsa_piR_001934，hsa_piR_000794，hsa_piR_000441和hsa_piR_000560。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa_piR_009466序列和hsa_piR_001040序列组成。 所述的寡聚核苷酸编码片段为hsa_piR_009466序列、hsa_piR_001809序列和hsa_piR_001040序列组成。 寡聚核苷酸编码片段也可以为下述piRNA序列组成hsa_piR_009466、hsa_piR_005270、hsa_piR_000663、hsa_piR_012518、hsa_piR_001302、hsa_piR_000562、hsa_piR_001048、hsa_piR_002062、hsa_piR_011186、hsa_piR_001809、hsa_piR_000139、hsa_piR_001184、hsa_piR_001205、hsa_piR_001318、hsa_piR_011187、hsa_piR_000775、hsa_piR_000651、hsa_piR_001040、hsa_piR_001159、hsa_piR_000823、hsa_piR_000121、hsa_piR_001934、hsa_piR_000794、hsa_piR_000441和hsa_piR_000560。 一种用上述高表达探针检测胃癌组织的piRNA的方法，依次包括总RNA提取、总RNA质量分析、微离心过滤得到小RNA样品、添加Poly(A)聚合酶和用Cy3和Cy5特异性荧光标记小RNA样品步骤，用所述的高表达piRNA探针对荧光标记的小RNA样品杂交检测。 化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段能与靶piRNA互补杂交；延伸臂片段能使与它连接的编码片段离片基有一定的距离，减少杂交空间阻碍；探针杂交的Tm值是通过化学修饰来平衡的。 探针是为光敏试剂原位合成的微流体芯片；piR＝piRNA。 上述piRNA在RNA基因数据库中都能找到，延伸臂片段可以用分子生物学上能减少杂交空间阻碍的任何延伸臂片段。 与现有技术相比，本专利技术的优点在于用于胃组织的高表达piRNA探针，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，寡聚核苷酸编码片段为至少一种下述piRNA序列hsa_piR_009466，hsa_piR_005270，hsa_piR_000663，hsa_piR_012518，hsa_piR_001302，hsa_piR_000562，hsa_piR_001048，hsa_piR_002062和hsa_piR_011186，探针能对胃组织的piRNA进行杂交检测，能检测出异常高表达的piRNA，在癌变的胃组织中探针组成的每种piRNA的量就比正常的胃组织的每种piRNA的量高出许多，piRNA探针从而就检测出胃癌组织中piRNA异常变异，作为胃组织发生癌变的一种诊断标志，piRNA进一步可作为设计定向胃癌药物的靶点，因此本专利技术为胃癌的诊断和定向治疗提供了有利的依据。hsa_piR_001809，hsa_piR_000139，hsa_piR_001184，hsa_piR_001205，hsa_piR_001318，hsa_piR_011187，hsa本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于胃组织的高表达ｐｉＲＮＡ探针，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，其特征在于所述的寡聚核苷酸编码片段为至少一种下述ｐｉＲＮＡ序列：ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００９４６６，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００５２７０，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０００６６３，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０１２５１８，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００１３０２，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０００５６２，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００１０４８，ｈｓａ＿ｐｉＲ＿００２０６２和ｈｓａ＿ｐｉＲ＿０１１１８６。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭俊明，肖丙秀，蒋振，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]