一种检测土壤中过氧化氢酶活性的分析方法技术

本发明专利技术涉及一种检测土壤中过氧化氢酶活性的分析方法：１）称取鲜土ｎ份置于１００ｍｌ三角瓶中。向对照土壤中加入硫酸和三氯醋酸以钝化过氧化氢酶；将所有土样放在０℃冰浴内，１５ｍｉｎ后向三角瓶中加入过氧化氢溶液，混合，放在同一温度下培养１ｈ；２）向试验瓶中加入硫酸和三氯醋酸以钝化过氧化氢；３）摇匀所有三角瓶，过滤；４）为每一个样品准备一个含有硫酸钛溶液的试管，吸取一定量的滤液和蒸馏水加入，混合，液体呈黄色；５）在分光光度计上比色测定吸光度；６）计算水解的过氧化氢的量。本发明专利技术优点为：１）简化了操作步骤，减少了实验中的不确定性；２）方法准确度高，易操作；３）结果稳定可靠，重现性好。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测土壤中过氧化氢酶活性的分析方法，其特征在于：　　　　１）称取４－６ｇ新鲜土壤或预培养后的土壤ｎ份置于１００ｍｌ三角瓶中，ｎ≥２；以其中１份新鲜土壤或预培养后的土壤为对照土壤，向对照土壤中加入５－１０ｍｌ重量浓度５－１０％硫酸和５－１０ｍｌ重量浓度５－１０％三氯醋酸以钝化过氧化氢酶；将盛有钝化和未钝化土壤的三角瓶分别放入的－４～４℃冰浴内；１５±５ｍｉｎ后，向每一个三角瓶中加５－１０ｍｌ重量浓度１－２％过氧化氢溶液，小心混合反应物，并在－４～４℃下培养０．８－１．２ｈ；　　　　２）培养结束后，向试验瓶中分别加入５－１０ｍｌ重量浓度５％－１０％硫酸和５－１０ｍｌ重量浓度５％－１０％三氯醋酸以钝化过氧化氢酶；　　　　３）摇匀所有三角瓶，过滤；　　　　４）为每一个样品准备一个含有１－３ｍｌ重量浓度２％－５％硫酸钛溶液的试管，分别向每一个试管中加入１－２ｍｌ滤液和８－９ｍｌ蒸馏水，混合，呈黄色；　　　　５）在分光广度计上蓝色滤光片比色测定吸光度Ａ；　　　　６）制作工作标准曲线：配制一系列浓度的Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］标准溶液，然后分别加入１－３ｍｌ重量浓度２％－５％硫酸钛溶液，混合后比色测定吸光度Ａ’。以过氧化氢标准溶液的系列浓度和测定的吸光值Ａ’制作工作标准曲线，得到斜率ｂ；　　　　７）根据吸光值Ａ和斜率ｂ，计算所测滤液中过氧化氢的浓度Ｓ，Ｓ＝Ａ＊ｂ；　　　　８）计算样品中被分解的过氧化氢的量；　　　　９）计算过氧化氢酶活性：　　　　计算公式为：（Ｓ↓［１］－Ｓ↓［２］）Ｖ／１０００＊Ｗ．Ｔ＝ｍｇ水解的过氧化氢／１ｇ干土．１ｈ　　　　式中：Ｓ↓［１］为钝化处理中过氧化氢的含量（μｇ／ｍｌ）；Ｓ↓［２］为未钝化处理中过氧化氢的含量（μｇ／ｍｌ）；Ｖ为滤液体积（ｍｌ）；Ｗ为干土质量（ｇ）；Ｔ为培养的时间（ｈ）；１０００为微克转化成毫克的转化系数。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈利军，隽英华，武志杰，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]