一种通用荧光标记探针在PCR-LDR基因单核苷酸多态性芯片上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种通用荧光标记探针在ＰＣＲ－ＬＤＲ基因ＳＮＰ单核苷酸多态性芯片上的应用。本发明专利技术的应用包括探针设计、ＰＣＲ产物制备、ＬＤＲ产物制备及结果检测等步骤。本发明专利技术的探针包括标记探针和检测探针，由于对标记探针进行改造，可以不直接进行化学标记，因而，能降低ＰＣＲ－ＬＤＲ联合芯片技术的成本和节省探针合成时间，检测结果达到用直接标记技术检测的准确性和精确度。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种通用荧光标记探针在ＰＣＲ－ＬＤＲ基因单核苷酸多态性芯片上的应用，其特征在于所述应用包括下列步骤：　（１）探针设计　①设计一种由１０－２５个碱基组成的通用荧光探针，该通用探针具有极高的特异性，在任何生物中找不到其同源相似的序列；　②在要检测的突变位点的前后各设计１０－２５碱基长度的序列，其中５’端上游序列是检测探针，在３’端有检测位点；３’端下游序列是标记探针；　③据检测探针的数量，针对每一根检测探针设计不同的长度为１５－２５碱基的特异性序列和芯片上探针互补；　④在每个标记探针的３’端引入和通用荧光探针互补的序列；　（２）ＰＣＲ产物制备　取待检测ＤＮＡ　１μｌ，ＰＣＲ引物各１０－３０ｐｍｏｌ，高温聚合酶，高温聚合酶混合液，相互混合，ＰＣＲ反应条件为：依次按９４℃３０秒，４０℃－６８℃３０秒－２分钟，６０－７２℃４５秒－２分钟为一次循环，共循环２５－４０次；　（３）ＬＤＲ产物制备　取ＰＣＲ产物１μｌ取待检测ＤＮＡ　１μｌ，探针各４０ｆｍｏｌ－１０ｐｍｏｌ，连接酶，连接酶缓冲液，相互混合。ＬＤＲ反应条件为：依次按９４℃３０秒，４０－７０℃１－１０分钟，以４５－６０℃为最好作为一次循环，共循环１－４０次；　（４）结果检测　取ＬＤＲ产物１－５μｌ与１－１０μｌ杂交液混合，点于基因芯片表面，用盖玻片覆盖，３０－７０℃恒温１０－６０分钟，用洗脱液洗脱１－３０分钟，扫描读取结果。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖君华，陆炯，陈轶群，
申请(专利权)人：上海翼和应用生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]