一种具有抗氧化活性的卡拉寡糖硫酸酯的制备方法，包括配制κ－卡拉胶底物，加入κ－卡拉胶酶酶粉，进行酶解反应，旋转蒸发浓缩后，用有机溶剂沉淀收集酶解产生的卡拉寡糖，其特征是对卡拉寡糖进行硫酸化修饰，再经丙酮反复洗涤和真空抽滤并干燥；本发明专利技术的优点是采用酶法降解和化学修饰相结合的步骤，使得制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，并且该产品具有抗氧化活性，具备开发抗氧化功能食品的潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种有机聚合物，特别是涉及。
技术介绍
目前已有关于卡拉寡糖硫酸酯的活性报道，包括抑制肠道菌群、提高免疫功能、抗氧化以及对放射损伤的保护作用等方面，但这些报道均采用化学方法降解卡拉胶制备卡拉寡糖硫酸酯，化学方法由于反应条件不易控制，产物得率低，制备过程中产物结构易受到破坏等缺点，从而严重制约了卡拉寡糖硫酸酯的活性开发和应用。在酶解制备活性卡拉寡糖硫酸酯的报道方面仅见一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法(ZL03138975.9)，但尚未有关于利用酶解方法制备具有抗氧化活性的卡拉寡糖硫酸酯的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，它能弥补现有技术的上述不足。，包括配制κ-卡拉胶底物，加入κ-卡拉胶酶酶粉，进行酶解反应，旋转蒸发浓缩后，用有机溶剂沉淀收集酶解产生的卡拉寡糖，其特征是对卡拉寡糖进行硫酸化修饰，再经丙酮反复洗涤和真空抽滤并干燥；所述的κ-卡拉胶酶由海洋噬纤维菌产生，所述的酶解反应条件将8-12单位κ-卡拉胶酶酶粉加入到含2-5gκ-卡拉胶的100ml无菌蒸馏水中，于26-34℃反应16-24h；所述的有机溶剂为乙醇或丙酮，加入有机溶剂的体积为浓缩液体积的4-10倍；所述的硫酸化修饰条件将2g烘干的卡拉寡糖加入到干燥的三颈瓶中，加入50-90ml N，N-二甲基甲酰胺，搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入硫酸化试剂10-15ml，水浴条件下逐渐升温至64-70℃，反应1-4h。本专利技术的优点是采用酶法降解和化学修饰相结合的步骤，使得制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，并且该产品具有抗氧化活性，具备开发抗氧化功能食品的潜力。具体实施例方式实施例一将2gκ-卡拉胶溶于100ml无菌蒸馏水中，加入12单位由海洋噬纤维菌制成的κ-卡拉胶酶粉，1个酶活力单位定义为在32℃条件下，每min产生1μmol还原糖(以半乳糖计)所需要的酶量。于32℃150r/min振荡反应18h，反应液于60℃旋转蒸发进行浓缩至20ml，然后加入4倍体积的丙酮使寡糖组分得到沉淀，离心收集沉淀物，经70℃烘干后得到卡拉寡糖。于冰盐浴条件下，加50ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)至干燥的三颈瓶中并不停搅拌，用恒压分液漏斗缓缓滴加15ml氯磺酸进行反应，形成DMF-氯磺酸硫酸化试剂。将2g烘干的卡拉寡糖加入至干燥的三颈瓶中，加入80ml DMF搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入DMF-氯磺酸硫酸化试剂10ml，水浴条件下逐渐升温至68℃，反应3h。待反应液冷却后，加入10ml去离子水，倒入烧杯中，加丙酮搅拌得到沉淀，真空抽滤后，用丙酮反复洗涤，50℃烘干获得黄色的卡拉寡糖硫酸酯。上述卡拉寡糖硫酸酯对H2O2具有良好的清除作用，具体验证方法如下用Alsever′s液采集新鲜鸡血，2000r/min离心收集沉淀红细胞，用冷的生理盐水洗涤3次，制成2％的细胞悬浮液。取红细胞悬液1ml，加入0.1ml不同浓度的卡拉寡糖硫酸酯样品及0.3ml H2O2(浓度为24 mmol/L)，37℃温箱中反应1h后，用生理盐水稀释3倍，2000r/min离心10min，收集上清液于415nm处测定吸光值。以不加H2O2的红细胞正常组为空白调零，以H2O2加红细胞混合为对照组，试验组同对照组比较，计算出红细胞溶血抑制率×100％，卡拉寡糖硫酸酯浓度为6.4mg/ml时，对H2O2引起的溶血现象的抑制率为86.2％。实施例二将2gκ-卡拉胶溶于100ml无菌蒸馏水中，加入9单位由海洋噬纤维菌制成的κ-卡拉胶酶粉，于34℃150r/min振荡反应24h，反应液于70℃旋转蒸发进行浓缩至20ml左右，然后加入10倍体积的乙醇使寡糖组分得到沉淀，离心收集沉淀物，经76℃烘干后得到卡拉寡糖。将2g烘干的卡拉寡糖加入至干燥的三颈瓶中，加入50ml DMF搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入DMF-氯磺酸硫酸化试剂12ml，水浴条件下逐渐升温至70℃，反应1h。待反应液冷却后，加入10ml去离子水，倒入烧杯中，加乙醇搅拌得到沉淀，真空抽滤后，用乙醇反复洗涤，50℃烘干获得黄色的卡拉寡糖硫酸酯。上述卡拉寡糖硫酸酯对·OH具有良好的清除作用，具体验证方法如下3ml反应液中含有1.0ml 0.6mol/L FeSO4，0.75ml 8mmol/L水杨酸钠及0.5ml不同浓度的卡拉寡糖硫酸酯样品，最后添加0.75ml24 mmol/L H2O2，启动反应，于37℃反应1h，测510nm处的吸光值。·OH的清除率(％)表示为×100％，卡拉寡糖硫酸酯浓度为6.4 mg/ml时，对羟自由基的清除率达到81.1％。本专利技术中所述的酶解反应条件将8-12单位κ-卡拉胶酶酶粉加入到含2-5gκ-卡拉胶的100ml无菌蒸馏水中，于26-34℃反应16-24h；所述的有机溶剂为乙醇或丙酮，加入有机溶剂的体积为浓缩液体积的4-10倍；所述的硫酸化修饰条件将2g烘干的卡拉寡糖加入到干燥的三颈瓶中，加入50-90ml N，N-二甲基甲酰胺，搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入硫酸化试剂10-15ml，水浴条件下逐渐升温至64-70℃，反应1-4h。权利要求1.，包括配制κ-卡拉胶底物，加入κ-卡拉胶酶酶粉，进行酶解反应，旋转蒸发浓缩后，用有机溶剂沉淀收集酶解产生的卡拉寡糖，其特征是对卡拉寡糖进行硫酸化修饰，再经丙酮反复洗涤和真空抽滤并干燥；所述的κ-卡拉胶酶由海洋噬纤维菌产生，所述的酶解反应条件将8-12单位κ-卡拉胶酶酶粉加入到含2-5gκ-卡拉胶的100ml无菌蒸馏水中，于26-34℃反应16-24h；所述的有机溶剂为乙醇或丙酮，加入有机溶剂的体积为浓缩液体积的4-10倍；所述的硫酸化修饰条件将2g烘干的卡拉寡糖加入到干燥的三颈瓶中，加入50-90mlN，N-二甲基甲酰胺，搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入硫酸化试剂10-15ml，水浴条件下逐渐升温至64-70℃，反应1-4h。全文摘要，包括配制κ－卡拉胶底物，加入κ－卡拉胶酶酶粉，进行酶解反应，旋转蒸发浓缩后，用有机溶剂沉淀收集酶解产生的卡拉寡糖，其特征是对卡拉寡糖进行硫酸化修饰，再经丙酮反复洗涤和真空抽滤并干燥；本专利技术的优点是采用酶法降解和化学修饰相结合的步骤，使得制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，并且该产品具有抗氧化活性，具备开发抗氧化功能食品的潜力。文档编号A61P39/06GK1986824SQ20061007079公开日2007年6月27日 申请日期2006年12月13日 优先权日2006年12月13日专利技术者牟海津, 江晓路, 刘志鸿 申请人:中国海洋大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗氧化活性的卡拉寡糖硫酸酯的制备方法，包括配制κ－卡拉胶底物，加入κ－卡拉胶酶酶粉，进行酶解反应，旋转蒸发浓缩后，用有机溶剂沉淀收集酶解产生的卡拉寡糖，其特征是对卡拉寡糖进行硫酸化修饰，再经丙酮反复洗涤和真空抽滤并干燥；所述的κ－卡拉胶酶由海洋噬纤维菌产生，所述的酶解反应条件：将８－１２单位κ－卡拉胶酶酶粉加入到含２－５ｇκ－卡拉胶的１００ｍｌ无菌蒸馏水中，于２６－３４℃反应１６－２４ｈ；所述的有机溶剂为乙醇或丙酮，加入有机溶剂的体积为浓缩液体积的４－１０倍；所述的硫酸化修饰条件：将２ｇ烘干的卡拉寡糖加入到干燥的三颈瓶中，加入５０－９０ｍｌＮ，Ｎ－二甲基甲酰胺，搅拌使寡糖充分分散在溶剂中，再加入硫酸化试剂１０－１５ｍｌ，水浴条件下逐渐升温至６４－７０℃，反应１－４ｈ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：牟海津，江晓路，刘志鸿，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。