旋光２－芳基烷酸的制备方法技术

根据外消旋α－苯基丙酰胺选择性地水解成α－苯基丙酸的能力选择一种微生物或一种酶，在这种微生物或酶的存在下，用对映选择水解外消旋酰胺制备彷光２－芳基烷酸的方法。（*该技术在2009年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用对映选择性水解相应的外消旋酰胺制备具有下述通式 的旋光2-芳基烷酸的方法。在通式(Ⅰ)中，Ar代表一种可取代的芳基，R代表乙基、丙基或异丙基。更准确地说，本专利技术涉及制备通式(Ⅰ)的2-芳基烷酸的对映体S(+)。再更准确地说，本专利技术涉及制备具有下述通式 的2-苯基3-甲基丁酸的对映体S(+)，式中X代表卤原子，最好是氯原子，或甲基。已知〔Y.Kawakami，J.Synth.Org.Chem.，38，574(1980)〕具有下列通式 的酯具有显著的杀虫特性，其中X的定义与前面的一样。在通式(Ⅲ)中，2个不对称碳的存在可能产生4个旋光异构体。在这些异构体中，来自通式(Ⅱ)酸异构体S(+)的那些异构体的活度大于相应的外消旋产物的活度(DE2737297)。已知〔H.Nohiraetcoll.，Agric.Biol.Chem.，50，675(1986)〕用二乙胺择优结晶通式(Ⅱ)酸酯以制备通式(Ⅱ)产品的旋光异构体。现已发现，也就是本专利技术的目的，即根据微生物或酶将外消旋α-苯基丙酰胺水解成α-苯基丙酸S的能力来选择微生物或酶，用所选择的微生物或酶对相应的外消旋酰胺进行对映选择性水解可以制得呈S形的通式(Ⅰ)的2-芳基烷酸。能使外消旋通式(Ⅰ)的2-芳基烷酸酰胺进行对映选择性水解的试剂的选择，是将此试剂与α-苯基丙酰胺在适宜的介质中接触，直到转换了20%的产品，然后测量对映体余量。选择在这些条件下使外消旋α-苯基丙酰胺水解成α-苯基丙酸S，其对映体余量超过65%的试剂。在特别适合的微生物中，可以列举出属于短杆菌或棒状杆菌属的菌株，更准确地说属于短杆菌R312(CBS717.73)和棒状杆菌N771(FERMP4445)或棒状杆菌N774(FERMP4446)，它们能够获得2-芳基烷酸S，且异构体S的对映体余量一般大于90%。出人意料地看到，在这些微生物中，在FR7901803/2447359和AdvancesinBiochemicalEngineering，Vol.14，P.1-32(1980)中描述的作为一种通常的非立体有择性的酰胺酶的短杆菌R312，使外消旋通式(Ⅰ)的2-芳基烷酸酰胺立体有择性水解，而具有一种立体有择性酰胺酶L的突变体A4则不使外消旋通式(Ⅰ)的2-芳基烷酸酰胺水解。有必要知道的是，在EP0187680中描述的棒状杆菌N771和棒状杆菌N774使例如乳腈水解成D.L-乳酸、α-氨基苯丙腈水解生成D.L-苯基丙氨酸而未观察到立体有择性。根据本专利技术，该方法通常是在含水的或均相或非均相的碳氢化合物的介质中，根据微生物和酶的特性在一定的温度和pH条件下，搅拌微生物细胞或细胞提取物和外消旋2-芳基烷酸酰胺的悬浮液。本方法得到一种2-芳基烷酸S和2-芳基烷酸酰胺R的混合物，后者可用已知的技术外消旋成外消旋2-芳基烷酸酰胺，它在上述条件下重新水解成2-芳基烷酸。例如，可在80到160℃温度下与氨水一起加热进行外消旋。当所使用的微生物既具有使腈水解的特性，又具有使2-苯基丙酰胺对映选择性地水解的特性时，或者由外消旋2-芳基烷腈，或者由外消旋2-芳基烷酸酰胺制得2-芳基烷酸S是可能的。下面非限制性的实施例表明本专利技术是如何实施的。实例1a)将菌株短杆菌R312(CBS717.73)在下述组成的培养液中，在有搅拌的烧瓶中于28℃培养14小时葡萄糖10g(NH4)2SO45gKH2PO41.01gNa2HPO4·12H2O 1.64gK2HPO40.82gCaCl2·2H2O 0.012gZnCl20.0012gFeSO4·7H2O 0.0012gMnSO4·H2O 0.0012gMgSO4·7H2O 0.5g盐酸硫胺素0.002g水适量至 1000cm3利用这种预培养为的是接种具有同样组成并且还含有浓度为20mM的N-甲替乙酰胺的培养介质。培养是在有搅拌的烧瓶中于28℃下进行24小时。离心分离培养所得的生物量，然后用9g/l氯化钠溶液洗涤两次。b)把含有13mg短杆菌R312细胞的离心沉淀物(干计)，悬浮在2cm3pH7的磷酸盐缓冲液(50mM)中。加入25mg的外消旋2-苯基丙腈(190微摩尔)。在25℃搅拌24小时后，用23cm3乙腈-盐酸混合物N(按体积计为90∶10)稀释反应混合物。离心除去细菌。用高效液相色谱法(CLHP)测定上清液的组成上清液含有119微摩尔2-苯基丙酰胺62微摩尔2-苯基丙酸加入氯化钠以促进水或有机相的分离。在有机相蒸干后，用20cm3的氯仿-苏打混合物0.1N(按体积计1∶1)回收残余物。碱相经酸化后，再用氯仿提取。旋光本领的测量表明异构体S(+)的对映体余量为100%。在与R(+)α-甲苄胺衍生2-苯基丙酸后，CLHP分析表明对映体余量为96.4%。实例2把含有320mg短杆菌R312细胞的离心沉淀物(干计)，悬浮在5cm3PH7.0磷酸盐缓冲液(50mM)中。加入71.2mg外消旋2-(4-氯代苯基)3-甲基丁酰胺(337微摩尔)。在25℃下搅拌117小时后，添加45cm3乙腈-盐酸混合物N(按体积计90∶10)稀释反应混合物。离心除去细菌。用高效液相色谱法(CLHP)测定混合物的组成。残留物含有258微摩尔2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰胺73微摩尔2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸加入氯化钠以促进水相和有机相的分离。在倾析分离的有机相中，加入一种醚-苏打混合物0.1N(按体积3∶1计)。在用倾析法分离水相和有机相及酸化水相后，用氯仿提取2-(4-氯苯基)3-甲基丁酸。旋光本领的测量表明异构体S(+)的对映体余量为97.5%。在用R(+)α-甲苄胺衍生酸后，CLHP分析表明对映体余量大于90%。实例3把含有321mg短杆菌R312细胞的离心沉淀物(干计)，悬浮在5cm3pH7.0磷酸盐缓冲液(50mM)中。加入75.9mg外消旋2-(4-氯苯基)-3-甲基丁腈(392微摩尔)。在25℃搅拌117小时后，添加45cm3乙腈-盐酸混合物N(按体积1∶1计)稀释反应混合物。离心除去细菌。用CLHP测定其混合物的组成。残留物含有289微摩尔2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰胺78微摩尔2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸在实例2所述的条件下提取此酸。在用R(+)α-甲苄胺衍生酸后，CLHP分析表明2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸的对映体余量占异构体S(+)的97%。权利要求1.制备通式为的2-芳基烷酸的对映体S(+)的方法，其中Ar代表可取代的芳基，R代表乙基、丙基或异丙基，其特征在于根据外消旋α-苯基丙酰胺选择性水解成α-苯基丙酸S，且对映体余量大于65%的能力选择一种微生物或这种微生物的一种酶，在这种微生物或酶存在下，对映选择性地水解可能在原处制备的相应的外消旋2-芳基烷酸酰胺，然后从2-芳基烷酸酰胺R分离2-芳基烷酸S。2.根据权利要求1的方法，其特征在于微生物选自短杆菌和棒状杆菌。3.根据权利要求2的方法，其特征在于微生物选自短杆菌R312(CBS717.73)、棒状杆菌N771(FERM P4445)和棒状杆菌N774(FERM P4446)。4.根据权利要求1的方法，其特征在于微生物既具有一种氰化酶的活性又具有使外消旋α-苯基丙酰胺对映选本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备通式为＊＊＊的２－芳基烷酸的对映体Ｓ（＋）的方法，其中Ａｒ代表可取代的芳基，Ｒ代表乙基、丙基或异丙基，其特征在于根据外消旋α－苯基丙酰胺选择性水解成α－苯基丙酸Ｓ，且对映体余量大于６５％的能力选择一种微生物或这种微生物的一种酶， 在这种微生物或酶存在下，对映选择性地水解可能在原处制备的相应的外消旋２－芳基烷酸酰胺，然后从２－芳基烷酸酰胺Ｒ分离２－芳基烷酸Ｓ。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：塞雷拉尤伊迪丝，彼得多米尼奇，
申请(专利权)人：罗纳布朗克制药公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]