一种从真菌菌丝体中提取有效成份的方法技术

本发明专利技术涉及一种从真菌菌丝体中提取有效成分“中华８０８”的方法。采用经分离、培养后命名为ＭｕｃｏｒＺｏｎａｔｕｓｍｉｌｋｏ的毛霉菌，以中草药液、化学元素、蛋白胨、葡萄糖、氯化钠组成培养基，经发酵、过滤、浓缩，提取出一种白色或黄色晶体，可以根据需要做成口服剂、针剂或片剂。该有效成分对治疗各种癌症，特别是肝癌、各种肿瘤，提高免疫功能有特殊效果，有效率达９８％，经动物试验无副作用。（*该技术在2010年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从真菌菌丝体中提取有效成份的方法。该有效成份代号为中华808，具有促进人体免疫功能的作用，特别是对治疗各种癌症有特殊疗效。目前采用从中草药中提取有效成份，或者加入微量化学元素制成具有促进免疫功能作用的药物或营养品的方法已有很多研究。也有从菌丝体中提取有效成份制成药物或保健饮料剂的方法，例如从香蕈的担子菌丝体中提取药效成份。本专利技术的目的是培养一种毛霉属的新菌种，采用这一菌种与微量化学元素和中草药提取液加工溶和，从生长出的菌丝体中提取出一种具有促进人体免疫功能的物质-“中华808”，对治疗各种癌症、肿瘤均有特殊疗效。本专利技术的特征是将载有以中草药提取液、蛋白胨、葡萄糖、化学元素、氯化钠、琼脂组成的CCD培养基的平面培养器放在土壤深处自然生长后，分离筛选出一种新的毛霉菌株，菌名为Mucor Zona-tus milko。经Ⅰ、Ⅱ级菌种液培养后将该毛霉菌的孢子接种于CCD培养基上，待菌丝丰满时挑出经水洗、过滤、冰冻后磨碎，可采用多种方法分离提取出黄色或白色晶体，即得中华808。本专利技术的要点是菌种的培养、筛选将中草药提取液20-40%，蛋白胨3-6%，葡萄糖5-10%，化学元素溶液3-6%，氯化钠3-6%，琼脂5-10%，补足蒸馏水，将pH值调至5-6.8，高压120℃灭菌30分钟，组成CCD培养基，将CCD培养基平面培养器放于深一米，宽一米，长二米的土壤坑中，坑面上盖上薄膜，薄膜上盖上五寸高的稻草，经8-12天培养，土壤中的各种微生物孢子在培养基上自然生长出，经分离筛选后，选出一株毛霉属新菌种为本专利技术菌种，菌名Mucor Zonatus milko，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC NO.0151。本专利技术采用的菌种的菌丝体在培养基(PDA，SMA)上生长很快，分枝繁茂，形成菌落起初浅褐灰色，老后颜色变深，褐灰色;孢囊梗直立，由菌丝体直接生出，假轴状分枝，直径7.5-17.5微米，顶端生有孢子囊;孢子囊成熟时球形、褐色，直径(45.0-)65.0-82.5微米，孢囊壁易破碎消失，留有囊领，孢子囊内具有囊轴;囊轴梨形、宽卵形或近球形、25.0-55.0×22.5-47.5微米;孢囊孢子椭园形，长卵形或近球形，(3.7)5.0-7.5×3.7-6.2微米。异宗配合，接合孢子未见。中草药提取液的制作方法是，将龙英、三棱、麦冬、莪术、猪苓、法半夏、当归、蒲公英、金银花、茯苓、半支莲、山豆根、木香、菊花、海藻、昆布、扁豆、冬凌草、白花蛇舌草、夏枯草、仙鹤草、贝母等草药每位各20克左右，碾成细粉末状，加水1-3倍烧开，放入罐中浸泡发酵，保持温度50℃，时间3-5天，嗅到香曲味后将罐中曲药物取出，加一倍蒸馏水拌匀，用四层纱布压滤，将滤后的液体浓缩成稀糊状，高压120℃灭菌后备用。化学元素的用量和配方是钙、镁、铁、铜、锌、硫、磷、锰、钾、碳、钡、钒、硒和硅各用量0.3-2克，钛和锶各用量0.3克，锂0.4-0.8克，钴0.03-0.05克，碘0.4-0.7克，钼0.1-0.7克，锑0.2-0.4克，铬0.4-0.8克，将上述用量的化学元素配合在一起，在600目的筛网上加工后，溶于500毫升的双蒸馏水中，搅动20分钟，用四层纱布过滤，得清液，高压120℃灭菌30分钟后备用。菌种液的制备Ⅰ级菌种液的制法将筛选出的菌种接种在由中草药液20%，葡萄糖5%，氯化钠3%，化学元素溶液3%，蛋白胨3%，琼脂5%的斜面试管菌种培养基内，补足水份，pH值5.8-6.4，15磅/cm2灭菌30分钟，接种后在20-30℃温度下，恒温培养72-120小时后取出。Ⅱ级菌种液的制法将Ⅰ级菌种液接种在由中草药液40%，葡萄糖10%，氯化钠6%，化学元素6%，蛋白胨6%，琼脂10%的培养基内，补足蒸馏水，pH值5.8-6.4，15磅/cm2灭菌30分钟，接种后在20-30℃温度下，恒温培养48-64小时后取出。毛霉菌的培养将上述方法培养出的毛霉菌的孢子接种在CCD培养基上，可接种于斜面试管或平面培养器中，或在无菌间内大面积培养。无论以何种方式培养，均要保持充足的氧气和一定的湿度，温度保持在20-30℃，经10天左右菌丝即可长丰满，此时将菌丝挑出，用5-10%的生理盐水洗净培养基的杂质，在0℃以下用三层纱布过滤后，将干净菌丝放在冰箱或冰库中冷冻。毛霉菌中有效成分的提取和分离方法将冰冻的菌丝磨碎后通常采用溶媒淬取法，或盐析法或离子交换法提取和分离其有效成份。当采用溶媒淬取法时，所用溶剂可以是有机溶剂，甲醇，乙醇，氯仿，丙酮等，最好使用乙醇三次淬取。分离提取后的成品为黄色或白色晶体，加入防腐剂后放入冰箱保存备用。“中华808”的制作方法取10克上述黄色或白色晶体，将其溶于200毫升蒸馏水即成为口服剂。采用常规方法可以做成针剂或片剂。本专利技术的优点是采用该方法从真菌菌丝中提取的有效物质“中华808”，对治疗各种癌症，特别是肝癌、各种肿瘤，提高免疫功能有特殊效果，有效率达98%，经动物试验无副作用。用量口服剂成人12ml/日，三次/日，儿童减半。实施例1.CCD培养基的制作中草药液80克，蛋白胨15克，葡萄糖20克，氯化钠10克，化学元素12克，琼脂10克，蒸馏水53克，将pH调至5，15磅/cm2，120℃灭菌30分钟。其中中草药液的制作取龙英、三棱、麦冬、莪术、猪苓、瓜蒌、法半夏、当归、蒲公英、金银花、茯苓、半支莲、穿心莲、山豆根、木香、菊花、海藻、昆布、扁豆、冬凌草、白花蛇舌草、夏枯草、仙鹤草、贝母24位草药各20克，共碾成粉末，加二倍自来水烧开，放入罐中浸泡发酵，温度50℃，时间4天，嗅到香曲味后取出，加一倍蒸馏水拌匀，用四层纱布压滤，得出液体，浓缩成稀糊状，高压120℃灭菌后备用。化学元素的配方和制作钙0.6克，镁0.6克，锂0.4克，钛0.3克，铁0.6克，钴0.03克，铜0.4克，锌0.7克，硫0.6克，磷0.5克，碘0.7克，钼0.1克，锰0.6克，钾0.7克，锑0.2克，铬0.4克，碳0.4克，钡0.2克，钒0.2克，锶0.3克，硒0.4克，硅0.4克，将上述化学元素配合在一起，在600目的筛网上加工后，加入500毫升的双蒸馏水中，用玻璃棒不停地搅动20分钟，用四层纱布过滤，所得清液高压120℃灭菌30分钟备用。2.将载有CCD培养基的平面培养器放入深一米，宽一米，长二米的土坑中，坑面上盖有塑料薄膜，其上盖有五寸厚的稻草。经10天左右，土壤中的各种微生物孢子在培养基上自然生长，经分离筛选出本专利技术菌种。3.Ⅰ级菌种的制备将筛选出的菌种接种在由中草药液20克、葡萄糖5克、氯化钠3克、化学元素溶液3克、蛋白胨3克、琼脂5克组成的菌种培养基内，可使用斜面试管。补充61克蒸馏水，pH为6。在15磅/cm2力下灭菌30分钟，然后在25℃下恒温培养四天后取出。4.Ⅱ级菌种液的制备将Ⅰ级菌种液接种在由中草药液40克，葡萄糖10克，氯化钠6克，化学元素溶液6克，蛋白胨6克，琼脂10克的培养基内，可使用三角烧瓶。补充22克蒸馏水，pH为6。在15磅/cm2下灭菌30分钟，然后在25℃下恒温培养二天后取出。5.毛霉菌的培养将上述方法培养出的毛霉菌的孢子在斜面试管中接种在CCD培养基上，保持充足本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从真菌菌丝体中提取有效成份“中华８０８”的方法，其特征在于：将中草药提取液２０－４０％，蛋白胨３－６％，葡萄糖５－１０％，化学元素３－６％，氯化钠３－６％，琼脂５－１０％，补足蒸镏水，将ＰＨ值调至５－６．８，高压１２０℃灭菌３０分钟，组成ＣＣＤ培养基；将ＣＣＤ培养基平面培养器放于土壤深处自然生长８－１２天后取出，经分离筛选，培养出一种新菌株，菌名为Ｍｕｃｏｒ－ｚｏｎａｔｕｓ－ｍｉｌｋｏ，毛霉属的一个种，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：ＣＧＭＣＣ＊＊ＮＯ．０１５１；经Ⅰ、Ⅱ级菌种液培养后将该毛霉菌的孢子在斜面试管或平面培养器中接种于ＣＣＤ培养基，也可在无菌间内大面积培养，待菌丝体长丰满时，立即将菌丝挑出，用５－１０％的生理盐水洗净、过滤、冰冻后磨碎，采用溶媒淬取法、盐析法或离子交换法等方法分离提取，浓缩成黄色或白色晶体，即得成品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周发祥，
申请(专利权)人：周发祥，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]