叶酸的生产方法技术

公开了一种生产叶酸的方法，其中包括培养能够产生叶酸的酵母或者培养能够在每升培养液中产生１毫克或更多叶酸的细菌，以便在所说的培养液中积累叶酸。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。本文所说的叶酸包括具有叶酸活性的全部物质而不应当仅仅限制在以该词的狭窄含义通常叫做叶酸的蝶酰谷氨酸(以下记作PteGlu)上。除了PteGlu之外，它还包括，例如蝶酰-聚-γ-谷氨酸(以下记作n＝2-8的PteGlun)、四氢叶酸、5-甲酰基-四氢叶酸、10-甲酰基-四氢叶酸和5-甲基-四氢叶酸等等。作为叶酸的PteGlu在工业上目前是利用化学合成的方法生产的。简言之，在乙酸钠溶液中，在亚硝酸钠存在下，使2，4，5-三氨基-6-羟基嘧啶、1，1，3-三氯丙酮和对氨基苯甲酸等三成分缩合，生成叶酸，PteGlu粗产物，并且利用重结晶法纯化该产物。一些文章中指出，假单细菌、细球菌、匍糖杆菌、棒状杆菌、气单胞菌和芽胞杆菌等菌属的细菌，在其培养液中产生少量(几十-一百几十微克/升)的具有叶酸活性的物质，参见〖细菌杂志〗，104，197-201页(1970)，以及Kor.J.Appl.Microbiol Bioeng，(16)，5，352页(1988)。生产叶酸的传统的化学合成方法是已知的，但是在这些已知的方法中使用的原料昂贵，而且产品的产率也低。因此，很难说该方法是有益的。正如上面所提到的那样，在一些报告之中披露若干种细菌能在培养液中产生具有叶酸活性的物质，但是所产生的该物质量极少。因此，这些公开的提议是成问题的，因为这些提议不能直接导致所说物质的工业化生产。本专利技术涉及生产叶酸的方法，其中包括培养能够产生叶酸的酵母或者培养能够产生叶酸的细菌，使之在每升培养液中产生l毫克或更多的叶酸，以便使叶酸在所说的培养液中积累。此外，本专利技术还涉及生产叶酸的方法，其中包括在对氨基苯甲酸存在下使用微生物。本文中所说的叶酸包括具有叶酸活性的全部物质，或者换句话说，包括其生物活性可以通过需叶酸的乳酸菌菌株、干酷乳杆菌(Lactobacillus casei)ATCC7469)、粪链球菌(Streptococcus faecalis)ATCC 8043和啤酒小球菌(Pediococcus cerevisiae)ATCC 8081的生长加以定量测定的那些物质。例如，作为具有叶酸活性的物质，可以提到以该词的狭窄含义通常叫做叶酸的蝶酰谷氨酸(以下记作PteGlu)、蝶酰-聚-γ-谷氨酸(以下记作n＝2-8的PteGlun)、四氢叶酸、5-甲酰基-四氢叶酸、10-甲酰基-四氢叶酸和5-甲基-四氢叶酸等等。本专利技术中优选使用属于假丝酵母属、球拟酵母属、酵母属和毕赤酵母属等属的酵母以及属于杆菌属、红球菌属和短杆菌属等属的细菌。例如这样的酵母包括Candida famata ATCC 10536、Candidaguilliermondii(吉利蒙念珠菌)ATCC 9058、Candida petrophilum ATCC20226、Saccharomyces cerevisiae(酿酒酵母)ATCC 26108、Pichiaglucozyma ATCC 18938、Torulopsis Glabrata(光滑球拟酵母)ATCC15126、Torulopsis petrophilum ATCC 20225等；而且这样的细菌包括Bacillus subtilis(枯草杆菌)ATCC 19219、Bacillus megaterium(巨大芽胞杆菌)ATCC 19218、Rhodococcus equi ATCC 21280、Brevibacteriumammoniagenes ATCC 6872等等。当然，优选使用的是Candida famata ATCC10536、Candida guilliermondii(吉利蒙念珠菌)ATCC 9058、Torulopsispetrophilum ATCC 20225、Pichia glucozyma ATCC 18938、TorulopsisGlabrata ATCC 15126(光滑球拟酵母)和Saccharomyces cerevisiae(酿酒酵母)ATCC 26108等酵母；以及Bacillus subtilis(枯草杆菌)ATCC 19219、Bacillus megaterium(巨大芽胞杆菌)ATCC 19218等细菌。本专利技术中使用的细菌应当在其1升培养液中能够产生1毫克或更多，优选1.5毫克或更多叶酸。所说的生产能力可以按照〖维生素和辅助酶〗(TokyoKagaku Dojin Co.出版)最后卷第385-388页上记载的方法，通过测量基于需叶酸的菌株，粪链球菌(Streptococcus faecalis)ATCC 8043生长的生物活性加以定量测定。简言之，将试验溶液加入到具有下面提到组成的培养基之中，试验溶液的加入量与所说的培养基量相同，然后在所说的培养基上接种上面提到的需叶酸菌株的细胞并且在37℃下在其中培养。24小时之后，测量在该培养基中如此生长的细胞数量。对于此数量与在作为标准对照使用的其中含有蝶酰谷氨酸的培养基中生长的粪链球菌(Streptococcus faecalis)ATCC8043细胞数进行比较。 重量/10ml(培养基)对于欲在本专利技术中使用的酵母来说并无特别的限制，但是最好是能够在每升培养液中产生按照上面提到的方法测量时达300微克或更多叶酸的酵母。为了按照本专利技术方法培养这样的酵母。适于使用的培养基是这样的，其中含有能被所说的酵母同化的碳源、能被其同化的氮源，以及其他无机盐和少量元素。所说的碳源包括糖类，例如葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等；有机酸，例如乙酸、乳酸和富马酸等，醇类，例如，甲醇、乙醇和丙醇等以及例如甘油和豆油之类的油脂。所说的氮源包括无机和有机含氮化合物，例如硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、尿素、胨、肉羹、玉米浆和氨水等。所说的无机盐包括磷酸钾、磷酸钠和硫酸镁，以及铁、锰和其他金属的化合物。必要时，所说的介质还可以含有例如维生素、氨基酸和核酸之类的少量成分。此外，必要时也可以含有表面活性剂。优选再加入一些谷氨酸或其衍生物(0.01-5％)。特别是更优选加入谷氨酸、谷氨酸钠和谷氨酸钾。在本专利技术方法中，一般在需氧的条件下进行培养比较有利。所说的培养过程，通常可以在15-40℃(优选在20-35℃)和2-10(优选3-8)pH下培养1-10(优选3-6)天。为了按照本专利技术方法培养细菌，适于使用的培养基中应当含有能够被所说的细菌同化的碳源、能够被其同化的氮源、其他无机盐和少量成分。所说的碳源包括例如葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，例如乙酸、乳酸、富马酸、琥珀酸和马来酸等有机酸类，以及例如甘油和豆油之类的油脂。所说的氮源包括所说的氮源包括无机和有机含氮化合物，例如硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、尿素、氨水、胨、肉羹、玉米浆、ajieki和酵母提取物等。所说的无机盐包括磷酸钾、磷酸钠和硫酸镁，以及铁、锰和其他金属的化合物。必要时，所说的介质还可以含有例如维生素、氨基酸和核酸之类的少量成分。优选再加入一些谷氨酸或其衍生物(0.01-5％)。特别是更优选加入谷氨酸、谷氨酸钠和谷氨酸钾。在本专利技术方法中，一般在需氧的条件下进行培养比较有利。所说的培养过程，通常可以在15-40℃(优选在25-37℃)和5-10(优选6-9)pH下培养1-12(优选3-7)天。本专利技术还提供一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产叶酸的方法，其中包括培养能够产生叶酸的酵母或者培养能够在每升培养液中产生１毫克或更多叶酸的细菌，以便在所说的培养液中积累叶酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：宫田令子，米原彻，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]