酶活化因子XII (FXIIa)的新型抑制剂制造技术

本发明专利技术涉及包含肽(X

A new inhibitor of enzyme activating factor XII (FXIIa)

The invention relates to the inclusion peptide (X

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】酶活化因子XII(FXIIa)的新型抑制剂
本专利技术涉及包含肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X9)l(X10)(X11)(X12)(X13)(X14)k(X15)(X16)或由肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X9)l(X10)(X11)(X12)(X13)(X14)k(X15)(X16)组成的凝血酶活化因子XII(FXIIa)的双环抑制剂，其中(X1)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；(X2)是具有侧链的氨基酸；(X3)是氨基酸，并且n在0和3之间，优选0或1且最优选0；(X4)是脂肪族L-氨基酸或环状L-氨基酸，优选L、P或芳香族L-氨基酸，且最优选芳香族L-氨基酸；(X5)是氨基酸；(X6)是氨基酸，并且m在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X7)是具有侧链的氨基酸；(X9)是氨基酸，并且l在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X10)是氨基酸；(X11)是氨基酸，优选Q；(X12)是疏水性L-氨基酸，优选脂肪族L-氨基酸，且最优选为L；(X13)是氨基酸；(X14)是氨基酸，并且k在0和3之间，优选0或1，且最优选0，(X15)是具有侧链的氨基酸；并且(X16)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；并且其中(X2)、(X7)和(X15)的侧链经由连接分子连接，所述连接分子具有至少三个官能团，每个官能团与(X2)、(X7)和(X15)侧链之一形成共价键。
技术介绍
在本说明书中，引用了许多文件包括专利申请和制造商的手册。这些文件的公开内容虽然不视为与本专利技术的可专利性相关，但随同通过引用全文并入。更具体地，所有提及的文件通过引用并入，至如同每个个别文件特别且个别指出通过引用并入相同的程度。血液凝固测试常规地在临床实验室中执行，以评价患者中的凝血功效。在大多数凝血测试中，用强触发剂诱导血液凝固，并且凝血时间用作凝血潜能的指标。虽然这些测试在诊断上有用，但它们在其与患者的出血或血栓形成风险相关的能力有限。更新的总体凝血测定法例如血栓弹力图(TEG)、血栓弹力描记术(TEM)和校准的自动化血栓造影术(thrombography)(CAT)递送了凝血过程的更多参数，并且有希望更好地预测凝血潜能。朝向使用TEG和TEM、粘弹法测定方法测试全血中的止血已做出了重大努力。它们允许在模拟静脉流动下研究凝血期和随后的裂解期。粘弹法测定方法已经在临床中用于围手术期出血管理。TEG用作医院中的分析方法。在一些TEG和CAT测定法中，凝血触发组织因子(TF)必须以低浓度使用，以便最佳地反映患者中的凝血潜能。然而，在这种测定法中，FXII与样品管的接触可以引发内源性凝血途径并且伪造结果。玉米胰蛋白酶抑制剂(CTI)，从以24nM的Ki抑制FXIIa的玉米种子中分离的13.6kDa蛋白质，迄今为止用于压制这些效应。1,2它因此是FXIIa的天然抑制剂。然而，CTI在通常使用的浓度(30-100μg/mL)下不能完全阻断接触活化。另外，近期研究显示CTI还抑制其他相关的蛋白酶如FXIa。3CTI的另一个限制是高价格：每个测定法通常使用的50μg研究级CTI花费5-10美元，取决于提供者。TEM在临床中常规用于围手术期出血管理。近期，已创建了使用TEM来区分严重和轻度嗜血病症的联盟。这种分类需要进行由低TF浓度触发的EXTEM测试(具有经由外源性途径的特异性诱导凝血的TEM)。TEM和低TF诱导的TGA两者都需要使用接触活化抑制剂。几项近期研究指示内源性凝血牵涉病理性凝血，并且已将凝血因子FXII表征为治疗靶。4-10生理分子例如DNA、RNA、蛋白质聚集体、多磷酸盐和胶原据报道活化FXII且触发血栓形成。11发现FXII缺陷小鼠在呈现正常止血的同时保护免于血栓形成。8来自同类者研究的数据提示升高的血浆FXII水平与冠心病事件的风险增加相关。4,12同时，内源性途径中的缺陷没有严重的病理后果。FXII缺陷个体呈现正常的止血能力。13,14抗体介导的FXII抑制在灵长类动物中证实了这一发现。7已开发了各种起源和作用模式的一系列FXII抑制剂。RNA-适体R4cXII-1.9和小鼠mAb15H8抑制FXII的自动活化。7重组吸血昆虫蛋白质结构域infestin4(rHA-infestin-4；Ki＝0.3nM)15,16，并且噬菌体展示衍生的人源化抗体3F7是FXII的活化形式的直接抑制剂(Ki＝13nM)。6它们都显示在体外凝血测定法中凝血的内源性途径的选择性抑制。15H8、rHA-infestin-4和3F7在各种血栓形成模型和物种中显示有效的体内保护，而无相关出血。4,6,7,9,10开发了几种小分子FXIIa抑制剂，但它们抑制结构相关的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。17近期，开发了具有超过相关蛋白酶的高选择性(>100倍)的合成FXIIa抑制剂。18然而，它的效力(Ki＝1.2μM)不允许将其朝向治疗化合物的生成进一步开发。尽管FXII在内源性凝血级联中的关键作用，但目前尚不存在具有纳摩尔范围内的结合常数的选择性合成FXII抑制剂。因此，持续需要FXIIa的进一步抑制剂，其克服了与目前可用的FXIIa抑制剂相关的至少一个缺点。这些抑制剂尤其对于本文下文所述的FXIIa抑制剂的诊断和治疗应用有利。特别地，需要提供在纳摩尔范围内的FXIIa的选择性抑制的抑制剂。这个需要由本专利技术解决。
技术实现思路
相应地，本专利技术在第一个方面涉及包含肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X8)或由肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X8)组成的凝血酶活化因子XII(FXIIa)的双环抑制剂，其中(X1)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；(X2)是具有侧链的氨基酸；(X3)是氨基酸，并且n在0和3之间，优选0或1且最优选0；(X4)是脂肪族L-氨基酸或环状L-氨基酸，优选L、P或芳香族L-氨基酸，且最优选芳香族L-氨基酸；(X5)是氨基酸；(X6)是氨基酸，并且m在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X7)是具有侧链的氨基酸；并且(X8)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；并且其中(X2)和(X7)的侧链经由连接分子连接，所述连接分子具有至少两个官能团，每个官能团与(X2)和(X7)侧链之一形成共价键。具体实施方式术语“包含(comprise)/包含(comprising)”一般以包括(include)/包括(including)的含义使用，即允许一个或多个特征或组分的存在。术语“包含(comprise)”和“包含(comprising)”也涵盖更有限的术语“由……组成(consistof)”和“由……组成(consistingof)”。如在说明书和权利要求中使用的，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一个”，“一种”和“该/所述”包括复数所指物。如本文使用的，“活化因子XII”或“FXIIa”(EC3.4.21.38)指通过与带负电的表面接触(称为接触活化)起始内源性凝血途径的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。它活化一系列蛋白酶，包括FXI、FIX、FX和凝血酶。凝血酶活化纤维蛋白原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含肽(X

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.28 EP 15165508.11.一种包含肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X9)l(X10)(X11)(X12)(X13)(X14)k(X15)(X16)或由肽(X1)(X2)(X3)n(X4)RL(X5)(X6)m(X7)(X9)l(X10)(X11)(X12)(X13)(X14)k(X15)(X16)组成的凝血酶活化因子XII(FXIIa)的双环抑制剂，其中(X1)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；(X2)是具有侧链的氨基酸；(X3)是氨基酸，并且n在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X4)是脂肪族L-氨基酸或环状L-氨基酸，优选L、P或芳香族L-氨基酸，且最优选芳香族L-氨基酸；(X5)是氨基酸；(X6)是氨基酸，并且m在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X7)是具有侧链的氨基酸；(X9)是氨基酸，并且l在0和3之间，优选0或1，且最优选0；(X10)是氨基酸；(X11)是氨基酸，优选Q；(X12)是疏水性L-氨基酸，优选脂肪族L-氨基酸，且最优选为L；(X13)是氨基酸；(X14)是氨基酸，并且k在0和3之间，优选0或1，且最优选0，(X15)是具有侧链的氨基酸；和(X16)存在或不存在，并且如果存在，则为氨基酸；和其中(X2)、(X7)和(X15)的侧链经由连接分子连接，所述连接分子具有至少三个官能团，每个官能团与(X2)、(X7)和(X15)侧链之一形成共价键。2.权利要求1的抑制剂，其中(X4)选自L、P、F、W、Y、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、3-苯并噻吩丙氨酸、3-氟-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、2-氨基-3-(吡啶-3-基)丙酸、2-氟-苯丙氨酸、4-氟-苯丙氨酸和2-硝基-苯丙氨酸，优选选自F、W、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、3-苯并噻吩丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、2-氨基-3-(吡啶-3-基)丙酸、2-氟-苯丙氨酸、4-氟-苯丙氨酸和2-硝基-苯丙氨酸，更优选选自F、W、2-萘基丙氨酸、3-苯并噻吩丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、2-氨基-3-(吡啶-3-基)丙酸、2-氟-苯丙氨酸、4-氟-苯丙氨酸和2-硝基-苯丙氨酸，和最优选选自2-萘基丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、2-氨基-3-(吡啶-3-基)丙酸、2-氟-苯丙氨酸、4-氟-苯丙氨酸和2-硝基-苯丙氨酸。3.权利要求1或2的抑制剂，其中(X5)是疏水性L-氨基酸或极性、不带电荷的L-氨基酸，优选疏水性L-氨基酸，更优选S、A、L或P，且最优选L或P。4.权利要求1至3中任一项的抑制剂，其中(X2)、(X7)和(X15)的侧链包含官能团，所述官能团优选对于(X2)、(X7)和(X15)...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·海尼斯，V·贝利斯维尔，S·米登多普，J·A·K·威尔布斯，
申请(专利权)人：洛桑联邦政府综合工科学校EPFL，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH