新的人核受体协阻抑物编码序列、其编码的多肽及制法制造技术

本发明专利技术提供了一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明专利技术涉及人ＨＮＲ ＣＲ的ｃＤＮＡ序列，该序列编码的蛋白是核受体协阻抑物（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ，简称ＮＲＣＲ）的同系物。本发明专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人HNRCR的cDNA序列，该蛋白是核受体协阻抑物(nuclear receptor coreceptor，简称NRCR)的同系物。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。核受体协阻抑物是一种能和核受体共同作用，调节靶基因转录的蛋白分子。类固醇、类视黄醇、甲状腺素能够通过对细胞内相应的受体调节，开启特异基因的表达。这些激素的受体组成了一个称作核调节蛋白的超家族，其成员都是具有高度特异性和选择性的，依赖于配体作用的转录因子。这些受体结合于基因的上游调控区，当它们未和相应配体结合时，能通过和核受体协阻抑物的作用，抑制这些基因的表达(Gene Dev.11835-846，1997)。1995年Howard Hughes医学院的Horlein等人用结合分析法率先从CV-1细胞中分离得到一个分子量为270kD的人核受体协阻抑物蛋白(N-CoR)。他们的方法是将CV-1全细胞的抽提物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移至硝纤膜上，用32P标记甲状腺素受体C末端与之进行杂交。随后他们又用酵母双杂交法获得了编码该蛋白的部分cDNA顺序，并且在鼠的垂体cDNA库中筛选到了该cDNA的全长序列(Nature377397-404，1995)。同年，该医学院的Chen等人用相似的方法得到了另一个转录协阻抑物——类视黄醇和甲状腺素受体沉默中介体(silencing mediator for retinoidand thyroid hormone receptor，SMRT)的cDNA全长序列(Nature 377454-457，1995)。近年来又有一些270kD核受体协阻抑物蛋白的不同剪切的形式的产物被报道发现(Mol.Endocrinol.10(12)1646-1655，1996)。1997年，Zamir等人克隆了一个和已知N-CoR、SMRT无同源关系的协阻抑物SUN-CoR(P.A.N.S.9414400-14405，1997)。在本专利技术之前，尚没有任何人公开过本申请中涉及的另一种人类核受体协阻抑物成员HNRCR。本专利技术的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人的核受体协阻抑物同源蛋白，本专利技术的核受体协阻抑物同源基因被命名为HNRCR。本专利技术的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为HNRCR蛋白。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人HNRCR蛋白的方法。本专利技术还提供了这种人HNRCR编码序列和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人HNRCR蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.20所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的HNRCR蛋白多肽，它包括具有SEQ ID NO.20氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.20序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有HNRCR蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有HNRCR蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成HNRCR蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成HNRCR蛋白的重组细胞；(c)在适合表达HNRCR蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有HNRCR蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为7900个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.19，其中开放读框位于75-7106位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“HNRCR蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有HNRCR蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.19中75-7106位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.19序列的编码框75-7106位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.19中75-7106位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.20所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地，在高度严紧条件下与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。此外，该术语还包括与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与人HNRCR相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.19中开放读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个核苷酸。在本专利技术中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。在本专利技术中，术语“HNRCR蛋白多肽”指具有HNRCR蛋白活性的SEQ IDNO.20序列的多肽。该术语还包括具有与人HNRCR相同功能的、SEQ ID NO.20序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括HNRCR蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与HNRCR DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗HNRCR多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术还提供了其他多肽，如包含HNRCR多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本专利技术还包括了HNRCR多肽的可溶性片段。通常，该片段具有HNRCR多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约50个连续氨基酸，较佳地至少约100个连续本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ＨＮＲＣＲ蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１９中从核苷酸７５－７１０６位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下 与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１９中从核苷酸７５－７１０６位的核苷酸序列杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，屠强，赵勇，张宏来，赵寿元，
申请(专利权)人：上海新黄浦复旦基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]