副溶血弧菌噬菌体及包含该噬菌体的杀菌组合物制造技术

本发明专利技术涉及副溶血弧菌噬菌体及包含该噬菌体的杀菌组合物。该噬菌体可在短时间内快速抑制弧菌的生长，且抑制作用维持时间长。此外，该噬菌体的杀菌组合物安全、有效，且特异性强，生产成本低，在致病菌的控制过程中弥补了单一噬菌体疗法的不足。

Vibrio parahaemolyticus Phage and bactericidal composition containing the phage

The present invention relates to Vibrio parahaemolyticus Phage and bactericidal composition containing the phage. The bacteriophage can rapidly inhibit the growth of Vibrio in a short time, and the duration of inhibition is long. In addition, the bactericidal composition of the bacteriophage is safe, effective, highly specific and low in production cost, which makes up for the shortage of single bacteriophage therapy in the control process of pathogenic bacteria.

【技术实现步骤摘要】
副溶血弧菌噬菌体及包含该噬菌体的杀菌组合物
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种副溶血弧菌噬菌体及包含该噬菌体的杀菌组合物。
技术介绍
我国是水产养殖大国。近年来，我国的水产养殖业获得迅猛发展。随着海水养殖规模的日益扩大和集约化养殖方式的不断推广，鱼类疾病的频繁发生对海水鱼类规模化养殖的健康发展造成了严重的威胁。鱼类的病原体主要包括细菌、病毒、寄生虫等，其中细菌性疾病是对鱼类危害程度较为严重的一类疾病。弧菌是能运动的芽孢短杆状细菌，广泛分布于近海岸、河口海区海水及生物体内，是海洋中最常见的细菌类群之一，同时也是引起海水养殖鱼虾细菌性疾病最重要的病原菌之一。弧菌的致病强度与宿主的生理状态及水质环境条件等综合因素有关，属于条件性致病菌，其主要通过口或伤口感染，产生毒素，致使伤口肌肉溃烂化脓以及内脏器官的严重病变从而导致鱼虾类的死亡。由弧菌引起的疾病又称弧菌病，具有“流行面积广，发病率高，致死性强”等特点，是水产养殖动物的主要疾病，同时也被确定为是阻碍水产养殖业发展的重要限制性因素，给养殖业造成了巨大的危害。其中，以鳗弧菌(Vibrioanguillarum)、溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)和杀鲑弧菌(Vibriosalmonicida)等弧菌引起的弧菌病被认为是鱼虾类养殖中最为严重的病害之一。目前，针对水产养殖相关动物疾病的预防和控制方法主要以化学抗生素法和免疫疫苗法，其中以化学抗生素使用为主。作为当前控制水产动物疾病的主要手段，化学抗生素法具有使用方便、见效快和疗效好等优点。但是，大批量频繁使用抗生素在控制病原菌的同时，极大了助长了病原菌的耐药性，并加速了广谱耐药菌的产生。这使得致病菌的耐药性问题日益严重。此外，化学药物残留也是导致人类食源性疾病产生的重要原因之一，对人类健康造成严重危害。噬菌体又称细菌性病毒，是一类专一性裂解细菌的病毒，在环境中分布广泛，种类多样，结构简单，具有很强的宿主特异性。最重要的一点，噬菌体裂解细菌的机制不受细菌耐药性的影响，其通过受体识别从而吸附在特定宿主菌表面，将自身遗传物质注入宿主体内进行自我复制组装，并最终通过裂解宿主菌释放子代从而实现自我的生长繁殖。利用噬菌体控制水产致病菌早在噬菌体被发现之前就有应用，但由于对噬菌体的研究不够充分，而抗生素在当时具有广谱抑菌效果，且疗效好见效快，这使得噬菌体应用被大大削弱。近年来，由于抗生素滥用引发的一系列耐药菌问题，使得噬菌体重新回归人们的视野，应用噬菌体控制致病菌的研究也在科学界引起了广泛兴趣。作为应对抗生素抗性的重要武器之一，噬菌体的临床应用潜力巨大，但就其当前单一噬菌体疗法的应用而言，其在应用过程中仍存在一些潜在的缺点，如裂解宿主谱窄，裂解能力持续时间短，宿主菌易产生抗性等，其中以宿主菌易产生抗性为单株噬菌体应用的主要缺陷。针对以上单一噬菌体疗法存在的不足，将多种噬菌体混合使用的鸡尾酒疗法应运而生。其通过多种噬菌体之间的复配既扩大了宿主谱范围，同时有效的抑制宿主菌抗性的产生，具有快速高效的裂解作用，目前在临床应用的研究中已取得较好的效果。此外，噬菌体鸡尾酒通过噬菌体之间的协同作用降低了在相等条件下单株噬菌体的添加剂量，起到了节约成本的作用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术涉及一种专一性裂解弧菌的副溶血弧菌噬菌体，保藏名为VpaSw-1，于2017年09月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:M2017500，分类命名为Vibriophage。该噬菌体均保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，武汉大学中国典型培养物保藏中心；保藏时间为：2017年09月14日。经保藏中心于2017年09月27日检测为存活菌株。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例中的噬菌体筛选流程图；图2为透射电镜下的各弧菌噬菌体的形态；a：噬菌体ValDsh1-1；b：VpaSw-1；c：VpaSw-2；d：ValSw3-1；e：ValSw3-2；f:ValSw3-3；图3为基于16sDNA的宿主菌进化树；3-副溶血弧菌(Vibrio.parahaemolyticus)；18-溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)；F1-金黄色弧菌(Vibrio.azureus)；F3-溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)；F4-弧菌(Vibrio.sp)；F10-副溶血弧菌(Vibrio.parahaemolyticus)；图4为不同感染复数(MOI)下单株噬菌体对溶藻弧菌V.alginolyticus的生长曲线作用图；在不同的MOI(10，1，0.1，0.01，0.001)下，3株噬菌体分别对溶藻弧菌生长曲线(OD600)抑制效果，control组(菌液+培养基)表示不加噬菌体，Blank组(培养基)表示空白对照；f4-1：ValSw3-1；f4-2：ValSw3-2；f4-3：ValSw3-3；图5为当MOI＝1时不同噬菌体鸡尾酒组合对6株病原菌生长曲线的作用图；a—副溶血弧菌(Vibrio.parahaemolyticus)；b—溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)；c—金黄色弧菌(Vibrio.azureus)；d—溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)；e—弧菌(Vibrio.sp)；f:—副溶血弧菌(Vibrio.parahaemolyticus)；cock-1：ValSw3-1，ValDsh1-1；cock-2：ValSw3-1，VpaSw-1；cock-3：ValSw3-1，VpaSw-2；cock-4：ValSw3-1，ValSw3-2，ValSw3-3，VpaSw-1；cock-5：ValSw3-1，ValSw3-2，ValSw3-3，VpaSw-2，ValDsh1-1；control：菌液+培养基(不加噬菌体)；Blank：培养基。本专利技术所提供的溶藻弧菌噬菌体ValDsh1-1(VibriophageValDsh1-1)，保藏号为CCTCCNO:M2017499；本专利技术所提供的副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1(VibriophageVpaSw-1)，保藏号为CCTCCNO:M2017500；本专利技术所提供的副溶血弧菌噬菌体VpaSw-2(VibriophageVpaSw-2)，保藏号为CCTCCNO:M2017501；本专利技术所提供的溶藻弧菌噬菌体ValSw3-1(VibriophageValSw3-1)，保藏号为CCTCCNO:M2017502；本专利技术所提供的溶藻弧菌噬菌体ValSw3-2(VibriophageValSw3-2)，保藏号为CCTCCNO:M2017503；本专利技术所提供的溶藻弧菌噬菌体ValSw3-3(Vibr本文档来自技高网...

【技术保护点】
副溶血弧菌噬菌体VpaSw‑1，于2017年09月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 2017500，分类命名为Vibrio phage。

【技术特征摘要】
1.副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1，于2017年09月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:M2017500，分类命名为Vibriophage。2.含有权利要求1所述的副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1的杀菌组合物；优选的，所述杀菌组合物含有所述副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1以及其它弧菌噬菌体中的至少一种。3.根据权利要求2所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物还包括溶藻弧菌噬菌体ValDsh1-1，保藏号为：CCTCCNO:M2017499；副溶血弧菌噬菌体VpaSw-2，保藏号为CCTCCNO:M2017501；溶藻弧菌噬菌体ValSw3-1，保藏号为CCTCCNO:M2017502；溶藻弧菌噬菌体ValSw3-2，保藏号为CCTCCNO:M2017503；以及溶藻弧菌噬菌体ValSw3-3，保藏号为CCTCCNO:M2017504中的一种或多种；上述噬菌体均于2017年09月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名均为Vibriophage。4.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物包括所述副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1以及所述溶藻弧菌噬菌体ValSw3-1；或，所述杀菌组合物包括所述副溶血弧菌噬菌体VpaSw-1、所述溶藻弧菌噬菌体ValSw3-1、所述溶藻弧菌噬菌体ValSw3-2以及所述溶藻弧菌噬菌体ValSw3-3。5.根据权利要求2～4任一项所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物中还包括各噬菌体突变体中的一种或多种；优选的，所述突变体至少90％与对应的弧菌噬菌体的天然序列相同。6.根据权利要求2～4任一项所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物中每种弧菌噬菌体的含量≥106PFU/mL；...

【专利技术属性】
技术研发人员：马迎飞，陈玲，樊继强，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44