RPS15A基因的用途及其相关药物制造技术

本发明专利技术公开了人RPS15A基因的用途及其相关药物。本发明专利技术公开了人RPS15A基因在肿瘤治疗药物制备中的用途。本发明专利技术还进一步构建了人RPS15A基因小分子干扰RNA、人RPS15A基因干扰核酸构建体、人RPS15A基因干扰慢病毒并公开了它们的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人RPS15A基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中RPS15A基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。

The use of RPS15A gene and its related drugs

The present invention discloses the use of the human RPS15A gene and its related drugs. The invention discloses the use of the human RPS15A gene in the preparation of a tumor therapy drug. The invention further constructs human RPS15A gene small interfering RNA, human RPS15A gene interference nucleic acid construction and human RPS15A gene interference lentivirus, and discloses their uses. The present invention provides siRNA nucleic acid or contain the sequence of the siRNA constructs, lentivirus can specifically inhibit the expression of human RPS15A gene, especially the lentivirus can efficiently infect target cells efficiently inhibit the expression of RPS15A gene in target cells, and inhibit tumor cell growth and promote apoptosis of tumor cells, has an important the significance in tumor therapy.

【技术实现步骤摘要】
RPS15A基因的用途及其相关药物
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及RPS15A基因的用途及其相关药物。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.)。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程(Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.)。RPS15A位于(16号染色体短臂的1区3带)16p13，属于RPS8家族。RPS15A在翻译的早期可促进mRNA帽结合蛋白与核糖体小亚基结合。Shend等用mRNA展示技术扫描人类钙调素结合蛋白程序库时发现RPS15A可与钙调素(CaM)结合，从而启动其核糖体装配和翻译进程。但RPS15A在骨肉瘤中的作用未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开与人RPS15A基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰(RNAi)为手段研究RPS15A基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。本专利技术第一方面，以RNA干扰为手段，研究了RPS15A基因在肿瘤发生和发展中的作用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制RPS15A基因的转录或翻译，或能够特异性抑制RPS15A蛋白的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。所述肿瘤细胞选自其生长与RPS15A蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的，所述肿瘤细胞选自骨肉瘤。所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量为足够降低RPS15A基因的转录或翻译，或者足够降低RPS15A蛋白的表达或活性的剂量。进一步的，所述RPS15A基因的表达至少被降低50％、80％、90％、95％或99％。所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA(esiRNA)或者短发夹RNA(shRNA)。所述双链RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有RPS15A基因的启动子序列或RPS15A基因的信息序列。进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA(siRNA)。所述小干扰RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与RPS15A基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述小分子干扰RNA能特异性结合靶序列所编码的mRNA片段，并特异性沉默人RPS15A基因的表达。进一步的，所述小干扰RNA的第一链序列与RPS15A基因中的靶序列基本相同。较优的，所述RPS15A基因中的靶序列含有SEQIDNO:1所示序列。所述RPS15A基因中的靶序列即为所述小分子干扰RNA特异性沉默RPS15A基因表达时，与所述的小分子干扰RNA互补结合的mRNA片段所对应的RPS15A基因中的片段。较佳的，所述RPS15A基因来源于人。本专利技术第一方面还公开了一种分离的人RPS15A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。进一步的，所述肿瘤选自骨肉瘤。所述将分离的RPS15A基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其一，将RPS15A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其二，将RPS15A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将RPS15A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将RPS15A基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药物或制剂，从而能降低肿瘤细胞内RPS15A基因的表达水平。所述将RPS15A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将RPS15A基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进人RPS15A基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如本专利技术所述的RPS15A基因小分子干扰RNA(siRNA)即是以人RPS15A基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤细胞增殖作用的药物。除此之外，诸如抗体药物，小分子药物等也可将RPS15A基因及其蛋白作为作用对象。所述肿瘤治疗药物为能够特异性抑制RPS15A基因的转录或翻译，或能够特异性抑制RPS15A蛋白的表达或活性的分子，从而降低肿瘤细胞中RPS15A基因的表达水平，达到抑制肿瘤细胞的增殖、生长、分化和/或存活的目的。所述通过分离的RPS15A基因制备或筛选获得的肿瘤治疗药物或者肿瘤诊断药物包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA(esiRNA)或者短发夹RNA(shRNA)。所述肿瘤治疗药物的施用量为足够降低人RPS15A基因的转录或翻译，或者足够降低人RPS15A蛋白的表达或活性的剂量。以使人RPS15A基因的表达至少被降低50％、80％、90％、95％或99％。采用前述肿瘤治疗药物治疗肿瘤的方法，主要是通过降低人RPS15A基因的表达水平抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗的目的。具体的，治疗时，将能有效降低人RPS15A基因表达水平的物质给药于患者。本专利技术第二方面公开了一种降低肿瘤细胞中RPS15A基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含：a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与RPS15A基因杂交的核苷酸序列；或者b)shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与RPS15A基因杂交的核苷酸序列。进一步的，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与RPS15A基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。较佳的，所述第一链的序列与RPS15A基因中19-23个连续的核苷酸序列基本相同；更佳的，所述第一链的序列与RPS15A基因中19、20或者21个连续的核苷酸序列基本相同。更进一步的，所述双链R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人RPS15A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.一种分离的人RPS15A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自骨肉瘤。3.一种降低肿瘤细胞中RPS15A基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含：a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与RPS15A基因杂交的核苷酸序列；或者b)shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与RPS15A基因杂交的核苷酸序列。4.如权利要求3所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与RPS15A基因中的靶序列基本相同；所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段的序列与RPS15A基因中的靶序列基本相同。5.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述RPS15A基因的靶序列含有SEQIDNO:1所示序列。6.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA为小干扰RNA，该小干扰RNA第一链的序列如SEQIDNO：13所示。7.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQIDNO：14所示。8.一种RPS15A基因干扰核酸构建体，含有编码权利要求3-7任一权利要求所述分离的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA。9.如权利要求8所述RPS15A基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述RPS15A基因干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。10.如权利要求9所述RPS15A基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述干扰慢病毒载体由将编码所述shRNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，所述慢病毒载体选自：pLKO.1-puro、pLKO.1-CMV-tGF...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭畅，陈琳，王庆亮，沈浩，瞿红花，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31