【技术实现步骤摘要】
本技术涉及。目前世界上只有少数几家企业能够生产三磷酸脱氧核苷，所采用的方法主要是利用脱氧核糖核酸水解产物的酶促或化学磷酸化，终产物的获得要求多步反应，生产工艺繁琐，产物转化率低，仅约25％。尽管世界上已有数家研究机构正在研发核苷酸还原酶，但这些正处在研发阶段的核苷酸还原酶大都具有要求反应条件复杂和酶稳定性差等缺点，并且只能将一磷酸或二磷酸核苷转换成相对应的一磷酸或二磷酸脱氧核苷。而一磷酸或二磷酸脱氧核苷不能直接作为DNA聚合酶的底物，应用范围有限。本专利技术所述的，是将核苷酸还原酶EC1.17.4.2和要转化的底物ATP或CTP或GTP或TTP加入到反应系统中，使酶的浓度达0.01-0.16单位/ml，使底物浓度达到1-60mmol/L，并加入以维生素B12为基础的辅酶形式的辅酶，以及含巯基还原剂或NADH或蛋白质还原剂，以缓冲液控制溶液pH6-9，于25℃-40℃反应。上述使用的缓冲液在反应溶液中的浓度优选为20-200mM；以维生素B12为基础的辅酶形式的辅酶优选辅酶B12，其在反应溶液中的优选浓度为0.005-0.045mmol/L；使用的还原剂为二硫苏糖醇(DTT)或二硫赤藓糖(DTE)或二氢硫辛酸或巯基乙醇或还原型谷胱苷肽或其他含巯基还原剂等以及NADH和蛋白质还原剂，其中优选二硫苏糖醇(DTT)，其在反应溶液中的优选浓度为20-80mmol/L。本专利技术是一种将三磷酸核苷(ATP、CTP、GTP、TTP、UTP)转化为脱氧三磷酸核苷(dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP)的方法，具体就是利用重组核苷酸还原酶EC1.1 7.4...
【技术保护点】
一种三磷酸脱氧核苷的生产方法，其特征在于：该方法是将核苷酸还原酶ＥＣ１．１７．４．２和要转化的底物ＡＴＰ或ＣＴＰ或ＧＴＰ或ＴＴＰ加入到反应系统中，使酶的浓度达０．０１－０．１６单位／ｍｌ，使底物浓度达到１－６０ｍｍｏｌ／Ｌ，并加入以维生素Ｂ１２为基础的辅酶形式的辅酶，以及含巯基还原剂或ＮＡＤＨ或蛋白质还原剂，以缓冲液控制溶液ｐＨ６－９，于２５℃－４０℃反应。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张克勤，
申请(专利权)人：广州因赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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