三肽的生产方法技术

一种通过酶法高收率、容易且稳定地生产可用作降压药、抗紧张药等的三肽ＶａｌＰｒｏＰｒｏ、ＩｌｅＰｒｏＰｒｏ的方法，该生产方法包括以下步骤：用蛋白酶切割含乳酪蛋白的材料，产生选自含序列ＶａｌＰｒｏＰｒｏ且在该序列外不含Ｐｒｏ的肽、含序列ＩｌｅＰｒｏＰｒｏ且在该序列外不含Ｐｒｏ的肽以及它们的混合物的中间体肽，用肽酶切割上述中间体肽，产生三肽ＶａｌＰｒｏＰｒｏ和ＩｌｅＰｒｏＰｒｏ中的至少一种。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可以有效生产三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro的三肽生产方法。关于三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro的生产方法，已报道了通过乳酸菌发酵法高效率生产的实例(特开平11-98978号公报)。但是，在进行乳酸菌发酵的情况下，由于在乳酸发酵中伴有pH下降，因此发酵在中途停止，残留有许多未分解的酪蛋白。而且，在通过乳酸菌发酵获得的培养液中，由于生成许多乳酸，因而在加工成各种产品形态时会产生障碍。例如，在加工为干粉时，由于有共存的乳酸而使得难以制成粉末，因而必须除去酸。因此，考虑到通过酶法进行生产。与上述乳酸发酵法相比，预期使用酶法的优点是可提高肽的收率，使生产步骤稳定，节省生产工序和劳动力，并且不伴有乳酸生成等。然而，在三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro的生产中，在通过酶法切割蛋白质时，在Xaa Pro或ProXaa(Xaa表示任何氨基酸)之类含Pro氨基酸的序列的部位，肽酶的分解反应性变得极低。从而在通过酶法生产三肽Val Pro Pro和/或Ile ProPro时，难以切割序列Pro Xaa，因而不可能将其收率提高至高于乳酸发酵法的收率。例如，在特开平11-100328号公报中，作为获得三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro的方法，例举了对乳酪蛋白进行蛋白酶处理并且用羧肽酶进行处理的方法，但没有记载具体的处理方法，实施例中只记载了乳酸发酵法等其它方法。作为通过蛋白酶和肽酶联合分解蛋白质来生产除三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro以外的有用的肽的方法，也提到了通过γ-玉米醇溶蛋白获得具有ACE抑制活性的三肽Leu Pro Pro的方法(日本专利2873327号)、通过β-酪蛋白获得肽Tyr Pro Phe Pro Gly Pro Ile Xaa Asn的方法(特开平6-128287号公报)等。但是，这些方法由于收率和稳定性不够，不能作为工业上有用的生产方法，因而未被实际使用。按照本专利技术，提供用蛋白酶和肽酶切割含乳酪蛋白的材料获得三肽Val Pro Pro和Ile Pro Pro中至少一种的三肽生产方法，所述方法包括以下步骤用蛋白酶切割乳酪蛋白，产生选自含序列Val Pro Pro且在该序列以外不含Pro的肽、含有序列Ile Pro Pro且在该序列以外不含Pro的肽以及它们的混合物的中间体肽，用肽酶切割上述中间体肽，产生三肽Val Pro Pro和Ile Pro Pro中的至少一种。专利技术的优选实施方案在本专利技术的三肽生产方法中，用特定的蛋白酶和肽酶切割含乳酪蛋白的材料，可获得三肽Val Pro Pro和/或Ile Pro Pro。上述含乳酪蛋白材料可以根据三肽含量、原料价格、工业化容易程度等的考虑来选择，例如，可以举出动物乳、脱脂乳、脱脂奶粉、乳酪蛋白及其加工制品等大量含有β-酪蛋白和κ-酪蛋白等乳酪蛋白的材料。在乳酪蛋白中，含有氨基酸序列Val Pro Pro和Ile Pro Pro的乳酪蛋白特别是有β-酪蛋白和κ-酪蛋白，因此上述含乳酪蛋白材料最好是含有这些酪蛋白的材料。在普通的乳酪蛋白中，含有25-30％(重量)的β-酪蛋白、10-15％(重量)的κ-酪蛋白，即含有更多的β-酪蛋白。因而，在本专利技术的生产方法中，可以用β-酪蛋白作为主要的底物来源。上述特定的蛋白酶是通过切割乳酪蛋白产生特定中间体肽的蛋白酶。上述特定的中间体肽是选自含有序列Val Pro Pro且在该序列以外不含Pro的肽、含有序列Ile Pro Pro且在该序列以外不含Pro的肽以及它们的混合物的肽。也就是说，是含有序列Val Pro Pro但在该序列以外不含Pro的肽和/或含有序列Ile Pro Pro但在该序列以外不含Pro的肽。具体例子有β-酪蛋白序列中所含的肽Gln Asn Ile Pro Pro Leu ThrGln Thr或者从这种肽中逐次除去一个氨基末端或羧基末端的氨基酸直至Ile Pro Pro而获得的肽(下述序列标识号1-15)中的至少一种、或者β-酪蛋白序列中所含的肽Val Val Val Pro Pro Phe Leu Gln或者从这种肽中逐次除去一个氨基末端或羧基末端的氨基酸直至Val Pro Pro而获得的肽(下述序列标识号16-27)中的至少一种。Gln Asn Ile Pro Pro Leu Thr Gln Thr(序列标识号1)Asn Ile Pro Pro Leu Thr Gln Thr(序列标识号2)Ile Pro Pro Leu Thr Gln Thr(序列标识号3)Gln Asn Ile Pro Pro Leu Thr Gln(序列标识号4)Asn Ile Pro Pro Leu Thr Gln(序列标识号5)Ile Pro Pro Leu Thr Gln(序列标识号6)Gln Asn Ile Pro Pro Leu Thr(序列标识号7)Asn Ile Pro Pro Leu Thr(序列标识号8)Ile Pro Pro Leu Thr(序列标识号9)Gln Asn Ile Pro Pro Leu(序列标识号10)Asn Ile Pro Pro Leu(序列标识号11)Ile Pro Pro Leu(序列标识号12)Gln Asn Ile Pro Pro(序列标识号13)Asn Ile Pro Pro(序列标识号14)Ile Pro Pro(序列标识号15)Val Val Val Pro Pro Phe Leu Gln(序列标识号16)Val Val Pro Pro Phe Leu Gln(序列标识号17)Val Pro Pro Phe Leu Gln(序列标识号18)Val Val Val Pro Pro Phe Leu(序列标识号19)Val Val Pro Pro Phe Leu(序列标识号20)Val Pro Pro Phe Leu(序列标识号21)Val Val Val Pro Pro Phe(序列标识号22)Val Val Pro Pro Phe(序列标识号23)Val Pro Pro Phe(序列标识号24)Val Val Val Pro Pro(序列标识号25)Val Val Pro Pro(序列标识号26)Val Pro Pro(序列标识号27)上述蛋白酶的例子有木瓜蛋白酶、蛋白酶A(天野制药(株)生产)、蛋白酶M(天野制药(株)生产)、蛋白酶P(天野制药(株)生产)或它们的组合。作为上述肽酶，可以使用不能直接分解酪蛋白、但可以切割通过前述蛋白酶生成的前述中间体肽而产生三肽Val Pro Pro和/或Ile ProPro的各种肽酶。例如，可以举出氨肽酶、羧肽酶等外肽酶；寡肽酶等内肽酶或它们的混合物。作为上述肽酶，特别优选包括切割序列Val Pro ProXaa和/或IlePro Pro Xaa中Pro与Xaa之间键合的羧肽酶和/或内肽酶。更具体地讲，优选可以切割乳酪蛋白所含序列Ile Pro Pro Leu和/或Val Pro ProPhe中的Pro Leu和/或Pro Phe键合的肽酶，更优选使用对这些键合具有特异性的肽酶。上述肽酶可以根据同时使用的上述本文档来自技高网...

【技术保护点】
三肽的生产方法，该方法是用蛋白酶和肽酶切割含乳酪蛋白的材料获得三肽Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ和Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ中至少一种的三肽生产方法，所述方法包括以下步骤：用蛋白酶切割含乳酪蛋白的材料，产生选自含序列Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ且在该序列外不含Ｐｒｏ的肽、含序列Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ且在该序列外不含Ｐｒｏ的肽以及它们的混合物的中间体肽，用肽酶切割所述中间体肽，产生三肽Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ和Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ中的至少一种。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：山本直之，上野敬太，江尻昌宏，
申请(专利权)人：卡尔皮斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]