新型人骨髓基质细胞来源的1型磷酸酶抑制因子，其编码序列及用途制造技术

本发明专利技术涉及了一种骨髓基质细胞来源的１型磷酸酶抑制因子（ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－２，ＩＰＰ２）。本发明专利技术提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明专利技术还公开了骨髓基质细胞来源的１型磷酸酶抑制因子及其多核苷酸编码序列的用途。本发明专利技术证实了ＩＰＰ２的高表达能抑制巨噬细胞ＲＡＷ２６４．７凋亡。本发明专利技术还公开了抗此蛋白分子用于疾病的诊断及治疗的策略，特别是可用于恶性肿瘤的诊断和治疗。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及新的人骨髓基质细胞来源的1型磷酸酶抑制因子IPP2，及其多核苷酸编码序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。IPP2是一种与抗凋亡和记忆有关的细胞内可溶性蛋白，具有抵抗凋亡和维持记忆的功能。
技术介绍
磷酸化修饰是机体代谢和信号通路中最主要的，也是最快捷的调节方式。而这种方式是通过激酶和磷酸酶的完美协调来实现的，1型蛋白磷酸酶(PP-1)是一类非常重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，通过去磷酸化蛋白调节细胞周期、基因表达、蛋白合成、糖脂代谢，及记忆形成等生理功能。它由催化亚基和调节亚基组成，后者决定磷酸酶的底物特异性，活性以及亚细胞定位。1型磷酸酶抑制因子(IPP-1，inhibitor of protein phosphatase 1，)是第一个发现调节1型蛋白磷酸酶活性的内源性分子，IPP-1能够抑制PP1对pCREB(cAMP反应元件结合蛋白)的脱磷酸，维持高水平的pCREB，而CREB的活化即磷酸化是许多细胞，特别是神经元存活和长时间记忆形成的必要条件。众所周知，学习和记忆等高级生理活动都涉及到突触LTP(长时间增强)的产生，PP1促进LTD(长时间的抑制)，而IPP-1通过抑制PP1促进LTP(长时间增强)的产生。RpcAMP(PKA的抑制剂)抑制HFS(high frequency stimulation)引起的突触后神经元的LTP的产生，而磷酸化IPP-1能够逆转这种情况，可见，外界刺激通过PKA磷酸化IPP-1，进而抑制磷酸酶活性，导致一些信号通路蛋白和转录因子磷酸化程度的改变，引起细胞一系列的生理功能的改变。鉴于与磷酸化有关的因子具有重要的生理功能，因此，本领域迫切需要开发新与与磷酸化有关的因子。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的入骨髓基质细胞来源的1型磷酸酶抑制因子IPP2蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的IPP2多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抑制巨噬细胞RAW 264.7凋亡功能的由(a)衍生的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述人IPP2的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中235-582位的序列；(b)具有SEQ ID NO1中1-1637位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备具有人IPP2蛋白活性的多肽的方法，该方法包含(a)在适合表达人IPP2蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人IPP2蛋白活性的多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的人IPP2多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的15-1637个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人IPP2多肽活性的化合物，以及抑制人IPP2多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人IPP2多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在IPP2蛋白的方法，它包括将样品与IPP2蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在IPP2蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与人IPP2多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。例如本专利技术多肽可被用于筛选促进人IPP2多肽活性的激动剂，或者筛选抑制人IPP2多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本专利技术的人IPP2蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。在本专利技术的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的人IPP2多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗肿瘤、炎症、神经系统和心血管病等病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1显示了本专利技术的人IPP2 RT-PCR表达分析结果，提示IPP2表达于某些肿瘤细胞。图2是本专利技术的人IPP2 Northern印迹杂交所显示的分布。结果提示IPP2是一种具特定组织分布的分子。图3显示了人IPP2抑制LPS诱导RAW 264.7的ERK活化。图4显示了人IPP2抑制NO引起的RAW 264.7的凋亡。图5显示了人IPP2维持NIH 3T3和PC-12细胞的磷酸化。具体实施例方式本专利技术人利用cDNA文库大规模测序和EST同源比较的方法，从正常人骨髓基质细胞中分离到一种新型全长基因，全长为1637bp，含348bp编码区，编码116个氨基酸，与其他分子的同源性比较提示可能属于1型磷酸酶的抑制亚基IPP-1家族。尤其在N端功能区与人IPP-1高度同源，因此将该新基因命名为IPP2。RT-PCR显示该分子在一些造血系肿瘤如Daudi、MOLT-4、Raji、THP-1、K562、HT-29、Hela、A549、NAM、TF-1、2162、Hut以及Hela、A549、HT29实体瘤中存在不同程度的表达。Northern印迹显示IPP2mRNA在正常人的心脏、肝脏、骨骼肌、睾丸特异性表达，其中心肌和骨骼肌中有三个转录本。通过体外激酶分析证实该分子能够抑制PP-1酶活性，且IC50与人IPP-1蛋白相似。同时发现IPP2分子能够抑制LPS引起的ERK活化，并能抑制NO诱导RAW264.7凋亡。而IPP2瞬时转染NIH 3T3和PC-12细胞，能够维持8-Br-cAMP/IBMX引起的高水平的CREB磷酸化程度。而CREB的磷酸化能够使抗凋亡蛋白Bcl-2表达上升。我们推测IPP2通过抑制PP1，维持一些信号蛋白和转录因子的活化，使一些存活蛋白表达上调。进而抵抗外界因素引起的细胞凋亡总之，IPP2作为一种新型的磷酸酶抑制因子，通过抑制磷酸酶，维持某些重要的信号通路中介分子或转录因子的磷酸化，传递和放大某些信号，在抗细胞凋亡、记忆形成、信号转导等方面有着重要的作用，因此该分子在机体免疫功能的调节、抗肿瘤、抗病毒感染、神经退行性病变治疗等多个领域中具有重要的开发和应用价值。在本专利技术中，术语“IPP2蛋白”、“IPP2多肽”或“骨髓基质细胞来源的1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人磷酸酶抑制因子ＩＰＰ２多肽，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓健，李楠，曹雪涛，
申请(专利权)人：浙江大学免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]