一种大环内酯类抗生素及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种大环内酯类抗生素及其制备方法，该方法包括如下步骤：（１）菌种培养发酵：①培养基的制备：取葡萄糖、可溶性淀粉、蛋白胨、玉米浆、Ｋ＃－［２］ＨＰＯ＃－［４］、ＭｇＳＯ＃－［４］.７Ｈ＃－［２］Ｏ、ＮａＣｌ加水，灭菌；②发酵：把藤黄灰链霉菌菌株加入灭菌后的培养基中，摇瓶发酵；（２）发酵液处理：①发酵液离心；②以等体积乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分经水反萃，去除色素杂质；③回收乙酸乙酯，得到具有活性部位的褐色油状物；④进行硅胶柱层析，得到粗品；⑤将粗品经过纯化，得到一种大环内酯类抗生素纯品，经实验证明，它有抑菌作用，生物效价高于红霉素、乙酰螺旋霉素及琥乙红霉素等，对耐药金葡菌有抑菌活性。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新的大环内酯类抗生素及其制备方法。
技术介绍
大环内酯类抗生素是临床中常使用的一类抗生素，它们以其抗菌谱广，抗菌效果明显，疗效确定而广为使用，目前对大环内酯类抗生素的主要研究方向有①寻找全新结构，发现具有更高抗菌效价，更好抗肿瘤疗效，更广谱的抗生素；②探索具有抗菌活性以外的生理活性物质，开辟新用途如胃动素样作用、免疫抑制剂等；③继续修饰现有的大环内酯类抗生素如红霉素等的结构，使药物能用于耐药菌的感染等。这其中原因之一是由于多年的临床应用，很多致病菌对现有的大环内酯类药物产生了耐药性，如金葡菌、链球菌，肺炎球菌等，使大环内酯类抗生素的临床应用受到了限制，再加上很多大环内酯结构不稳定，体内吸收、分布、代谢不尽人意，因此有必要对大环内酯抗生素进行深入地的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种新的大环内酯类抗生素，我们命名为麦拓莱霉素，它对多种细菌有较强的抑制作用，对红霉素耐药的金葡菌亦有作用。本专利技术的另一个目的是提供一种大环内酯类抗生素的制备方法。本专利技术的技术方案概述如下一种大环内酯类抗生素，它具有如下结构 一种大环内酯类抗生素(I)(麦拓莱霉素)的制备方法，该方法包括下列步骤(1)菌种培养发酵 ①培养基(g/l)的制备取葡萄糖2.0～8.0g、可溶性淀粉30.0～60.0g、蛋白胨2.0～6.0g、玉米浆1.0～5.0ml、K2HPO40.1～0.6g、MgSO4·7H2O 0.1～0.6g、NaCl 0.4～1.0g、加水至1000ml在pH6.0，121℃灭菌15min；②发酵把天津市英捷科技发展有限公司出售的藤黄灰链霉菌菌株(streptomyces luteogriseus via.099)，加到灭菌后的培养基中，加菌种量为发酵培养基重量的10％，摇瓶发酵，150-300转/分，28℃，发酵3～5天；(2)发酵液处理①发酵液经3800～5000转/分离心，15～30分；②以等体积乙酸乙酯萃取4～6次，乙酸乙酯部分经1∶1～2∶1体积的水反萃，去除色素杂质；③回收乙酸乙酯，得到具有活性部位的褐色油状物；④进行硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇1∶0到0∶1梯度洗脱，收集二氯甲烷∶甲醇为11∶1的活性组分，回收溶剂，得到粗品一种大环内酯类抗生素；⑤将粗品一种大环内酯类抗生素经过制备高效液相纯化，收集活性峰段，冷冻干燥，得到一种大环内酯类抗生素纯品。在培养基的制备中最好是葡萄糖为5.0g、可溶性淀粉为40.0g、蛋白胨为4.0g、玉米浆为2.0ml、K2HPO4为0.5g、MgSO4·7H2O为0.5g、NaCl为0.5g。摇瓶发酵时的转数为160转/分为宜，发酵时间以4天为宜。发酵液分离转速以4800转/分为宜，所述的分离时间为20分为宜，所述的乙酸乙酯的萃取次数以5次为宜。一种大环内酯类抗生素纯品经分析型HPLC检测，色谱柱(300×3.9mm，i.d.5μm，μBond-pakC18)；乙睛水体系，梯度洗脱，检测波长254nm，流速0.5ml/min，证实一种大环内酯类抗生素纯品纯度高于96％。一种大环内酯类抗生素(麦拓莱霉素)经实验证明，它对细菌有抑制作用，并且生物效价高于同类的红霉素、乙酰螺旋霉素、及琥乙红霉素，同时，对耐药金黄色葡萄球菌有抑菌活性。附图说明图1为紫外吸收光谱；图2为红外吸收光谱；图3为1H核磁共振谱；图4为13C核磁共振谱；图5；为DEPT；图6为HSQC(单核多量子相关)；图7为HMBC(异核多键相关)；图8为H-H COSY；图9为NOESY差谱；图10为快原子轰击高分辨质谱；图11为一种大环内酯类抗生素的效价工作曲线。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明实施例1化合物(I)的制备(1)菌种培养发酵①培养基(g/l)的制备取葡萄糖5.0g、可溶性淀粉40.0g、蛋白胨4.0g、玉米浆2.0ml g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、加水至1000ml在pH6.0，121℃灭菌15min；②发酵把天津市英捷科技发展有限公司出售的藤黄灰链霉菌菌株(streptomyces luteogriseus via.099)加入灭菌后的培养基中，加菌种量为发酵培养基重量的10％，摇瓶发酵，160转/分，28℃，发酵4天；(2)发酵液处理①发酵液经4800转/分，离心，20分；②以等体积乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯部分经2∶1体积的水反萃，去除色素杂质；③回收乙酸乙酯，得到具有活性部位的褐色油状物；④进行硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇1∶0到0∶1梯度洗脱，收集二氯甲烷∶甲醇为11∶1的活性组分，回收溶剂，得到粗品一种大环内酯类抗生素；⑤将粗品一种大环内酯类抗生素经过制备高效液相纯化，收集活性峰段，冷冻干燥，得到一种大环内酯类抗生素纯品。每2升的发酵液可得到0.05g的目的产物。如上所得的本专利技术化合物，具有下述理化及生物性质1.性状淡黄色结晶或类白色粉末。2.熔点123±1℃(乙睛水体系为干燥前溶剂)。3.分子量分子量为600.3047。4.分子式分子式为C32H44N2O9。5.元素分析C 63.98％、H 7.38％、N 4.66％、0 23.97％。6.紫外吸收光谱UVλmax252，337(乙醇溶剂)证明分子结构中有α，β不饱和共轭，二烯体系。7.红外吸收光谱(KBr)IR(3590，3421，2990，2932，1704，1622，1568，1444，1398，1297，1239，1206，982，933，750cm-1wavelength)证明分子结构中有羟基，羰基，酰胺基，顺式双键，反式双键，氧杂三元环，及氧杂六元环等。1H谱、13C谱、HSQC(异核单量子相关)、HMBC(异核多键相关)、NOESY差谱、H-H COSY(同核位移相关谱)、快原子轰击高分辨质谱分析(HRFAB-MS)M+Na＝623.2930。证实分子量为600.3047；分子式为C32H44N2O9鉴定该化合物为大环内酯类抗生素，为一类全新的大环内酯结构。该抗生素可与多种酸成盐，如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等。实施例2实施例1中制备的化合物对枯草芽孢杆菌的抑菌活性测定。以枯草芽孢杆菌为测活菌，选取以下阳性对照药红霉素(天津金世制药有限公司，批号020302)；乙酰螺旋霉素(天津中新药业集团股份有限公司新新制药厂，批号030104)；利君沙(琥乙红霉素，西安利君制药股份有限公司，批号0303075-14)；根据牛津杯碟法，琼脂胶平面扩散，24小时后，测量其抑菌圈直径。采用相同的欲比较样品(2毫克/毫升)和本专利技术实施例1所制备的化合物(2毫克/毫升)的浓度，测其抑菌圈，本专利技术化合物的抑菌圈远远大于阳性药材的抑菌圈。再根据本专利技术实施例1所制备的化合物的效价工作曲线(图11)反推其与阳性药材相同抑菌圈所对应的浓度。我们测的本专利技术实施例1所制备的化合物的最低抑菌浓度为0.25微克/毫升。结果表明，本专利技术的抗生素的生物效价2倍于红霉素效价；3倍于乙酰螺旋霉素效价；1.5倍于利君沙(琥乙红霉素)效价。实施例3实施例1所制备的化合物对耐药金葡菌亦有作用。对金黄色葡萄球菌(Staphylcoccus aureusATCC2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大环内酯类抗生素，它具有如下结构：＊＊＊（Ⅰ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，王志平，王蕾，李霞，范晋勇，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]