一种多肽－人微管蛋白单体释放因子28和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽－－人微管蛋白单体释放因子２８，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如神经系统疾病、各种肿瘤、染色体疾病、纤毛运动障碍等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人微管蛋白单体释放因子２８的多核苷酸的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种多肽——人微管蛋白单体释放因子28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
微管与微管的附属结构具有多种功能，如稳定膜结构、产生力作为纤毛鞭毛的运动能量、细胞内物质运输、有丝分裂正常进行等。基本的微管单位是由α管蛋白、β管蛋白和少量微管蛋白的聚合作用而形成。α管蛋白与β管蛋白可装配形成异二聚体。在α管蛋白与β管蛋白折叠并相互作用形成异二聚体之前，它们会与多分子复合物结合。(Zabala，J.C and Cowan，N.J 1992)。多分子复合物上有辅助因子A、B。微管蛋白单体释放因子(p14)具有从多分子复合物C900与C300释放β管蛋白单体的活性。(Campo，R.et al.，1994)。p14家族具有类似DnaJ蛋白家族高度保守的J结构域(J domain)的结构。J结构域包含一个螺旋-回转-螺旋的结构(motif)，两个螺旋之间的噜噗包含不变的氨基酸残基HPD，HPD的任一突变会消除或降低DnaJ蛋白的活性。(Wall，D.Zylicz，Zand Georgopoulos，C 1995).p14的α螺旋内部界面的极性残基网架类似于α-α螺旋界面。特别是在DnaJ domains的两个α螺旋间发现两个序列模式I/L R/K/L Kxxxx L/A/V与L xx A/S/F Y/H/L/K xx L作为部分接触面。p14的domain中，两个保守的PD序列是形成两个α螺旋间噜噗结构所必须，在胰蛋白酶中，噜噗结构由MMIPD组成。(Llosa M，et al.，1996)p14是一种分子伴侣，p14具有β管蛋白单体结合活性，在外加辅助因子(Z)的存在下，使β管蛋白单体从β管蛋白二聚物上释放。p14是目前已知不同于α管蛋白却与β管蛋白稳定结合的蛋白。在J结构域上保守的PD序列中一个单纯的由D到E的突变显示J结构域具有p14的单体释放活性所必须的噜噗结构。p14的C端缺失会降低其β管蛋白单体结合活性。研究显示，p14的噜噗结构与β管蛋白的相互作用模式和DnaJ与DnaK(DnaK具有ATP蛋白激酶活性)的相互作用模式极为相似。(LlosaM，et al.，1996)本专利技术的人的多肽基因与人的微管蛋白单体释放因子家族基因在蛋白水平上有100％的同源性，(同源蛋白号AL023804，同源蛋白人微管蛋白单体释放因子(p14)，255aa，28KD)，其结构域相似于微管蛋白单体释放因子家族的特征性结构域---p14的α螺旋内部界面的极性残基网架类似于α-α螺旋界面；特别是在DnaJ domains的两个α螺旋间发现两个序列模式I/L R/K/L K xxxx L/A/V与L xx A/S/F Y/H/L/K xx L作为部分接触面；p14的domain中，两个保守的PD序列是形成两个α螺旋间噜噗结构所必须。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为一编码人微管蛋白单体释放因子家族的基因，命名为人微管蛋白单体释放因子28，并以此推断其具有微管蛋白单体释放因子家族相似的生物学功能。编码人微管蛋白单体释放因子28的多聚核苷酸，及其所编码的人微管蛋白单体释放因子28的发现为研究细胞在正常及病理条件下的分化、增殖的生理生化过程提供了一种方法，也为诊断、治疗与细胞分化增殖紊乱而造成的疾病包括癌症提供了一种新途径。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人微管蛋白单体释放因子28以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人微管蛋白单体释放因子28的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人微管蛋白单体释放因子28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人微管蛋白单体释放因子28的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人微管蛋白单体释放因子28的抗体。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人微管蛋白单体释放因子28，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少100％相同性(a)编码上述人微管蛋白单体释放因子28的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有<210>2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有<210>1中69-836位的序列；和(b)具有<210>1中1-942位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本专利技术提供了一种多肽——人微管蛋白单体释放因子28，其基本上是由<210>2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人微管蛋白单体释放因子28的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人微管蛋白单体释放因子28相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(I)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(II)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(III)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(IV)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括<210>1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为942个碱基，其开放读框(49-678)编码了255个氨基酸。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与人微管蛋白单体释放因子(p14)有100％的同源性，可推断出该人微管蛋白单体释放因子28具有人微管蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人微管蛋白单体释放因子２８，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]