针对引起SARS冠状病毒基因的siRNA核酸序列及其药物用途制造技术

本发明专利技术涉及一种针对引起严重急性呼吸系统综合症（ＳＡＲＳ）冠状病毒基因的小分子干扰（ｓｉＲＮＡ）序列，该序列可与引起ＳＡＲＳ冠状病毒基因的特定位点上的核苷酸序列互补，根据碱基互补原理，该ｓｉＲＮＡ序列在感染ＳＡＲＳ人体或动物体内与引起ＳＡＲＳ冠状病毒基因的特定位点相结合，从而阻断该基因在人体或动物体内的复制或表达，以达到治疗该疾病的目的。本发明专利技术还涉及引起ＳＡＲＳ冠状病毒基因上ｓｉＲＮＡ攻击的靶序列，以及含有ｓｉＲＮＡ序列及前期序列的药物组合物，及其药物用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种针对引起SARS冠状病毒基因的小干扰RNA序列及含有该小干扰RNA序列的药物及其用途。
技术介绍
严重急性呼吸系统综合症(以下简称SARS)，又称非典型性肺炎，是由一种新的冠状病毒引起的一种传染病，最先爆发于中国广东，随后向周边国家和地区蔓延，截止到2003年5月17日，已经扩散到32个国家和地区，共报道了超出7000例的SARS病例。其发病特征为高烧、全身不适、头疼、干咳、呼吸困难、血氧过少、肺部出现空洞，能够发现全身性间隙浸润液，严重的需要采用插管法或呼吸机帮助病人进行呼吸，死亡率高达15％左右(Kanchan Anand，JohnZiebuhr，Parvesh Wadhwani and et al.，Science，2003，Science 3001763-1767；)。SARS临床诊断表现为淋巴细胞减少、白细胞减少、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶水平升高。世界卫生组织负责传染病的执行干事戴维·海曼于2003年4月16日宣布，经过全球科研人员的通力合作，正式确认冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体，科学家将其命名为“SARS病毒”。SARS冠状病毒是一种正义、单链RNA病毒，是RNA病毒中基因组最大的病毒，它本身没有细胞结构，不能自主复制，但一旦进入人体细胞，就能利用细胞中的各种资源在宿主细胞中不断进行复制(QINE’de，ZHU Qingyu，YU Man and et al.，A complete sequenceand comparative analysis of a SARS-associated virus(Isolate BT01)，Chinese Science Bulletin，2003，48(10)941-948；Marco A.Marra，StevenJ.M.Jones，Caroline R.Astell and et al.，The Genome Sequence of theSARS-Associated Coronavirus，2003，Science 3001399-1404；ChristianDrosten，Stephan Gunther，Wolfgang Preiser and et al.，Identificationof a novel coronaviral in patients with severe acute respiratory syndrome，the New England Journal of Medicine，April 10，2003)。SARS冠状病毒主要通过呼吸道传播，由于病毒的寄生特性，很难找到合适的药物，因为药物在杀死病毒的同时，往往也会误伤健康细胞(Paul A.Rota，M.Steven Oberste，Stephan S.Monroe and et al.，Characterization of a Novel CoronavirusAssociated with Severe Acute Respiratory Syndrome，2003，Science 3001394-1399；)。1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年，Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA(Fire A，Xu S，Mello CC.et al.Potent andspecific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditiselegans Nature 1998；391(6669)806-11)。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。这种双链RNA对基因表达的阻断作用被称为RNA干预(RNAinterference，以下简称RNAi)。近几年来，RNAi的研究取得了很大的进展，被《Science》杂志评为2001年的十大科学成就之一。2002年RNAi的研究又有了新的突破，发现它在基因表达调控中发挥重要作用，从而使其名列2002年《Science》杂志评选的十大科学成就之首。由于RNAi可以非常简单地替代基因敲除制备基因缺失表型的个体，从而研究某个基因的功能，并且可以大规模地开展研究，在世界各地，越来越多的研究人员开始迫不及待地开展研究RNAi或者在自己的研究领域使用这项崭新的技术。生物体内的双链RNA可来自于RNA病毒感染，转座子的转录产物，外源导入的基因。这些来源的双链RNA诱发了细胞内的RNAi机制，结果是病毒被清除，转座子的表达被阻断，外源导入基因表达被阻断同时，与其同源的细胞基因组中的基因表达也被阻断。RNAi还具有很高的特异性。19个核苷酸的双链RNA几乎可以完全抑制基因的表达，而将其中的一个核苷酸突变掉后，它对基因的抑制作用就消失了(Brummelkamp.T.R，Bernads.R，Agami.R.A system for stable expression ofshort interfering RNAs in Mammalian cells.Science.2002；296550-553)，这对双链RNA的应用是非常重要的，这可以避免双链RNA降解与靶mRNA同家族的其他的mRNA。最有效的小分子干扰RNA(small interference RNA，以下简称siRNA)是21个碱基大小、3’端有两个碱基突出的双链RNA。SiRNA的序列专一性要求非常严格，与靶mRNA之间的一个碱基错配都会显著削弱基因沉默的效果(Brown D，Jarvis R，Pallotta V and et al.，RNA interference in mammalian cellculturedesign，execution and analysis of the siRNA effect，Technotes，9(1)3-5；Miyagishi M and Taira K.，U-6 promoter-driven siRNAs with foururidine 3’-over hangs efficiently suppress targeted gene expressionin mammalian cells，Nature Biotechnology，20497-500)。在细胞内部，一个拷贝的基因会产生200-300条mRNA，翻译出10万个具有生物学功能的蛋白质分子。传统药物一般是作用于具有生物学功能的蛋白质分子空间构型上的一两个位点，由于蛋白质立体结构非常复杂，药物可作用的靶位点又很少，因而特异性不会非常高。而siRNA是通过碱基配对的原理来识别所作用的靶基因，从理论上说，一条长度为17个碱基的siRNA分子，其碱基排列顺序在人体全部基因中是唯一的。所以，长度超过17个碱基的siRNA分子在人体全部基因中的结合位点即是唯一的，这就使siRNA具有高度的特异性。毒理学研究也证明，siRNA在体内具有很低的毒性。所以与传统药物相比，siRNA药本文档来自技高网...

【技术保护点】
引起严重急性呼吸系统综合症（ＳＡＲＳ）的冠状病毒基因组上的靶序列，其特征在于当所筛选出的人工序列与下列靶序列中的一个或几个特异性地作用，可以阻断该引起ＳＡＲＳ冠状病毒基因在感染了ＳＡＲＳ的人或动物体内的复制或表达，所述的靶序列如下： ｔａｒｇｅｔ－１Ｓ：５’ＡＡＧＡＡＣＧＧＴＡＡＴＡＡＧＧＧＡＧＣＣ３’ｔａｒｇｅｔ－２Ｓ：５’ＡＡＴＡＡＧＣＧＴＧＣＣＴＡＣＴＧＧＧＴＴ３’ｔａｒｇｅｔ－３Ｓ：５’ＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＣＴＧＧＣ３’　 　ｔａｒｇｅｔ－４Ｓ：５’ＡＡＡＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＴＡＣＴ３’ｔａｒｇｅｔ－５Ｓ：５’ＡＡＣＣＣＴＡＡＧＡＣＡＣＣＣＡＡＧＴＡＴ３’ｔａｒｇｅｔ－６Ｓ：５’ＡＡＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＴＴＡＴＧＧＣＴＧ ３’ｔａｒｇｅｔ－７Ｓ：５’ＡＡＴＧＧＡＣＴＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＧＧＴ３’ｔａｒｇｅｔ－８Ｓ：５’ＡＡＣＡＴＣＡＴＣＣＧＧＴＧＡＴＧＣＴＡＣ３’　ｔａｒｇｅｔ－９Ｓ：５’ＡＡＧＣＴＧＴＴＡＣＡＧＣＣＡＡＴＧＴ ＡＡ３’ｔａｒｇｅｔ－１０Ｓ：５’ＡＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＴＧＡＡＣＣ３’。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘健平，宋霞，
申请(专利权)人：北京金赛狮反义核酸技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]