一种重组人源性抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体，其特征在于具有下述序列结构： 蛋白质的氨基酸序列结构： ＭｅｔＧｌｎＶａｌＧｌｎＬｅｕＶａｌＧｌｕＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＶａｌＶａｌＧｌｎＰｒｏＧｌｙＡｒｇＳｅｒＬｅｕＡｒｇＬｅｕＳｅｒＣｙｓＡｌａＡｌａ ＳｅｒＧｌｙＰｈｅＴｈｒＰｈｅＳｅｒＡｒｇＨｉｓＧｌｙＭｅｔＨｉｓＴｒｐＶａｌＡｒｇＧｌｎＡｌａＰｒｏＧｌｙＬｙｓＧｌｙＬｅｕＧｌｕＴｒｐＶａｌＡｌａ ＶａｌＩｌｅＳｅｒＴｙｒＡｓｐＧｌｙＳｅｒＡｓｎＬｙｓＴｙｒＴｙｒＡｌａＡｓｐＳｅｒＶａｌＬｙｓＧｌｙＡｒｇＰｈｅＴｈｒＩｌｅＳｅｒＡｒｇＡｓｐＡｓｎ ＳｅｒＬｙｓＡｓｎＴｈｒＬｅｕＴｙｒＬｅｕＧｌｎＭｅｔＡｓｎＳｅｒＬｅｕＡｒｇＡｌａＧｌｕＡｓｐＴｈｒＡｌａＶａｌＴｙｒＴｙｒＣｙｓＡｌａＬｙｓ ＡｌａＧｌｙＧｌｙＡｌａＡｌａＡｌａＧｌｙＴｈｒＧｌｙＴｈｒＡｌａＴｙｒＰｈｅＡｓｐＴｙｒＴｒｐＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｈｒＬｅｕＶａｌＴｈｒＶａｌＳｅｒ ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒＡｓｐＩｌｅＶａｌＬｅｕＴｈｒＧｌｎＳｅｒＰｒｏＧｌｙ ＴｈｒＬｅｕＳｅｒＬｅｕＳｅｒＳｅｒＧｌｙＧｌｕＧｌｙＡｌａＴｈｒＬｅｕＳｅｒＣｙｓＡｒｇＡｌａＳｅｒＧｌｎＳｅｒＶａｌＳｅｒＡｓｎＧｌｙＧｌｎＬｅｕ ＴｈｒＴｒｐＴｙｒＧｌｎＧｌｎＬｙｓＰｒｏＧｌｙＧｌｎＡｌａＰｒｏＡｒｇＬｅｕＬｅｕＩｌｅＴｙｒＧｌｙＡｌａＳｅｒＳｅｒＡｒｇＡｌａＴｈｒＧｌｙＩｌｅ ＰｒｏＡｓｐＡｒｇＰｈｅＳｅｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＴｈｒＡｓｐＰｈｅＴｈｒＬｅｕＴｈｒＩｌｅＳｅｒＡｒｇＬｅｕＧｌｕＰｒｏＧｌｕＡｓｐＰｈｅ ＡｌａＶａｌＴｙｒＴｙｒＣｙｓＨｉｓＧｌｎＴｙｒＡｓｐＧｌｙＳｅｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒＰｈｅＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｈｒＬｙｓＶａｌＧｌｕＩｌｅＡｓｎＡｒｇ 蛋白质的基因序列结构： ＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧ ＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＴＧＧ ＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡ ＴＡＴＣＡＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣ ＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴ ＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＧＣＴＧＧＧＧＧＧＧＣＡＧＣＡ ＧＣＴＧＧＴＡＣＧＧＧＧＡＣＧＧＣＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣ ＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＴ ＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＴＣＡＧＧＧＧＡＡ ＧＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＮＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＡＴＴＡＡＣ ＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴ ＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡ ＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣ ＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＴＧＡＴＧＧＣＴＣＣＣＣＧＧＡＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ ＡＡＴＣＡＡＴＣＧＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗体及其制备方法，特别是一种重组人源性抗乙肝表面抗原(HBsAg)单链抗体及其制备方法，属于生物制品领域。
技术介绍
乙型肝炎是一种世界范围的流行性传染病，全球乙肝病毒携带者有三亿人之多，其中我国乙肝病毒携带者有一亿多，乙型肝炎患者一千多万。据世界卫生组织统计，全世界每年死于该病者多达一百多万，临床缺乏有效的治疗方法。由于目前还没有治疗乙型肝炎的有效手段，因此预防其感染在控制该病的传染上显得尤为重要，使预防成为防治乙型肝炎的重点。血源性抗乙肝表面抗原抗体可用于乙型肝炎的被动免疫，可有效地预防乙肝病毒急性感染。能与乙肝病毒表面抗原结合并阻止其侵袭肝细胞的乙肝表面抗体或其抗体片段是唯一能用于紧急预防的被动免疫生物制品，单独或与疫苗制成的免疫复合物还可防止乙型肝炎的母婴传播。但是，血源性抗体的来源却相当有限且具有潜在的传染性，给它的应用带来限制。开发重组人源性抗HBsAg抗体可以弥补血源性抗体的缺陷。基因工程生产的人源性抗体或其单链抗体可代替血源性抗体在临床上具有防治乙型肝炎病毒的很好的应用前景，如防治新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播、肝脏移植病人的病毒控制和用于制备治疗性乙肝疫苗等。对于基因工程人乙肝表面抗体的研究，目前国内外均应用噬菌体展示文库技术获得其Fab段(抗原结合段，fragment of antigen binding)基因，然后应用大肠杆菌表达，但其问题是Fab抗体呈双链，在大肠杆菌中进行分泌型表达，表达量很低，进行包涵体表达又难以复性。单链抗体(Single chain Fv，ScFv)是由抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)通过一段连接肽连接而成的重组蛋白，它是具有完全抗体结合位点的最小抗体片段，大小为完整抗体的1/6，分子量约为27KDa，它具有以下优点(1)能较好保持亲本抗体结合抗原的特性和功能，而抗原性大大减少；(2)分子量小，能穿透血管壁，容易进入实体瘤的微循环；(3)没有FC片段(可结晶段，fragmentof crystallizable)，不能与非靶细胞的FC受体结合，有利于作为导向作用的载体；(4)能与分布于病毒表面的抗原结合，有利于抗病毒治疗；(5)在单链抗体基因末端可以接上适宜的酶、免疫毒素细胞因子等效应分子基因构建双功能单链抗体，用于肿瘤及其它疾病的诊断与治疗；(6)易于基因操作和基因工程大量生产。单链抗体可在多种不同的表达系统中进行表达，如大肠杆菌、酵母、植物、昆虫等表达系统。其中最常见的是大肠杆菌和酵母表达系统。使用大肠杆菌作为宿主，易于基因工程操作和发酵生产且成本低廉。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用作人乙肝表面抗体的重组人源性抗HBsAg单链抗体，所述抗体具有较强的HBsAg结合活性和抗原特异性和结合乙肝表面抗原的能力。本专利技术的另一目的在于提供一种制备用作人乙肝表面抗体的重组人源性抗HBsAg单链抗体的方法，所述方法采用原核表达载体pQE40，转化大肠杆菌M15，表达量高，表达出的抗体片段与原始基因序列推导出的一致，适合于大规模工业化生产。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种用作人乙肝表面抗体的重组人源性抗HBsAg单链抗体，具有下述序列结构蛋白质的氨基酸序列结构MetGlnValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArgSerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerArgHisGlyMetHisTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpValAlaValIleSerTyrAspGlySerAsnLysTyrTyrAlaAspSerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrLeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCysAlaLysAlaGlyGlyAlaAlaAlaGlyThrGlyThrAlaTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSerSerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerAspIleValLeuThrGlnSerProGlyThrLeuSerLeuSerSerGlyGluGlyAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerAsnGlyGlnLeuThrTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIleTyrGlyAlaSerSerArgAlaThrGlyIleProAspArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerArgLeuGluProGluAspPheAlaValTyrTyrCysHisGlnTyrAspGlySerProGluThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluIleAsnArg蛋白质的基因序列结构GAATTCATGCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGACATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTA TATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGCTGGGGGGGCAGCAGCTGGTACGGGGACGGCCTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGTGGCGGAGGGAGCGGTGGAGGGGGCAGTGGCGGAGGAGGTAGCGACATTGTGTTGACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTTCAGGGGAAGGAGCCACCCTNTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACGGCCAATTAACCTGGTACCAGCAGAAGCCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCACCAGTATGATGGCTCCCCGGAGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAATCGATAAAAGCTT本专利技术所述的用作人乙肝表面抗体的重组人源性抗HBsAg单链抗体的制备方法可以通过以下方法实现利用噬菌体展示技术克隆人源性HBsAg抗体的Fab段基因，在大肠杆菌内表达；通过重叠PCR获得抗HBsAg单链抗体基因，并将其插入原核胞质表达载体，在大肠杆菌中获得高效表达，然后本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：余宙耀，粟宽源，任向荣，高辉，杨安钢，
申请(专利权)人：余宙耀，粟宽源，高辉，
类型：发明
国别省市：
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