包含死亡结构域的受体-5制造技术

本申请涉及新的包含死亡结构域的受体－５（ＤＲ５）蛋白质，该蛋白质是肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）受体家族的成员，并表现为能结合ＴＲＡＩＬ。具体说，提供了编码人ＤＲ５蛋白质的分离的核酸分子。还提供了ＤＲ５多肽以及用于制备这种多肽的载体、宿主细胞和重组方法。本发明专利技术还涉及鉴定ＤＲ５活性激动剂和拮抗剂的筛选方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
专利
本专利技术涉及受体的肿瘤坏死因子家族的一个新成员。更具体说，提供了编码包含人死亡结构域的受体-5(或简称DR5)的分离核酸分子。还提供了DR5多肽、载体、宿主细胞和制备它们的重组方法。本专利技术还涉及鉴定DR5活性的激动剂和拮抗剂的筛选方法。相关技术大量的生物活动(例如，对某种刺激的反应和自然的生物学过程)受到各种因子(例如细胞因子)的控制。许多细胞因子通过带动受体并产生细胞内反应从而经由受体发挥作用。例如，肿瘤坏死因子(TNF)α和β即是通过TNF受体来调节大量生物过程，包括抵抗感染防御和感应震惊和炎症疾病的细胞因子。TNF分子属于TNF-配体超家族，并且是与它们的受体或抗配体(即TNF受体超家族)共同起作用。迄今为止，已鉴定到TNF配体超家族的9个成员和TNF受体超家族的10个成员。在这些配体中，包括TNF-α、淋巴毒素-α(LT-α，又称为TNF-β)、LT-β(发现于复合异三聚体LT-α2-β中)、FasL、CD40L、CD27L、CD30L、4-IBBL、OX40L和神经生长因子(NGF)。TNF受体超家族包括p55TNF受体、p75TNF受体、TNF受体相关蛋白质、FAS抗原或APO-1、CD40、CD27、CD30、4-IBB、OX40、低亲合力p75和NGF受体(Meager，A.，生物学22291-295(1994))。TNF配体超家族的许多成员是由活化的T细胞表达的，这暗示它们是T细胞与其他类型细胞进行相互作用(这是细胞癌化和功能的基础)所必需的(Meager，A.，出处同前)。对TNF受体家族几个成员的基本功能相当多的了解是从鉴定和制备消除了这些蛋白质的表达的突变体中获得的。例如，FAS抗原及其配体的突变导致淋巴增殖性疾病(Watanabe-Fukunaga，R.等，自然356314(1992))，这可能反映出程序化细胞死亡有缺陷。CD40配体的突变导致X-连锁的免疫缺陷状况，其特征在于胞浆中有高水平的免疫球蛋白M和低水平的免疫球蛋白G，表明T细胞依赖性的B细胞活化失效(Allen，R.C.等，科学259990(1993))。低亲合力神经生长因子受体的定向突变导致以外围结构感觉新生失效为特征的失调(Lee，K.F.等，细胞69737(1992))。TNF和LT-α能与两个TNF受体(55和75kd TNF受体)结合。TNF和LT-α通过它们的受体引发的许多生物效应，包括移植肿瘤的出血性坏死、细胞毒性(在内毒素休克、发炎、免疫调节、增殖和抗病毒反应中的一种作用)以及对抗离子辐射的有害作用。TNF和LT-α参与多种疾病(包括内毒素休克、脑疟疾、肿瘤、自身免疫疾病、AIDS和移植体-宿主排斥)的发病机理(Beutler，B.和Von Huffel，C.，科学264667-668(1994))。p55受体的突变导致对微生物感染的易感性加强。此外，曾报道过在TNFR1(p55)和Fas的近C-末端有一个大约80个氨基酸的结构域，称为“死亡结构域”，它负责传导程序化细胞死亡信号(Tartaglia等，细胞74845(1993))。细胞凋亡，或程序化细胞死亡，是多细胞生物正常发育和系统平衡中必需的生理过程(H.Steller，科学2671445-1449(1995))。细胞凋亡的紊乱构成几种人类疾病(包括癌症、神经变性性疾病和获得性免疫缺陷综合症)的发病机理(C.B.Thompson，科学2671456-1462(1995))。最近，更多的注意力集中在两个细胞表面死亡受体(Fas/APO-1和TNFR-1)的信号传导和生物功能上(J.L.Cleveland等，细胞81479-482(1995)；A.Fraser等，细胞85781-784(1996)；S.Nagata等，科学2671449-56(1995))。两者都是TNF受体家族的成员，该家族还包括TNFR-2、低亲合力NGFR、CD40和CD30等(C.A.Smith等，科学2481019-23(1990)；M.Tewari等，《分子和细胞生物学教程》，M.Purton，Heldin，Carl编(Chapman and Hall，London，1995))。该家族的成员是根据胞外结构域中存在富含半胱氨酸的重复片段确定的，Fas/APO-1和TNFR-1还有被恰当地命名为死亡结构域的共同的胞内同源区，它与果蝇(Drosophila)自杀基因reaper有较远的相关性(P.Golstein等，细胞81185-186(1995)；K.White等，科学264677-83(1994))。这个共有的死亡结构域提示两个受体可能与一组至今身份不明的相互关联的信号传导分子相互作用。Fas/APO-1的活化能补充含有死亡结构域的接合体分子FADD/MORT1(A.M.Chinnaiyan等，细胞81505-12(1995)；M.P.Boldin等，生物学化学杂志2707795-8(1995)；F.C.Kischkel等，EMBO145579-5588(1995))，后者随之结合并且可能激活FLICE/MACH1(前凋亡蛋白酶ICE/CED-3家族的成员)(M.Muzio等，细胞85817-827(1996)；M.P.Boldin等，细胞85803-815(1996))。Fas/APO-1的中心作用是引发细胞死亡，而TNFR-1可以给一系列不同生物活动发出信号，其中许多是基于其激活NF-kB的能力(L.A.Tartaglia等，今日免疫学13151-3(1992))。与此相应，TNFR-1能补充多价接合体分子TRADD，该分子与FADD一样含有一个死亡结构域(H.Hsu等，细胞81495-504(1995)；H.Hsu等，细胞84299-308(1996))。通过联合包括FADD、TRAF2和RIP在内的许多信号分子，TRADD能够给出细胞凋亡和激活NF-kB的信号(H.Hsu等，细胞84299-308(1996)；H.Hsu等，免疫(Immunity)4387-396(1996))。最近，发现了一种新的诱导细胞凋亡的TNF配体。S.R.Wiley等(免疫3673-682(1995))将该分子命名为“TNF相关的细胞凋亡诱导配体”或简称“TRAIL”。该分子又被称为“Apo-2配体”或“Apo-2L”(R.M.Pitt等，生物学化学杂志27112687-12690(1996)。在共同未决的美国临时专利申请60/013,405中也公开了这种分子。为了方便，本文将该分子称为TRAIL。FAS配体的转录呈现出主要局限于被活化的T细胞，与它不同，在许多人体组织(例如脾、肺、前列腺、胸腺、卵巢、小肠、结肠、外周血淋巴细胞、胎盘、肾)中都检测到显著水平的TRAIL，并且一些细胞系组成性表达TRAIL。已经证实TRAIL不依赖Fas配体而作用(Wiley等，出处同前)。还证实TRAIL在与Fas/Apo-1L引发死亡信号相似的时间范围内迅速激活细胞凋亡，但比TNF诱导的细胞凋亡快得多(S.A.Marster等，现代生物学6750-752(1996))。TRAIL不能与TNFR-1、Fas或最近鉴定的DR3结合，这提示TRAIL可能是与一或多个独特的受本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸分子，它包含具有与选自以下的序列至少９５％相同的核苷酸序列的多核苷酸：　（ａ）编码包含ＳＥＱＩＤＮＯ：２中大约－５１到３６０位氨基酸的多肽的核苷酸序列；（ｂ）编码包含ＳＥＱＩＤＮＯ：２中大约－５ ０到３６０位氨基酸的多肽的核苷酸序列；（ｃ）编码包含ＳＥＱＩＤＮＯ：２中大约１到３６０位氨基酸的多肽的核苷酸序列；（ｄ）编码具有ＡＴＣＣＮｏ．９７９２０中所含ｃＤＮＡ克隆所编码的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列； （ｅ）编码具有ＡＴＣＣＮｏ．９７９２０中所含ｃＤＮＡ克隆所编码的氨基酸序列的成熟ＤＲ５多肽的核苷酸序列；（ｆ）编码ＤＲ５胞外结构域的核苷酸序列；（ｇ）编码ＤＲ５跨膜结构域的核苷酸序列；（ｈ）编码ＤＲ５胞内结构 域的核苷酸序列；（ｉ）编码ＤＲ５死亡结构域的核苷酸序列；和（ｊ）与上述（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）或（ｉ）中的任何核苷酸序列互补的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：倪健，RL根兹，余国良，JY苏，CA罗森，
申请(专利权)人：人类基因组科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]