多重性和多价性蛋内ＤＮＡ疫苗制造技术

本发明专利技术提供一种用在禽类蛋内以获得胚胎免疫性的多重性ＤＮＡ疫苗和／或多价性ＤＮＡ疫苗。该多重性ＤＮＡ疫苗包含二个或二个以上的ＤＮＡ构建物，各构建物含有一个编码禽类病毒蛋白或其片段的ＤＮＡ分子，该病毒蛋白或其片段能诱导出抗禽类体内的禽类病毒疾病的保护性免疫反应。该多价性ＤＮＡ疫苗包含一个含有二个或二个以上ＤＮＡ分子的ＤＮＡ构建物，每个ＤＮＡ分子代表一种禽类病毒基因或其片段。该多价性ＤＮＡ疫苗能表达出二个或二个以上病毒抗原且在禽类体内诱导出抗禽类病毒疾病的保护性免疫反应。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术是有关一种在禽卵内取得胚胎免疫性的多重性DNA疫苗及/或多价性DNA疫苗。该多重性DNA疫苗包含二个或二个以上的DNA构建物，每个构建物含有一个编码禽类病毒蛋白或其片段的DNA分子，该蛋白或其片段能在禽类体内诱导出抗禽类病毒疾病的保护性免疫反应。该多价性DNA疫苗包含一个DNA构建物，该构建物含有二个或二个以上的DNA分子，各DNA分子为一个禽类病毒基因或其片段。该多价性DNA疫苗能表达出二个或二个以上的病毒抗原且能在禽类体内诱导出抗禽类病毒疾病的保护性免疫反应。该多重性DNA疫苗和该多价性DNA疫苗两者优选在禽卵受精约18天后注射到禽卵的羊膜内。
技术介绍
Sharma等人已经全面地说明含病毒疫苗的蛋内疫苗接种(in ovo vaccination)(美国专利第4,458,630号)。尤其是，其讲授到可以将活的马立克病病毒(Marek’sdisease virus)注射到卵的羊膜的内，其后胚胎受到感染并且疫苗病毒复制到一高病毒效价(titer)，从而在受处理的胚胎内诱导出保护性抗体的形成。(参阅，Sharma(1985)，Avian Diseases 29，1155，1167-68)。在全世界的家禽产业中众所周知，某些病毒疾病，例如马立克病病毒(MDV)、传染性华氏囊病病毒(IBDV)、新城鸡瘟病毒(Newcastle disease virus)(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)、鸡贫血病毒(CAV)、鸡痘病毒(FPV)、禽流感病毒(AIV)、理奥病毒(reovirus)、禽白血病病毒(ALV)、网状内皮组织增生病毒(REV)、禽腺病毒和出血性肠炎病毒(HEV)，可能造成重大疫情爆发且导致养禽商业明显经济损失。其中，MDV、IBDV、NDV和IBV由于其毒性本质而显得特别重要。马立克病(MD)为一种会在鸡中自然发生的恶性淋巴增生失调疾病。该疾病是由一种疱疹病毒-马立克病病毒(MDV)所引起的。MD普遍存在于全世界的禽类生产国家中，在密集生产系统下饲养的鸡不可避免地会遭受来自马立克病所造成的损失。MD病征广泛地出现于受到感染的鸡的神经、生殖器官、内部器官、眼睛和皮肤，造成运动障碍(由于神经受到感染时因麻痹所致)，内部器官的功能性障碍(因肿瘤所致)，与慢性营养不足(若内部器官有受到病毒侵袭时)。MD会感染约6周龄以上的鸡，最常发生于12周至24周龄鸡中。至目前为止，尚未有治疗MD的方法。该疾病的控制主要基于管理方法，例如将正在生长的鸡与感染源隔离，使用在遗传上具有抗性的品系，以及接种疫苗。不过，管理程序通常不具成本效益，且针对具有增加遗传上控制抵抗力的禽系的选择而言，其进展亦令人失望。现今，MD的控制几乎完全根基于疫苗接种。传染性华氏囊病病毒(IBDV)会造成幼鸡的高度接触感染免疫抑制性疾病，进而造成全世界禽业的明显损失(参阅Kibenge(1988)，J.Gen.Virol.，691757-1775)。感染了病毒性传染性华氏囊病病毒系的敏感性鸡，可能会产生被称为传染性华氏囊病(IBD)的高度接触感染免疫抑制性状况。对华氏囊(the bursa of Fabricius)的淋巴滤泡和脾所造成的伤害，可能会加重其它病原体所造成的感染，并且减低鸡对疫苗的反应能力(参阅Cosgrove(1962)，Avian Dis.，6385-3894)。IBDV为双RNA病毒科(Birnaviridae)的一员，其基因组由两个片段的双链RNA所构成(参阅Dobos et al.(1979)，J.Virol.，32593-605)。较小的片段B(约2800bp)编码VP1，即dsRNA聚合酶。较大的基因片段A(约3000bp)在单一开放读码区(ORF)内编码为一个110kDa多肽前体，经处理成为成熟的VP2、VP3和VP4(参阅Azad et al.(1985)，Virology，14335-44)。从与该多肽的ORF部分重叠的一个小ORF，片段A也可编码出VP5，一具有未知功能的17kDa蛋白质(参阅Kibenge et al(1991)，J.Gen.Virol.71569-577)。虽然VP2和VP3都是病毒粒子的主要结构蛋白，不过VP2才是主要的保护性免疫原且会引起宿主诱导出中和抗体(参阅Becht et al.(1988)，J.Gen.Virol.，69631-640；Fahey et al.(1988)，J.Gen.Virol.，701473-1481)。VP3被认为是一种组特异性抗原(group-specific antigen)，是因为其可被来源于血清型1和2中直接抗VP3的单克隆抗体(Mabs)所识别(参阅Becht et al(1988)，J.Gen.Virol.，69631-640)。VP4为一种由病毒编码的蛋白酶且参与蛋白质前体的处理(参阅Jagadish et al.(1988)，J.Virol.，621084-1087)。在过去，幼鸡IBDV感染的控制是由使用无毒性品系进行活疫苗接种，或主要通过将活的或经杀死的IBDV疫苗饲养母鸡后所诱导出的母体抗体转移而达成。不幸的是，最近数年内，在美国从经疫苗接种过的鸡群中已分离出毒性IBDV变异株(参阅，例如，Snyder et al.(1988)，Avian Dis.，32535-539；Van der Marel et al.(1990)，Dtsch.Tierarztl.Wschr.，9781-83)，此事实严重地破坏了对IBDV使用活疫苗接种的效用性。开发对IBDV的重组疫苗已有成效，并已将IBDV的基因组克隆出来(参阅Azad etal(1985)”Virology”，14335-44)。IBDV的VP2基因也克隆出且在酵母菌内(参阅Macreadie et al.(1990)，Vaccine，8549-552)，以及重组禽痘病毒内表达出(参阅Bayliss et al(1991)，Arch.Virol.，120193-205)。当鸡使用从酵母菌表达的VP2抗原予以免疫处理时，抗血清可提供鸡对抗传染性华氏囊病病毒感染的被动保护。在用于主动免疫研究时，以禽痘病毒为载体的(fowlpox virus-vectored)VP2抗原可提供对抗死亡的保护，但是不能提供对抗华氏囊伤害的保护。新城鸡瘟病毒(NDV)为一种有鞘膜的病毒，其包含一线形、单链、未分段、负义(negative sense)的RNA基因组。具有特色地，包含负义基因组的带有鞘膜的单链RNA的病毒族被分类为具有未分段的基因组(例如，副黏病毒科(Paramyxoviridae)和弹状病毒科(Rhabdoviridae))或具有分段的基因组(例如，正黏病毒科(Orthomyxoviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)和砂粒病毒科(Arenaviridae))。新城鸡瘟病毒，与副流感病毒、仙台病毒(Sendai virus)、猿猴病毒5(simian Virus5)、和腮腺炎病毒(mumps virus)都属于副黏病毒科。NDV的构造成分包括一源于细胞膜的双层脂质的病毒鞘膜。从鞘膜突出的糖蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于蛋内注射的多重性ＤＮＡ疫苗，包括：二个或二个以上的ＤＮＡ构建物，每个ＤＮＡ构建物表达出一个会在禽类内造成禽类病毒疾病的禽类病毒的抗原蛋白；其中，所述禽类病毒的所述抗原蛋白能在所述禽类诱导出抗所述禽类病毒疾病的保护性免疫反应；且所述多重性ＤＮＡ疫苗被注射到所述禽类的蛋内。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭村勇，
申请(专利权)人：施怀哲股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[]