TOPK肽及包含它们的疫苗制造技术

衍生自TOPK的分离的表位肽及其免疫学活性片段具有诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力，因此适合于癌症免疫治疗中使用，更具体地说作为癌症疫苗使用。本发明专利技术的肽涵盖包含衍生自TOPK的氨基酸序列的肽及其修饰形式，其中取代、缺失、插入和/或添加1个、2个或几个氨基酸，条件是这样的修饰形式具有CTL诱导能力。还提供编码上述任何肽的多核苷酸和包含任何上述肽或多核苷酸的药物组合物。本发明专利技术的肽、多核苷酸和药物组合物在癌症和肿瘤的治疗和/或预防中特别有用。

TOPK peptides and vaccines containing them

The derived epitope peptides derived from TOPK and their immunological active fragments have the ability to induce cytotoxic T lymphocytes (CTL). Therefore, they are suitable for use in cancer immunotherapy, and more specifically as cancer vaccines. The peptide of the invention encompassing the peptide derived from TOPK amino acid sequence and its modified form, including substitution, deletion, insertion and / or addition of 1, 2 or more amino acids, the condition is such a modified form has CTL induction ability. It also provides polynucleotides encoding any of the above peptides and pharmaceutical compositions containing any of the above peptides or polynucleotides. The peptides, polynucleotides and pharmaceutical compositions of the present invention are particularly useful in the treatment and / or prevention of cancer and cancer.

【技术实现步骤摘要】
TOPK肽及包含它们的疫苗本申请是申请日为2012年10月25日、申请号为201280065049.4(PCT申请号：PCT/JP2012/006853)、专利技术名称为“TOPK肽及包含它们的疫苗”的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及生物科学领域，更具体的说是癌症治疗领域。具体而言，本专利技术涉及作为癌症疫苗有效的新肽，用于治疗和/或预防肿瘤的药物。优先权本申请要求2011年10月28日提交的美国临时申请61/552,817的权益，通过述及将其全部内容收入本文用于所有目的。
技术介绍
已经显示CD8阳性细胞毒性T细胞细胞(CTL)可识别主要组织相容性复合物(MHC)I类分子上的肿瘤相关抗原(TAA)所衍生的表位肽，然后杀死肿瘤细胞。从TAA的第一个例子——黑素瘤抗原(MAGE)家族被发现起，通过免疫学手段(NPL1,2)已经发现了许多其它TAA，这些TAA中的一些目前正在作为免疫治疗靶标进行临床开发。有利的TAA对于癌细胞的扩增和存活而言是不可或缺的。使用这样的TAA作为免疫治疗的靶标，可以最大程度的减小人们熟知的癌细胞免疫逃逸的风险。癌细胞免疫逃逸可归因于治疗驱动的免疫选择(therapeuticallydrivenimmuneselection)而导致的TAA删除、突变或下调。因此，能够诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的新TAA的鉴定保证了进一步开发并且由此利用针对各种类型癌症的肽疫苗接种策略的临床考察正在进行中(NPL3-10)。迄今为止，已经有数项使用这些肿瘤相关抗原衍生的肽进行临床试验的报告。不幸的是，到目前为止这些癌症疫苗试验只获得了较低的客观应答率(NPL11-13)。因此，本领域仍然对适于作为免疫治疗靶的新TAA存在需求。TOPK(T-LAK细胞来源的蛋白质激酶)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，是MAPK激酶(MAPKK)3/6相关MAPKK家族的成员。这种激酶磷酸化p38MAPK并参与细胞周期检查点的调控(NPL14、15)。使用临床样品的TOPK基因表达分析标明TOPK在某些恶性癌症中，例如乳腺癌、胆管细胞癌、肝细胞癌、白血病、结直肠癌、和黑素瘤中过表达(NPL16-19)。近来的研究表明激酶活性在乳腺癌癌发生中扮演重要角色，这重新引起了人们研究癌症相关激酶，如TOPK的兴趣。为此目的，Northern印迹分析已经揭示，TOPK转录本在乳腺癌中高表达，但在除睾丸之外的正常人组织中几乎检测不到。此外，已经显示在乳腺癌细胞系中用siRNA敲低内源TOPK表达可减弱胞质分裂并导致癌细胞的凋亡(NPL20)。引用表非专利文献[NPL1]BoonT,IntJCancer1993May8,54(2):177-80[NPL2]BoonT&vanderBruggenP,JExpMed1996Mar1,183(3):725-9[NPL3]HarrisCC,JNatlCancerInst1996Oct16,88(20):1442-55[NPL4]ButterfieldLHetal.,CancerRes1999Jul1,59(13):3134-42[NPL5]VissersJLetal.,CancerRes1999Nov1,59(21):5554-9[NPL6]vanderBurgSHetal.,JImmunol1996May1,156(9):3308-14[NPL7]TanakaFetal.,CancerRes1997Oct15,57(20):4465-8[NPL8]FujieTetal.,IntJCancer1999Jan18,80(2):169-72[NPL9]KikuchiMetal.,IntJCancer1999May5,81(3):459-66[NPL10]OisoMetal.,IntJCancer1999May5,81(3):387-94[NPL11]BelliFetal.,JClinOncol2002Oct15,20(20):4169-80[NPL12]CouliePGetal.,ImmunolRev2002Oct,188:33-42[NPL13]RosenbergSAetal.,NatMed2004Sep,10(9):909-15[NPL14]AbeYet.al.,JBioChem.2000July14:21525-21531[NPL15]AyllonVandO'connorR.,Oncogene.2007May24；26(24):3451-61[NPL16]HeFetal.,HumPathol.2010Mar；41(3):415-24[NPL17]LiGetal.,AnnHematol.2006Sep；85(9):583-90[NPL18]MinooPetal.,IntJOncol.2010Sep；37(3):707-18[NPL19]ZykovaTAetal.,ClinCancerRes.2006Dec1；12(23):6884-93[NPL20]ParkJHetal.,CancerRes.2006Sep15；66(18):9186-95
技术实现思路
本专利技术至少部分地基于能够作为合适的免疫疗法靶标的新肽的发现。由于TAA一般被免疫系统察觉为“自身”并因此常常没有天然免疫原性，适宜靶标的发现是极其重要的。通过本专利技术，TOPK(SEQIDNO:86，由GenBankAccessionNo.NM_018492(SEQIDNO:85)的基因编码)，已经被证明为在癌症细胞中特异性过表达，所述癌症尤其是但不限于急性髓细胞样白血病(AML)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、结直肠癌、弥漫型胃癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌(SCLC)和软组织肿瘤。因此，本专利技术聚焦于TOPK作为癌症/肿瘤免疫疗法的候选靶标。为此目的，本专利技术还至少部分地涉及从TOPK的基因产物中鉴定具有诱导针对TOPK特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力的特异性表位肽。如下文详细讨论的，使用源自TOPK的HLA(人白细胞抗原)-A*2402或HLA-A*0201结合性候选肽刺激从一位健康供体获得的外周血单个核细胞(PBMC)。然后建立了具有针对经每种候选肽冲激的HLA-A24或HLA-A2阳性靶细胞的特异性细胞毒性的CTL。本文中的结果证明这些肽是鉴定了能诱导针对TOPK的强而特异性的免疫应答的HLA-A24或HLA-A2限制型表位肽。这些结果进一步表明TOPK具有强免疫原性，而且它的表位是肿瘤免疫治疗的有效靶标。因此，本专利技术的一个目的是提供结合HLA抗原的能力，且包含TOPK序列(SEQIDNO:86)或其免疫学活性片段的分离的肽。这些肽预期具有CTL诱导能力，因此可以用来体外、离体或体内诱导CTL，或者用来直接施用给受试者以在体内诱导针对癌症的免疫应答，癌症的例子包括但不限于AML、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、结直肠癌、弥漫型胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。优选的肽是九肽和十肽，更优选地是具有选自SEQIDNO:2-40和42-84的氨基酸序列的九肽和十肽。在这些之中，具有选自SEQIDNO:2,3,6,27,28本文档来自技高网...

【技术保护点】
少于15个氨基酸的分离的肽，其选自下面的(i)和(ii)：(i)分离的肽，其包含选自SEQ ID NO:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列；和(ii)分离的肽，其包含选自SEQ ID NOs:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列，所述序列中取代、插入、缺失和/或添加了1个、2个或数个氨基酸，其中所述肽具有CTL诱导能力。

【技术特征摘要】
2011.10.28 US 61/552,8171.少于15个氨基酸的分离的肽，其选自下面的(i)和(ii)：(i)分离的肽，其包含选自SEQIDNO:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列；和(ii)分离的肽，其包含选自SEQIDNOs:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列，所述序列中取代、插入、缺失和/或添加了1个、2个或数个氨基酸，其中所述肽具有CTL诱导能力。2.权利要求1的分离的肽，其中所述肽具有下述特征之一或二者：(a)选自SEQIDNO:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列的自N端起的第二个氨基酸被取代为选自亮氨酸和甲硫氨酸的氨基酸；和(b)选自SEQIDNO:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76的氨基酸序列的C末端氨基酸被取代为选自缬氨酸和亮氨酸的氨基酸。3.权利要求1至2中任一项的分离的肽，其中所述肽具有结合HLA抗原的能力。4.权利要求3的分离的肽，其中所述HLA抗原是HLA-A2。5.权利要求1-4中任一项的分离的肽，其中所述肽是九肽或十肽。6.权利要求1的分离的肽，其中所述肽由选自下组的氨基酸序列组成：SEQIDNO:42,45,47,50,51,53,54,62,63,64,66,71,72和76。7.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-6中任一项的分离的肽。8.用于诱导CTL的组合物，其中所述组合物包含一种或多种权利要求1-6中任一项的肽，或一种或多种权利要求7的多核苷酸。9.药物组合物，其包含：(a)一种或多种权利要求1-6中任一项的肽，(b)一种或多种权利要求7的多核苷酸，(c)一种或多种在其表面上呈递有权利要求1-6中任一项的肽与HLA抗原的复合物的APC；(d)一种或多种在其表面上呈递有权利要求1-6中任一项的肽与HLA抗原的复合物的外来体；或(e)一种或多种能够识别在其表面上呈递有权利要求1-6中任一项的肽与HLA抗原的复合物的细胞的CTL，及与之组合的可药用的载体，其中所述药物组合物配制为用于治疗和/或预防癌症，防止其手术后复发，和/或诱导针对癌症的免疫应答。10.权利要求9的药物组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村佑辅，角田卓也，大泽龙司，吉村祥子，渡边朝久，中山岳，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：日本,JP