1,4-二羟基-2-萘甲酸的制造方法技术

１，４－二羟基－２－萘甲酸的制造方法，其特征在于，对属于丙酸菌的１，４－二羟基－２－萘甲酸生产菌在厌氧条件下开始培养，在培养基中的碳源浓度达到３．５质量％以下时，向培养基中进行空气通气来培养。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】,4－二羟基－2－萘甲酸的制造方法
本专利技术涉及使用丙酸菌发酵的，4-二羟基-2-萘甲酸(以下也称DHNA)的高浓度制造方法及其培养物的味道改善技术。
技术介绍
已知DHNA以往作为染料、颜料和感光材料用作工业材料，至今通过有机化学合成法开发了各种合成法。本专利技术者对与它们不同的DHNA的制造方法进行研究后，发现丙酸菌在菌体内外大量产生DHNA，同时发现从该培养物采集的含DHNA的组合物、或者，4-二羟基-2-萘甲酸或其盐具有改善乳糖不耐症患者摄入牛奶时的腹部不适症状的作用，可以用于代谢性骨疾病的预防治疗(专利文献)。采用该方法，可以将DHNA用于饮食品和医药品，但是含DHNA的组合物从味道的角度看未必令人满意，难以用于众多商品。专利文献国际公开第WO 03/06544号小册子专利技术的揭示专利技术要解决的课题本专利技术的目的在于提供基于丙酸菌发酵的、味道得到改善的含DHNA的组合物的高效的制造方法。解决课题的方法本专利技术者为了得到抑制了苦味的含DHNA的组合物从各方面进行了认真研究后，完全意外地获得了有用的新发现，即通过在丙酸菌发酵的一定的时期进行培养基的空气通气，培养物中的DHNA浓度升高。此外，通过在培养后的培养物中添加丙酸菌的碳源，在弱碱性条件下进行低温保存，虽然培养结束了，但DHNA浓度升高。另外，还发现由此得到的含DHNA的组合物的苦味受到抑制，味道良好，可以用于饮食品和医药品。即，本专利技术提供，4-二羟基-2-萘甲酸的制造方法，其特征在于，对属于丙酸菌的，4-二羟基-2-萘甲酸生产菌在厌氧的条件下开始培养，培养基中的碳源浓度达到3.5质量％以下时，向培养基内进行空气通气来培养。此外，本专利技术提供，4-二羟基-2-萘甲酸的制造方法，其特征在于，对属于丙酸菌的，4-二羟基-2-萘甲酸生产菌在厌氧的条件下进行培养，向得到的培养物中添加碳源，在弱碱性下于3～20℃进行保存。本专利技术提供，4-二羟基-2-萘甲酸的制造方法，其特征在于，对属于丙酸菌的，4-二羟基-2-萘甲酸生产菌在厌氧的条件下开始培养，培养基中的碳源浓度达到3.5质量％以下时，向培养基内进行空气通气来培养，再向得到的培养物中添加碳源，在弱碱性下于3～20℃进行保存。此外，本专利技术提供含有通过上述制造方法得到的，4-二羟基-2-萘甲酸的组合物。此外，本专利技术提供作为有效成分含有通过上述制造方法得到的，4-二羟基-2-萘甲酸的组合物的腹部不适症状改善用饮食品、腹部不适症状改善剂、代谢性骨疾病预防治疗用饮食品或代谢性骨疾病预防治疗剂。此外，本专利技术提供含有通过上述制造方法得到的，4-二羟基-2-萘甲酸的组合物在腹部不适症状改善用饮食品、腹部不适症状改善剂、代谢性骨疾病预防治疗用饮食品或代谢性骨疾病预防治疗剂的制造中的应用。另外，本专利技术提供腹部不适症状的处置方法或代谢性骨疾病的处置方法，其特征在于，给予有效量的含有通过上述制造方法得到的，4-二羟基-2-萘甲酸的组合物。专利技术的效果若采用本专利技术，则可以高效地生产DHNA，而且得到的含DHNA的组合物的味道良好，可以用于饮食品、医药品。附图的简单说明[附图说明图]表示改变切换到空气通气的时间的情况下的DHNA浓度的变化。表示改变切换到空气通气的时间的情况下的乳糖浓度的变化。表示切换到空气通气的时间和丙酸菌数量的变化。表示改变切换到空气通气的时间的情况下的丙酸浓度的变化。表示改变切换到空气通气的时间的情况下的醋酸浓度的变化。表示改变空气通气的流量的情况下的DHNA浓度。实施专利技术的最佳方式本专利技术的制造方法中所使用的丙酸菌只要是DHNA产生菌，没有特别限定，较好是属于丙酸杆菌属的菌，可以例举例如费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)、特氏丙酸杆菌(P.thoenii)、产丙酸丙酸杆菌(P.acidipropionici)、詹氏丙酸杆菌(P.jensenii)等干酪用菌，贪婪丙酸杆菌(P.avidum)、疮疱丙酸杆菌(P.acnes)、嗜淋巴丙酸杆菌(P.lymphophilum)、颗粒丙酸杆菌(P.granulosam)等。其中，较好是费氏丙酸杆菌，更好是P.freudenreichii IFO 2424和P.freudenreichii ATCC 6207、P.freudenreichii ET-3(FERM P-8454)。本专利技术所使用的培养基较好是含有碳源的培养基，本专利技术中的碳源是指丙酸菌可利用的碳源。可以例举例如乳糖、葡萄糖、乳酸、甘油、麸质、纤维素等，特别好是乳糖。培养开始前的培养基中的碳源含量较好是4～8质量％，更好是4～7质量％，特别好是4～6.7质量％。其中，作为碳源含有乳糖的培养基可以例举乳清粉、酪蛋白、脱脂奶粉、或者将乳清进行透析处理而使乳糖含量减少的乳清蛋白浓缩物、或者更高纯度地分离乳糖的乳清蛋白分离物。它们可以直接使用，或者进行蛋白酶处理后使用，可以通过添加以下成分来制备培养基酵母提取物、胰蛋白胨等蛋白胨，葡萄糖、乳糖、乳糖的乳糖酶处理物等可以作为丙酸菌利用的碳源的单糖类和/或双糖类等适量的糖类，乳酸、甘油、麸质、纤维素、乳清矿物等矿物成分，以及根据需要添加的牡蛎、生姜等含有大量矿物成分的动植物性食品或其提取物。以下，例举培养基原料中以脱脂奶粉的蛋白酶处理物为主要成分的培养基制备方法的一个例子。将脱脂奶粉用水溶解，使其浓度达到0～20质量％，将温度调整至47℃。向其中以脱脂奶粉量的2.5质量％添加蛋白酶，分解脱脂奶粉溶液中的蛋白质。蛋白酶可以例举动植物来源或细菌来源的蛋白质分解酶，酸性、中性、碱性都可以使用。分解进行6小时，分解中的温度调整至47℃，pH调整至6.8。pH的调整可以使用碳酸钾水溶液。利用蛋白酶的分解结束后，通过将脱脂奶粉溶液加温至80℃，保持0分钟，使蛋白酶失活。失活后，用水使脱脂奶粉的质量浓度达到0％并混匀，添加脱脂奶粉的～0质量％、较好是3～7质量％的啤酒酵母提取物后，进行灭菌。灭菌条件在使用高压灭菌锅的情况下设为2℃下、7分钟以上，使用灭菌加热板的情况下设为40℃以上、4秒以上。这样得到的培养基中通常含有4～5质量％的乳糖。培养在厌氧条件下进行。厌氧条件可以是例如氮气、氦气、氩气、氢气等惰性气体中的一种或两种以上的组合，其中较好是氮气或二氧化碳气氛下的条件。更具体来说，在发酵罐中使氮气、二氧化碳等在上方通气，进行搅拌，将培养基温度调整为33℃。培养基温度稳定在33℃后，接种丙酸菌起子，在厌氧条件下开始培养。起子可以使用丙酸菌的活化培养液或培养液的菌体浓缩物等。向培养基的添加量的标准在前者的情况下为相对于培养基0.05％、在后者的情况下为0.3％左右，这些量可以根据需要适当地改变。在培养温度为20～40℃、培养基的pH为中性～微酸性(较好是pH5.5～7.5)的条件下进行培养。为了抑制培养中的酸度上升，可以使用碳酸钾水溶液、碳酸钠水溶液等已知作为中和剂的公知的试剂。接着，对向培养基空气通气的方法进行说明。通过该方法DHNA生产量的增大是令人吃惊的。对于通过连续地进行空气通气使DHNA的生产量增大的原因并不清楚，但由于该空气通气，丙酸菌开始消耗丙酸。开始空气通气的时间为培养基中的碳源浓度达到3.5质量％以下时，标准之一是丙酸菌的碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
１，４－二羟基－２－萘甲酸的制造方法，其特征在于，对属于丙酸菌的１，４－二羟基－２－萘甲酸生产菌在厌氧的条件下开始培养，在培养基中的碳源浓度达到３．５质量％以下时，向培养基内进行空气通气来培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉市圭介，依田伸生，
申请(专利权)人：明治乳业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]