一含有Ｃ－２４羟基支键的维生素Ｄ衍生物，由于Ｃ－２４位置为一对掌中心（ｃｈｉｒａｌ ｃｅｎｔｅｒ）的碳原子，所以其维生素Ｄ衍生物含有Ｃ－２４Ｒ羟基与Ｃ－２４Ｓ羟基的两种异构物形式；其中，通常以Ｃ－２４Ｓ羟基的结构具有较佳的生理活性。因此，本发明专利技术有关一种选择性酵素酯化或选择性酵素溶剂分解（ｓｏｌｖｏｌｙｓｉｓ）一Ｃ－２４羟基维生素Ｄ衍生物异构物的混合物方法，以分离出两种Ｃ－２４Ｒ羟基与Ｃ－２４Ｓ羟基的异构物。此外，本发明专利技术方法不仅易于纯化Ｃ－２４Ｒ羟基与Ｃ－２４Ｓ羟基的异构物，且更提供一种异构化反应，使Ｃ－２４Ｒ羟基维生素Ｄ衍生物经由此方法可达到回收再利用的特色。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于一种纯化一C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物的方法，尤指一种适用于选择性酵素酯化与选择性酵素溶剂分解、以及异构化反应的方法。
技术介绍
目前具有生物活性的维生素D衍生物已陆续被开发出来，例如1α，25-dihydroxylvitaminD2的支链C-25羟基取代为C-24羟基，且不同支链的修饰与取代，可具有不同性质的药物活性。一C-24羟基维生素D衍生物的结构中，由于C-24位置为一对掌中心(chiral center)的碳原子，所以包含有C-24R羟基与C-24S羟基的两种异构物形式。其中，又以C-24S羟基维生素D衍生物具有较佳的生物活性。因此，传统上C-24羟基维生素D衍生物工艺的关键步骤即是分离出C-24羟基的两种异构物形式。然而，公知方法中，有人是将C-24酮基进行不对称还原反应、或利用合成法将具有正确位向的支键直接与维生素D骨架连结，但是由于反应条件过于严苛且反应时所需原料过于昂贵，导致生产成本提高，而不易量产。另有建议传统管柱层析的方法，由于C-24R羟基与C-24S羟基的异构物极性相当且结构差异不大，因此分离效果不彰，即应用性不佳。此外，有人采用酵素反应进行异构物位向的选择，但是传统方法中对于制程所获得的C-24R羟基维生素D衍生物大都不再处理而废弃。如此，不仅造成环境污染，亦增加工艺成本等问题。因此，目前亟需一种用以纯化一C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物的方法，其不仅可有效地分离出C-24R羟基与C-24S羟基的异构物，且可将较不具有生物活性的C-24R羟基维生素D衍生物再回收利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种选择性酵素酯化一C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物的方法，其步骤包含有提供一C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物、将C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物与一酯化试剂溶于一有机溶剂中或直接溶于该酯化试剂中，而获得到一混合物、以及将一酵素(lipase)加入于上述的混合物中，进行选择性酯化反应后，即得到一C-24羟基维生素D衍生物的酯化异构物。于本专利技术中所提及异构物的混合物是选自包括下列式(I)或式(II)的化合物 其中，R1为氢或羟基保护基；且R2为C1-C6烷基、C3-C6环烷基、或C6-C12芳基。此外，R2较佳可为环丙烷基或异丙烷基。另外，于本专利技术中所使用的有机溶剂是为直链或支链型碳数12以内的烷类、烷基酸烷基酯类、二烷基醚类、或其组合，且本专利技术较佳适用的有机溶剂可为hexane、diisoproyl ether、ethyl acetate、vinyl butyrate、tert-butylmethyl ether、diethyl ether或其组合。于本专利技术中所提及的酯化试剂是为酰卤素类(acyl halides)、酸酐类(acid anhydrides)、具有C2至C6低碳烷羧酸的乙烯酯类(vinyl esters)、或其组合，且较佳可为酰氯(acyl chloride)、醋酸酐(acetic anhydride)、醋酸乙烯酯(vinyl acetate)、丁酸乙烯酯(vinyl butyrate)、或其组合。由此，本专利技术能将C-24(R，S)羟基维生素D衍生物进行选择性酯化，而易于分离出异构物的混合物。于本专利技术的一态样中，本专利技术选择性酵素酯化方法所使用的酵素可为公知任一种酵素，较佳可为产碱菌属脂肪酶(Alcaligenes sp.Lipase)、或假单胞菌属脂肪酶(Pseudomonas sp.Lipase)。此外，该酵素的使用可为一固定化(fixed)技术或一非固定化(free)技术。一较佳具体例中，本专利技术C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物为-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol.，且该混合物的异构物被选择性酯化者为-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol。另一较佳具体例中，本专利技术C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物为-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol.，且该混合物的异构物被选择性酯化者为-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol。为了增加本专利技术的应用，本专利技术选择性酵素酯化一C-24羟基维生素D衍生物异构物的混合物的方法可选择性含有一步骤，利用一管柱层析法，以便分离经由酵素酯化后的C-24-acetoxy维生素D衍生物的异构物、与未经酵素酯化后的C-24羟基维生素D衍生物异构物，而使本专利技术中所提的异构物的混合物可达到易于分离与纯化的目的。此外，本专利技术还可于上述选择性步骤后，可选择性地再包含另一步骤，是将上述管柱层析法分离所获得的C-24-acetoxy维生素D衍生物的酯化异构物进行一水解反应，以取得至少一C-24羟基维生素D衍生物的表异构物(epimer)。于本专利技术的一具体例中，本专利技术C-24(R，S)羟基维生素D衍生物异构物的混合物可为-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol，且经由酵素选择性酯化而利用管柱层析法分离后，即可分别获得-24-acetoxy-24-环丙基-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯、以及一表异构物(epimer)-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol。最后，将上述C-24-acetoxy异构物进行一水解反应，即可获得另一表异构物(epimer)-24-环丙基-9，10-secochola-5，7，10(19)，22-四烯-3β-(第三丁基二甲基硅氧基)-24-ol。在传统C-24羟基维生素D衍生物异构物的制备中，所产生较不具商业价值R-form的C-24羟基维生素D衍生物，大都废弃而不再回收处理。但是，上述本专利技术水解反应所获得的R-form的C-24羟基维生素D衍生物可更利用以下本专利技术异构化的化学反应，重新获得反应起始物C-24(R，S)羟基维生素D衍生物异构物的混合物。此外，可再由上述本专利技术酵素酯化方法重新再合成出具有商业价值的S-form的C-24羟基维生素D衍生物。如此循环的反应路径，不仅可促使反应的回收率增加，且提高了本专利技术的产业利用性。上述异构化方法是将上述本专利技术水解反应所获得的R-form的C-24羟基维生素D衍生物进行一Mitsunobu反应，而获得C-24(R，S)酯类维生素D衍生物异构化的混合物。其中，本专利技术Mitsunobu的反应条件可为公知的条件，较佳可将R-form的C-24羟基维生素D衍生物加入一酯化试剂、一有机酸与一非质子性溶剂存在的环境下，于-30℃至80℃的反应温度范围内，进行一异构化反应，而得到C-24(R，S)酯类维生素D衍生物异构物的混合物。最后，将C-24(R，S)酯类维生素D衍本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于选择性酵素酯化一Ｃ－２４羟基维生素Ｄ衍生物异构物的混合物的方法，其包括下列步骤： （ａ）提供一Ｃ－２４羟基维生素Ｄ衍生物异构物的混合物，其中该异构物的混合物选自包括下列式（Ⅰ）或式（Ⅱ）的化合物： ＊＊＊ 其中，Ｒ↓［１］为氢或是羟基保护基；Ｒ↓［２］为Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］烷基、Ｃ↓［３］－Ｃ↓［６］环烷基、或Ｃ↓［６］－Ｃ↓［１２］芳基； （ｂ）将该Ｃ－２４羟基维生素Ｄ衍生物异构物的混合物与一酯化试剂溶于一有机溶剂中或直接溶于该酯化试剂中，以得到一混合物；以及 （ｃ）将一酵素加入于该混合物中，进行选择性酯化反应，以得到一Ｃ－２４羟基维生素Ｄ衍生物的酯化异构物； 其中，该有机溶剂为直链或支链型碳数１２以内的烷类、烷基酸烷基酯类、二烷基醚类、或其组合；且该酯化试剂为酰卤素类、酸酐类、具有Ｃ↓［２］至Ｃ↓［６］低碳烷羧酸的乙烯酯类、或其组合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄志强，魏庆鹏，
申请(专利权)人：台耀化学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]
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