具内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶解混合肽制造技术

本发明专利技术涉及从若干天然动植物蛋白经酶介获得的混合肽，其具有内皮素拮抗剂作用，作为美白剂可用它来抑制由内皮素激发的黑色素合成，也可用于保健和营养品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶介混合肽，为具有内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶介混合肽。
技术介绍
上世纪80年代人们就发现内皮素(Endothelin)为一类具有吸缩血管活性的肽类物质.Nature，1988，322411-415]，并参与多种心血管疾病的病理生理过程。上世纪90年代初日本的Imokawa等又发现，在UV照射下，角质细胞也释放内皮素，当它被黑色素细胞的受体接受后，会刺激黑色素细胞的增殖分化，激活酪氨酸酶的活性，提高黑色素的合成量。同时他们又证实了如将内皮素抗体(antibody)加入到含内皮素、角质细胞、黑色素细胞的培养液中，能大大抑制内皮素刺激黑色素细胞合成黑色素的作用。人工合成的肽类内皮素拮抗剂应用于心血管疾病的预防和治疗之前已见诸报道。人们希望能找寻到一种既安全、又易得的类内皮素抗体的内皮素拮抗剂来抑制内皮素刺激黑色素的合成，即与内皮素抗体同样具有和内皮素作用位点进行竞争的关键肽段，然而，分子量却比内皮素抗体小得多，且简单易得，成本也下降，从而能将内皮素拮抗剂进入美白的实用化。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶介混合肽。本专利技术的目的还提供一种具有内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶介混合肽的制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种具有内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶介混合肽的应用。本专利技术的一种具内皮素拮抗作用的酶介混合肽，是一种将单一或混合的动植物蛋白用酶进行酶介，获得的具内皮素拮抗作用的酶介混合肽；所述的动物蛋白为乌骨鸡蛋白、牡蛎蛋白、蚕蛹蛋白、蚕丝蛋白、白僵蚕蛋白、猪胰蛋白、珍珠蛋白或卵白蛋白；所述的植物蛋白为木瓜蛋白、菠萝蛋白、桃仁蛋白或杏仁蛋白等蛋白。本专利技术的酶介混合肽为含固量0.1～2％的水溶液；或干燥成含氮量为8～15％其分子量≤2000的干粉。所述的酶是肌蛋白酶(actinasl)、胃蛋白酶(pepsin)、胰蛋白酶(frypsin)、木瓜酶(papain)、肽酶(peptiolasl)或菠萝蛋白酶(bromelin)。本专利技术的一种具有内皮素拮抗作用的天然蛋白的酶介混合肽的制备方法是在10～80℃和pH值为2～10时，将单一或混合的动植物蛋白用酶进行酶介10分钟～12小时，超滤膜超滤或者再经干燥成粉，酶解时蛋白和水之比为1∶5～1∶120，所述的酶和蛋白的比例为1∶10至1∶1000；推荐酶和蛋白的比例为1∶50至1∶100；所述的超滤膜超滤的孔径为2000分子量。采用本专利技术的方法的酶介混合肽的制备方法，最好酶解温度为30～50℃；酶解的时间为1～6小时；酶解时蛋白和水之比为1∶10～1∶30。PH则视不同的酶而定。本专利技术方法中所述的动植物蛋白和酶如前所述。所述的干燥是冷冻干燥、真空低温干燥(室温～≤60℃)，或二者结合。本专利技术的方法不仅原料易得、方法简便，而且①本专利技术所获得的内皮素拮抗剂完全是由天然动植物蛋白酶解而得；②本专利技术的内皮素拮抗剂经B16黑色素瘤细胞模型筛选，具有对内皮素引起的色素形成有明显的抑制作用，既能作为天然美白剂应用于化妆品，又能作为心血管疾病的天然保健品；③本专利技术所用的动植物蛋白都是从古代方剂中所得，皆为人们长期使用、服用的天然动植物蛋白，已证实无副作用，所用的酶也为人们熟知常用的酶，对人体十分安全。具体实施例方式通过下述实施例将有助于理解本专利技术，但並不能限制本专利技术的内容。实施例1经去脂肪及打碎的100克乌骨鸡蛋白、1克木瓜酶、1.5克肽酶、水500克和0.2克EDTA，调至pH为7～8，在间歇搅拌下，45～8℃酶解6小时，加热至沸，冷却，用上海树脂厂732阳离子树脂，调PH至7，离心，上清液经2000分子量超滤膜超滤后即得无菌酶解液。经冷冻干燥得粉状物32克，含氮量12.3％。实施例2蚕丝先经0.5％Na2CO3煮沸脱胶，水洗，脱水，干燥后称100克上述干燥后蚕丝加入45％CaCl2溶液1000克加热至沸，冷却，透析脱盐，清液加入3克菠萝蛋白酶，调pH值为5，温度维持在48℃，保温，不时搅拌，至5小时酶解中止，加热至90℃，维持5分钟，冷却离心，上清液用上海树脂厂717阴离子树脂中和的中和液经2000分子量超滤膜超滤后，减压浓缩至100ml，经冷冻干燥成粉得43克，含氮量11.8％。实施例3白僵蚕粉碎，用有机混合溶剂(醋酸乙酯∶溶剂油＝3∶7)，攪拌浸泡4小时，过滤，将100克滤渣悬浮于1kg水中，加入胰蛋白酶2克，木瓜酶1.5克，酶解温度为45℃，pH≈7.5，不时搅拌，3小时酶解终止，加温至90℃，杀酶，经2000分子量超滤膜超滤后，薄膜减压浓缩(温度＜60℃)至100ml再冷冻干燥得干粉18克，含氮量10.8％。实施例4桃仁100克粉碎后，用7∶3(醋酸乙酯∶溶剂油)混合溶剂脱脂，脱脂物，在1000ml 1％醋酸溶液中7～8℃冰箱中浸泡8小时，匀浆，再放置7～8℃冰箱中4小时，离心，分出上清液，用蒸馏水透析，加入肽酶1克，木瓜酶1克，在pH8，温度45℃下酶解5小时，加温至80℃保持5分钟，降温，离心，上清液用2000分子量超滤膜进行超滤，得蛋白酶解液，冷冻干燥，得粉状物26克，含氮量10.6％。实施例5将牡蛎壳蛋白100克，加入1000ml蒸馏水，加温至45℃，加入2克木瓜酶，0.1克乙二胺四乙酸二钠盐，1克盐酸半胱氨酸，酶解5小时，离心，上清液用2000分子量超滤膜进行超滤，得液体产品；也可将上清液减压浓缩至100ml再进行冷冻干燥，得干粉产品17克，含氮量11.8％。实施例6 取乳酸0.3立升加入蒸馏水1.2立升，充分搅匀，将100克珍珠粉分次加入到乳酸溶液中，反应完成后，离心，将不溶部分的珍珠蛋白加入蒸馏水1立升，加入1.5克木瓜蛋白酶，1克盐酸半脱氨酸，1克EDTA，加毕后，38℃中酶解5小时，离心，得酶解液。此酶解液以2000分子量的膜进行超滤，超滤液减压浓缩至100ml，随即冷冻干燥得干粉6.3克，含氮量10.55％。实施例7将干桃仁蛋白和干珍珠蛋白各50克加入蒸馏水1000ml，加入2克菠萝蛋白酶，2克胃蛋白酶，在42℃中酶解1小时，加温，杀酶，离心，上清液用2000分子量超滤膜超滤，得混合蛋白酶解液，经冷冻干燥得粉状物10.6克，含氮量9.8％。实施例8称取卵白蛋白10kg(卵白蛋白由新鲜鸡、鸭蛋中取出)，10克木瓜蛋白酶加入12kg蒸馏水，加入盐酸半酰氨酸1克，搅拌充分混和均匀后，在温度为49℃±1℃，PH7±1反应1小时，停止反应，水介完毕，热温至沸，离心除去未酶介的卵白蛋白滓渣。上清液再加入亚硫酸氢钠千分之零点七，分装，高压灭菌清毒，得酶介卵白蛋白溶液。实施例9 1.实验材料①内皮素(E-7764)Sigma试剂公司产品，50μ/瓶，批号17H49501。②内皮素拮抗剂实例3得冻干粉，配制成1％水溶液。③B16细胞上海医药工业研究院药理室传代维持④培养基(15％小牛血清蛋白+青、链霉素)，消化液(胰蛋白酶+EDTA)。⑤细胞培养瓶、24孔培养板等。2.实验方法在24孔培养板各孔中放入小玻片后加入0.8ml 1×105个/ml的B16细胞悬液。设空白对照组、内皮素组(0.5μg/ml)+内皮素拮抗剂100μg/ml，内皮素(0.5μg/ml)+内皮素拮抗剂200μg/ml，内皮素(0.5μg/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具内皮素拮抗作用的酶介混合肽，其特征是将单一或混合的动植物蛋白用酶进行酶介，经Ｂ↓［１６］黑色素瘤细胞模型筛选，获得的具内皮素拮抗作用的酶介混合肽；所述的动植物蛋白为乌骨鸡蛋白、桃仁蛋白、杏仁蛋白、牡蛎蛋白、蚕蛹蛋白、蚕丝蛋白、猪胰蛋白、珍珠蛋白、木瓜蛋白、菠萝蛋白、白僵蚕蛋白或卵白蛋白；所述的酶为肌蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜酶、肽酶或菠萝蛋白酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江志洁，朱育新，
申请(专利权)人：上海奥利实业有限公司，王神恩，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]