本发明专利技术涉及特异性结合Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３或Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３受体或其片段或亚基的化合物。本发明专利技术还涉及包含Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３和Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３的异寡聚和嵌合的味觉受体在鉴定分别对鲜味刺激物和甜味刺激物产生应答的化合物的检测中的用途。此外，本发明专利技术还涉及在组成性或诱导性条件下稳定或瞬时共表达Ｔ１Ｒ１和Ｔ１Ｒ３，或Ｔ１Ｒ２和Ｔ１Ｒ３的组合的细胞系的构成。本发明专利技术还提供所述细胞系在基于细胞的测定中用以鉴定鲜味和甜味的调节化合物的用途，所述测定尤其是采用荧光测定成像法检测受体活性的高通量筛选测定。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术部分涉及T1R受体组装形成功能性味觉受体这一发现。具体地，已发现T1R1和T1R3的共表达导致对包括谷氨酸单钠在内的鲜味刺激物产生应答的味觉受体的产生。此外，已发现T1R2和T1R3受体的共表达导致对包括天然存在和人造甜味剂在内的甜味刺激产生应答的味觉受体的产生。同时，本专利技术涉及包含T1R1/T1R3和T1R2/T1R3的异寡聚味觉受体在鉴定分别对鲜味刺激物和甜味刺激物产生应答的化合物的测定中的用途。本专利技术还涉及T1R1、T1R2和T1R3的嵌合体和截断形式，以及包含人类、大鼠或人类和大鼠亚基的T1R1/T1R3和T1R2/T1R3受体的嵌合体。此外，本专利技术涉及细胞系的构建，所述细胞系在组成性或诱导性条件下稳定地或瞬时地共表达T1R1和T1R3的组合或T1R2和T1R3的组合，所述组合包括这些亚基的截断形式或嵌合形式，以及包含野生型或嵌合亚基的嵌合受体。本专利技术还提供所述细胞系在鉴定鲜味调节化合物和甜味调节化合物的基于细胞的测定中的用途，所述测定尤其是通过使用荧光成像法检测受体活性的高通量筛选测定。本专利技术还涉及与T1R1/T1R3和T1R2/T1R3受体以及与T1R1、T1R2和T1R3的嵌合或截断的亚基和嵌合受体结合的化合物。
技术介绍
味觉系统提供有关外界化学组成的感觉信息。据信哺乳动物至少有5种基本的味觉甜味、苦味、酸味、咸味和鲜味(见例如Kawamura等，Introduction to UmamiA Basic Taste(1987)；Kinnamon等，Ann.Rev.Physiol.，54715-31(1992)；Lindemann，Physiol.Rev.，76718-66(1996)；Stewart等，Am.J.Physiol.，2721-26(1997))。据认为各味觉由在舌表面发现的味觉受体细胞中表达的一个或多个不同蛋白受体介导(Lindemann，Physol.Rev.，76718-716(1996))。识别苦味、甜味和鲜味刺激物的味觉受体属于G-蛋白偶联受体(GPCR)超家族(Hoon等，Cell 96451(1999)；Adler等，Cell 100693(2000))。(据信其它味觉由离子通道介导)。G-蛋白偶联受体介导诸如内分泌功能、外分泌功能、心率、脂类分解和碳水化合物代谢等许多其它生理功能。许多对所述受体的生化分析和分子克隆已揭示有关这些受体的功能的很多基本原理。例如，美国专利No.5,691,188描述了当配体与GPCR结合时，该受体将如何发生构象变化，从而在Gα亚基的表面促使结合的GDP被GTP置换而导致异三聚体G蛋白的激活、并导致随后Gα亚基从Gβ和Gγ亚基上的解离。游离的Gα亚基和Gβγ复合物激活各种信号转导途径的下游元件。早前假设T1R受体具有甜味受体的功能(Hoon等，Cell 96541-51(1999)；Kitagawa等，Biochem Biophys Res.Commun.283236-42(2001)；Max等，Nat.Genet.2858-63(2001)；Montmayeur等，Nat.Neurosci.4412-8(2001)；Sainz等，J.Neurochem.77896-903(2001))，而Nelson等(2001)和Li等(2002)最近已证明分别为大鼠和人类的T1R2和T1R3以组合形式识别甜味刺激物。但是，在本领域中，还需要新型或改进的调味剂。例如，五种已知的基本味觉之一是谷氨酸单钠(“MSG”)的“香味”或“鲜味”味道。已知MSG在一些人中产生不良的反应，但在MSG人造代替品的鉴定中的进展非常小。已知有一些天然存在的物质能够增加或增强MSG作为香味调味剂的效果，因此在给定的口味应用中将需要较少的MSG。例如，已知天然存在的核苷酸化合物肌苷一磷酸(IMP)或鸟苷一磷酸(GMP)对MSG的香味具有增效作用。但是由于从天然来源分离和纯化IMP和GMP或合成IMP和GMP非常困难和昂贵，因此对于在食物或药物组合物中的大多数商业需求来说，IMP和GMP的实际应用非常有限。目前提供MSG本身的香味或增进任何存在的MSG的效果的较便宜的化合物会具有非常高的价值。同样地，发现新的“高强度”的甜味剂(即它们比蔗糖甜数倍)的化合物也很有价值。本领域需要的是鉴定和表征具有甜味和鲜味受体功能的受体，鉴定调节(增强或阻断)甜味和鲜味的化合物的测定方法和与这些受体特异性结合的化合物。
技术实现思路
本专利技术提供包含人类和大鼠的T1R的各种组合的嵌合受体，所述嵌合受体例如包含人类T1R2亚基和大鼠T1R3亚基的嵌合T1R2/T1R3受体；包含大鼠T1R2亚基和人类T1R3亚基的嵌合T1R2/T1R3受体；包含人类胞外域、大鼠跨膜结构域和大鼠胞内域的嵌合T1R2受体亚基；以及包含大鼠胞外域、人类跨膜结构域和人类胞内域的嵌合T1R3受体亚基。本专利技术还提供与本文所公开的T1R1、T1R2、T1R3、T1R1/T1R3和T1R2/T1R3或其分离亚基、片段、嵌合体或截断形式特异性结合的化合物。本专利技术涉及以下发现当T1R的不同组合共表达时，产生对味觉刺激物发生应答的功能性味觉受体。具体地，本专利技术涉及以下发现T1R2和T1R3的共表达导致对甜味刺激物产生应答的异寡聚味觉受体的产生。同时，本专利技术还涉及以下发现T1R1和T1R3的共表达导致对鲜味刺激物(例如谷氨酸单钠)产生应答的异寡聚味觉受体的产生。本专利技术还涉及共表达T1R1和T1R3(包括人类的或大鼠的)或T1R2和T1R3(包括人类的或大鼠的)的细胞系。在一个优选的实施方案中，这些细胞系组成性或诱导性地表达增加量的受体。这些细胞系包括瞬时地或稳定地表达T1R1和T1R3或T1R2和T1R3的细胞。同时，本专利技术还提供测定方法，优选为高通量筛选测定方法，所述测定方法利用T1R2/T1R3味觉受体或T1R1/T1R3受体来鉴定调节甜味或鲜味的化合物，优选为高通量的基于细胞的测定方法。本专利技术还提供包括为确定这些化合物调节甜味或鲜味而进行味道检验在内的测定方法。本专利技术还涉及例如与T1R2的N-末端胞外域结合的化合物、与T1R2的富含半胱氨酸结构域结合的化合物、与T1R2的跨膜结构域结合的化合物、与T1R3的跨膜结构域结合的化合物、与截断受体h2TM/h3TM的T1R2的跨膜结构域结合的化合物以及与截断受体h2TM/h3TM的T1R3的跨膜结构域结合的化合物。附图说明图1包含人类和大鼠T1R、人类钙敏感受体和大鼠代谢型谷氨酸受体的序列比对。图2为RT-PCR(反转录-聚合酶链式反应)扩增的实验结果，所述实验结果表明hT1R2和hT1R3在味觉组织中表达。图3a～3b为功能性数据(胞内钙应答)，所述数据由稳定表达Gα15的HEK细胞中的不同甜味刺激物所获得，其中所述稳定表达Gα15的HEK细胞在不同浓度的甜味刺激物的存在下用人类T1R2、T1R3和T1R2/T1R3进行瞬时转染(图3a)；人类T1R2/T1R3对数种甜味刺激物产生应答的剂量反应性(图3b)；人类T1R2/T1R3在抗糖尿病植物因子(gurmarin)存在时对蔗糖产生应答，内源性β2-肾上腺素能受体在抗糖尿病植物因子存在时对异丙肾上腺素产生应答本文档来自技高网...
【技术保护点】
非天然存在的化合物，该化合物与由ｈＴ１Ｒ２／ｈＴ１Ｒ３组成的Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３受体特异性结合，而不与由ｒＴ１Ｒ２／ｒＴ１Ｒ３组成的Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３受体特异性结合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓东，莉娜斯塔谢夫斯基，徐红，
申请(专利权)人：西诺米克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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