人源化的抗CD47抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合ＣＤ４７的人源化抗体；结合ＣＤ４７的双抗体，其特征在于在构成双抗体的片段之间存在二硫键；编码所述抗体的任何之一的基因；含有所述基因的载体；含有所述载体的宿主细胞；用于制备抗体的方法，包括培养所述宿主细胞的步骤；以及包含所述抗体的血液疾患的治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合CD47的人源化抗体。所述人源化的抗CD47抗体被用 作为治疗剂，用于血液疾患，如白血病。
技术介绍
CD47是一种膜相关的蛋白质，也被称作为整联蛋白相关蛋白(IAP)。整 联蛋白是在细胞对细胞外基质的附着或者一个细胞对另一个细胞的附着中 起作用的粘附分子之一，并且形成由两个不同亚基构成的异二聚体，这两 个亚基即ot-链和P-链。最近，人们已经开始关注整联蛋白相关分子 CD47(IAP)，其与av(33整联蛋白形成一种复合物，还研究了整联蛋白相关 分子CD47的抗体的医药用途。WO97/32601尝试生产一种抗脾间质细胞抹的单克隆抗体，目的在于开 发一种特异性抗体，该抗体能够鉴定脾间质细胞，该专利申请描述获得了 一种识别小鼠CD47作为抗原的新单克隆抗体。另一方面，WO97/32601公 开了所述单克隆抗体具有在骨髓细胞中诱导凋亡的特性。W099/12973描述被生产来抗人CD47(下文被称作为人CD47;在J. Cell Biol" 123， 485-496, 1993; Journal of Cell Science, 108， 3419-3425， 1995中描 述的氨基酸序列和核苷酸序列)的单克隆抗体，该抗体具备在具有人CD47 的有核血细胞(骨髓细胞和淋巴细胞)中诱导凋亡的特性，即单克隆的 MABL-1和MABL-2抗体，以及生产这些抗体的杂交瘤，这些抗体是 MABL-1(FERM BP-6100)和MABL-2(FERM BP-6101)。WO02/33072和WO02/33073公开了具有单链Fv区的单链Fv,该单链 Fv区具备在具有人CD47的有核血细胞中诱导凋亡的特性，其来自生成来 抵抗人CD47的单克隆抗体。然而， 当生成来抵抗人CD47的单克隆抗体将被用作治疗剂时，有必要 降低抗原性，而保留CD47结合活性和诱导凋亡活性。参者文献 专利文献1: WO97/32601.专利文献2: W099/12973.专利文献3: WO02/33072, WO02/33073.非专利文献1: J. Cell Biol.， 123， 485-496， 1993.非专利文献2: Journal of Cell Science, 108， 3419-3425, 1995.专利技术公开本专利技术的一个目的在于提供抗原性降低的人源化抗CD47抗体。本专利技术 的另 一个目的在于提供如上获得的人源化抗CD47抗体的小抗体片段。还有 本专利技术的另一个目的在于提供如上获得的小的人源化抗体片段的一种稳定 形式。用于解决问题的方法作为用于实现上述目的仔细研究的结果，本专利技术人发现抗原性降低的 人源化的抗CD47抗体保留CD47结合活性和诱导凋亡活性，因而可用作为 血液疾患的治疗剂。因此，本专利技术提供如下方面1. 结合CD47的人源化抗体.2. 如在上述l中定义的人源化抗体，其中CD47是人CD47.3. 如在上述1或2中定义的人源化抗体，其中人源化抗体的CDRs来 源于小鼠抗体。4. 如在上述1-3的任何之一中定义的人源化抗体，包含下面的序列组 的任何一种(1) SEQIDNO:7的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(2) SEQIDNO:10的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(3) SEQIDNO:13的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(4) SEQIDNO:16的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3); (5) SEQIDNO:19的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(6) SEQIDNO:22的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(7) SEQIDNO:30的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序列 (CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);(8) SEQIDNO:37的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序列 (CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(9) SEQIDNO:40的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序列 (CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(10) SEQIDNO:43的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(11) SEQIDNO:46的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(12) SEQIDNO:49的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(13) SEQ IDNO:52的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(14) SEQIDNO:57的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3);(15) SEQIDNO:64的氨基酸31-35的序列(CDR1)、氨基酸50-66的序 列(CDR2)和氨基酸99-106的序列(CDR3);和(16) SEQIDNO:67的氨基酸24-39的序列(CDR1)、氨基酸55-61的序 列(CDR2)和氨基酸94-102的序列(CDR3)。5.如在上述1 - 3的任何之一中定义的人源化抗体，包含下面的序列组 的任何一种(1) SEQ ID NO:7的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列 (FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4);(2) SEQ ID NO:10的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列 (FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4);(3) SEQ ID NO:13的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列(FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4);(4) SEQ ID NO:16的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列 (FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4);(5) SEQ ID NO:19的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列 (FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4);(6) SEQ ID NO:22的氨基酸1-30的序列(FR1)、氨基酸36-49的序列 (FR2)、氨基酸67-98的序列(FR3)和氨基酸107-117的序列(FR4)本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合ＣＤ４７的人源化抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：菊地康文，宇野慎介，木下恭子，饭岛成幸，福岛直，土屋政幸，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[]