树突状细胞来源的免疫抑制性受体，其编码序列及用途制造技术

本发明专利技术涉及了一种新型免疫抑制性受体ＤＩｇＲ２（ＤＣ－ｄｅｒｉｖｅｄ　　Ｉｇ－ｌｉｋｅ　　ｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＤＩｇＲ２）。本发明专利技术提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明专利技术还公开了编码这种新型免疫抑制性受体ＤＩｇＲ２分子的多核苷酸的用途。本发明专利技术证实了ＤＩｇＲ２对于免疫应答起负性调控作用。本发明专利技术还公开了抗此蛋白分子用于疾病的诊断及治疗的策略，特别是可用于癌症的诊断和治疗。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及新的编码免疫抑制性受体分子DIgR2多肽的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本专利技术的多肽是一种新的与抑制树突状细胞(DC)成熟过程中MHCII类分子和共刺激分子CD80(B7-1)的表达有关的免疫抑制性受体。
技术介绍
在造血和免疫细胞中发现的免疫抑制性受体(inhibitory immunoreceptor)是近年来免疫学领域的一个热点课题。免疫抑制性受体的结构特点是含有一个或多个免疫受体酪氨酸相关的抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-basedinhibitory motifs，ITIM)。ITIM是由6个氨基酸组成的保守序列(S/I/L/VxYxxL/V，X代表任一氨基酸)。当免疫抑制受体与刺激受体偶联时，ITIM发生酪氨酸磷酸化，然后与蛋白酪氨酸磷酸酶SHP或/和肌醇磷酸酶SHIP的SH2结合，产生细胞活化的负调节效应。其编码基因多属于免疫球蛋白基因家族和C型凝集素家族。免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily，IgSF)是一类与Ig结构相似、编码基因同源的蛋白分子，主要以膜蛋白形式存在于各种造血细胞、上皮细胞、免疫细胞、血管内皮细胞和神经细胞的表面，在免疫应答中具有接受刺激、传递信息、激活细胞等功能。IgSF基因的缺陷与突变可导致免疫功能紊乱，引发免疫相关性疾病。近年来在这一家族中发现了多种抑制性受体，如IgG低亲和力受体、自然杀伤细胞抑制性受体(killer inhibitory receptor，KIR)、Ig样转录产物(ITL-1、2、3)等，已证明具有重要的免疫学功能。如KIR与配体结合后可启动抑制性信号，可抑制NK细胞毒作用、ADCC和分泌细胞因子，使NK丧失杀伤活性；低亲和力IgG Fc受体FcRγIIB能抑制由BCR引起的Ca2+流和B细胞增殖，缺乏FcRγIIB的小鼠容易产生自身免疫性疾病，表明了这个受体在保证免疫平衡中起重要作用；PD-1作为抑制性受体与外周免疫耐受有关，PD-1缺失的C57BL/6小鼠容易诱发狼疮样肾小球肾炎和关节炎。由此可见，一个免疫抑制受体新成员的发现和功能确证，不仅具有重要的理论探索意义，还具有广阔的临床应用前景，该方面研究已成为当前免疫学领域的热门课题。鉴于免疫球蛋白样受体的重要功能，本领域迫切需要开发新的免疫球蛋白样受体。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型树突状细胞来源的免疫球蛋白样受体DIgR2蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的DIgR2多肽，它包含具有SEQID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO2中1-330位或22-330位氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有负调控免疫应答的功能的由(a)衍生的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述小鼠DIgR2的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2中1-330位或22-330位所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQID NO1中64-1056位的序列；(b)具有SEQ ID NO1中1-1076位的序列；(c)具有SEQ ID NO1中127-1056位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备DIgR2多肽的方法，该方法包含(a)在表达条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有DIgR2多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的小鼠DIgR2多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-1076个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗小鼠DIgR2多肽活性的化合物，以及抑制小鼠DIgR2多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是小鼠DIgR2多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在DIgR2蛋白的方法，它包括将样品与DIgR2蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在DIgR2蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与小鼠DIgR2多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。例如本专利技术多肽可被用于筛选促进小鼠DIgR2多肽活性的激动剂，或者筛选抑制小鼠DIgR2多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本专利技术的小鼠DIgR2蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。在本专利技术的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的小鼠DIgR2多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗肿瘤、炎症、神经系统和心血管病等病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1显示了本专利技术的小鼠DIgR2蛋白的Kyte-doolitte疏水性分析的疏水性曲线图。图2显示了本专利技术的小鼠DIgR2 RT-PCR表达分析结果，提示DIgR2具有广泛表达。其中A.新鲜分离的小鼠细胞的RT-PCR(1)中性粒细胞，(2)单核细胞，(3)T淋巴细胞，(4)B淋巴细胞。B.部分肿瘤细胞系的RT-PCR(1)EL4，(2).CTLL-2，(3)E.G7，(4)A20，(5)J774，(6)Raw，(7)FBL-3，(8)Yac-1，(9)B16，(10)P815，(11)CT20，(12)WEHI164。图3显示了本专利技术的小鼠DIgR2的Northern印迹杂交结果，提示DIgR2是一种广泛分布的分子。图4显示了抗DIgR2多抗阻断后小鼠DC表型的FACS分析结果。图5显示了抗DIgR2多抗处理DC后的混合淋巴细胞反应结果。具体实施例方式树突状细胞(Dendritic cells，DC)的功能特点是能激发初始型T细胞(naive Tcells)免疫反应，是目前所发现的最重要的抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APC)，以抗原致敏的DC体内回输能诱导出抗原特异性免疫应答反应。本专利技术人经过深入而广泛的研究，从小鼠骨髓来源的DC中克隆得到DIgR2全长序列；分析显示DIgR2是一免疫球蛋白超家族中的I型跨膜糖蛋白。Western检测显示DIgR2在体内是一糖基化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的ＤＩｇＲ２多肽，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗坤，夏大静，李楠，曹雪涛，
申请(专利权)人：浙江大学免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]