多核苷酸构建体、药物组合物以及靶向的下调血管生成和抗癌的治疗方法技术

本发明专利技术提供用于在受试者组织中下调血管生成的一种新的核酸构建体。该核酸构建体包括：（ａ）编码嵌合多肽的第一多核苷酸区域，所述的嵌合多肽包括与编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域相融合的配体结合结构域；和（ｂ）编码用于指导嵌合多肽在特异的组织或细胞中表达的顺式作用调节元件的第二多核苷酸区域；其中，选择所述的配体结合结构域使得其能与存在于特定组织或细胞中的配体相结合，而所说配体结合到所说配体结合的结构域则可激活编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域。本发明专利技术还提供利用该核酸构建体治疗以过度或异常的新血管生成或细胞生长为特征的疾病的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
和领域本专利技术涉及核酸构建体、药物组合物和用于在受试者特异组织区域中下调血管生成的方法。更具体地说，本专利技术涉及可用于在特定的细胞亚群中激活编程性细胞死亡的核酸构建体，从而能够治疗以过度或异常新血管生成或以细胞生长为特征的疾病。血管生成指新血管的生长，是一个主要依赖于毛细血管内皮细胞的移动、增殖和脉管形成的过程。在血管生成期间，内皮细胞从平静状态中苏醒并迅速增殖。虽然负责细胞转变为血管生成表型的机制未知，但导致新脉管形成事件的次序已有充分的文献记载。血管的生长需要内皮出芽或套迭。在第一途径中将有下述事件发生(a)脉管基础，通常是后毛细管小静脉和间质溶解；(b)内皮细胞向刺激物迁移；(c)尾随前导内皮细胞之后的内皮细胞增殖；(d)在内皮阵列/芽中形成腔(管道化)(e)通过芽的融合性吻合形成分支和回路以使血液流动；(f)外膜细胞(即，外周内皮细胞和平滑肌细胞)包被上述脉管；和(g)形成包围不成熟脉管的基底膜。还可以通过第二途径形成新脉管即间质组织柱插入预先形成的脉管腔内。这些柱随后的生长和稳定化导致脉管腔的分割和局部血管网的重塑。有多种血管生成因子控制血管生成过程。当然，在病变期间，原血管生成因子和抗血管生成因子之间的精密调节平衡被破坏，引起非自限的内皮和外周内皮细胞增殖。直到最近，对在眼新血管生成、关节炎、皮肤病和肿瘤疾病中出现的血管生成仍难以进行治疗性抑制。因此，所有抗血管生成治疗的基本目标是使增殖微血管的病灶回复到正常的静止状态，并阻止其再生长。鉴于其可延缓肿瘤(例如，视网膜病、良性的和恶性的血管生成性肿瘤)级数生长，抗血管生成治疗是强有力的临床方法。总的说来，任何一种由非受控毛细血管生长引起的疾病，如糖尿病性视网膜病、牛皮癣、关节炎、血管瘤，肿瘤生长和转移都是抗血管生长治疗的靶子。例如，实体瘤的渐进生长超过临床上的潜伏大小(例如，几mm3)需要连续的新血管形成，即已知的肿瘤血管生成过程。肿瘤生长和转移是血管生成-依赖性的。肿瘤必须连续地刺激新微血管的生长以传递营养和氧供肿瘤自身生长。因此，抗血管生成肿瘤治疗的基础在于阻止肿瘤血管生成或者选择性地破坏肿瘤中已存在的血管(血管靶向疗法)。最近，已开发出许多抗血管生成药剂来治疗恶性疾病，其中一些药剂已在进行临床试验(参见Herbst等(2002)Semin.Oncol.2966-77)。研究得最多的用于肿瘤抗血管生成治疗的目标是在人体中调节血管生成的主导过程，即血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR)之间的相互作用。调节VEGFR的原-血管生成作用的试剂包括(i)针对VEGF蛋白本身或其受体(例如，rhuMAb VEGF)的抗体；(ii)针对VEGFR酪氨酸激酶的小分子化合物(例如，ZD6474和SU5416)；(iii)靶向VEGFR的核酶。其他新的血管生成抑制剂包括具有独特的抗肿瘤和抗血管生成特性的雌二醇的天然代谢产物2-甲氧雌二醇(2-ME2)，以及分别作为纤维蛋白溶酶原和胶原XVIII的蛋白水解切割片段的血管生长抑素和内皮生长抑素。然而在前临床模型中显示出，迄今为止所有临床试验的抗血管生成药剂在系统施用时都只有有限的成功率和相当大的毒性，包括血小板减少、白血球减少症和咯血。这些结果提示用目前的肿瘤抗血管生成药剂治疗高级恶性肿瘤可能会受到限制。O′Reilly等已经表明在抗血管生成治疗的开始以及抗肿瘤效果的出现之间的等侯期可导致在对治疗起反应之前的最初的肿瘤级数生长。而且，最近的研究提示在不同的毛细管床之间的血管生成的规则可以不同，提示抗血管生成治疗可以基于器官/组织-特异性来优化。有趣的是，用针对平滑肌细胞增殖的抗血管生成方法治疗(例如，肝素、肝素-肽治疗)具有冠状动脉病病人的心肌缺血效果也并不理想。与利用上述的药剂治疗心血管疾病有关的各种限制包括(i)对患有心血管疾病的病人引起的系统性毒性危险达到不可接受的水平；(ii)在外科手术后妨碍血管伤口愈合；(iii)可能破坏周围的内皮和/或其他的中间平滑肌细胞。由于这些以及与系统施用抗血管生成因子相关的固有障碍(即基于体外不稳定性和高剂量需求的制造限制；和归咎于次最佳效应的丸剂施用的峰动力学)限制了血管生成因子在治疗与新血管生成相关疾病中的有效使用。随着调节血管生成过程的新基因的鉴定，已试图采用体基因治疗来突破这些限制。虽然投入了很大的努力致力于开发出癌症、心血管和外周血管的疾病的基因治疗方法，在有效且特异的基因递送方面仍存在很大的障碍。通常以重组病毒载体作为载体、利用感兴趣的基因进行基因治疗的主要限制因素是将感兴趣的基因特异性地导向靶组织的能力。克服这些限制的努力包括利用组织特异的与细胞毒素基因相偶联的启动子。例如，Jagger等公开了在内皮-特异的启动子控制下表达靶定内皮细胞的细胞毒素基因，他们利用KDR或E-选择性启动子在内皮细胞中特异地表达TNFα。Ozaki等用von-Willebrand因子(vWF)启动子将单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)递送到HUVEC。但是，这些启动子仅仅显示出微弱的活性并且不能进行高水平表达。由Kong和Crystal提出了一种替代方法，这种方法包括抗血管生成因子在肿瘤中特异表达。然而迄今为止尽管在临床前模型中一些合成的抗血管生成药剂与毒性相关，但内源抗血管生成药剂的重组体形式的毒性还没有被证实。血管生长抑素也已经被用作可能的抗血管生成药剂(Falkman等，Cell 1997 Jan 24；88(2)277-85)，但由于肿瘤中涉及血管生成调节的因子过剩，单独的血管生长抑素治疗很难奏效。因此广泛认为需要能在受试者特异的组织区域中有效下调血管生成，同时避免现有技术中抗血管生成方法的特征性毒副作用的新方法，该方法将非常有用。专利技术简述本专利技术一方面提供一种核酸构建体，其包含(a)编码嵌合多肽的第一多核苷酸区域，所述的嵌合多肽包括与编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域相融合的配体结合结构域；和(b)编码用于指导嵌合多肽在特异的组织或细胞中表达的顺式作用调节元件的第二多核苷酸区域；其中，选择所述的配体结合结构域使其能与存在于特异组织或细胞中的配体相结合，而配体结合到该配体结合结构域则可激活编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域。根据下述本专利技术的优选实施方案中的进一步描述，本专利技术还提供用上述核酸构建体转化的哺乳动物细胞。根据本专利技术的另一方面，提供在受试者组织中下调血管生成的方法，该方法包括向受试者施用经设计并装配用于在血管生成细胞亚群中产生编程性细胞死亡的核酸构建体，所述的核酸构建体包括(a)编码嵌合多肽的第一多核苷酸区域，所述的嵌合多肽包括与编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域相融合的配体结合结构域；和(b)编码用于指导嵌合多肽在血管生成细胞亚群中表达的顺式作用调节元件的第二多核苷酸区域；其中，选择所述的配体结合结构域使其能与存在于或提供到血管生成细胞亚群的配体相结合，而配体结合到该配体结合结构域则可激活编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域，由此下调该组织中的血管生成。根据在本专利技术下述的优选实施方案中的进一步描述，该方法进一步包括以适合于将所述配体提供于血管生成细胞亚群的方式施用所述配体于受试者。本专利技术的又一方面提供在受试者组织中下调血管生成的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸构建体，其包括：（ａ）编码嵌合多肽的第一多核苷酸区域，所述的嵌合多肽包括与编程性细胞死亡信号分子的效应物结构域相融合的配体结合结构域；和（ｂ）编码用于指导所述的嵌合多肽在特异组织或细胞中表达的顺式作用调节元件的第二多 核苷酸区域；其中，选择所述的配体结合结构域使其能与存在于所说的特异组织或细胞中的配体相结合，而所说的配体结合到所说的配体结合结构域则激活所述编程性细胞死亡信号分子的所述效应物结构域。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D哈拉特斯，S格里伯格，E布里特巴特，
申请(专利权)人：脉管生物生长有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]