本发明专利技术涉及一种显示出转录启动活性的新的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体及其用于感兴趣的序列的转录的用途，例如用于制备未加帽的ＲＮＡ病毒。本发明专利技术还涉及含有本发明专利技术的多核苷酸或载体的宿主细胞，该宿主细胞优选是禽类来源的。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种具有转录启动活性的新的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体及其用于感兴趣的序列的转录的用途，例如用于制备未加帽的病毒RNA。本专利技术还涉及到含有根据本专利技术的多核苷酸或载体的宿主细胞，该宿主细胞优选是禽类来源的。
技术介绍
流感的预防主要依靠受强烈推荐的接种疫苗。例如，在法国对于可能患上流感的人，法国国家健康保险机构将承担100％的接种疫苗的费用，这样的人群主要是指65岁或65岁以上的人或患有慢性呼吸道疾病、心血管病、肾病和代谢疾病的人。通过产生针对表面糖蛋白，尤其是针对血凝素(HA)及神经氨酸酶(NA)的抗体获得了免疫后的免疫性。I.目前的方法用受精鸡卵制备及灭活流感疫苗由3种不同的病毒株组成两种A型(H3N2和H1N1)，一种B型。疫苗病毒株的选择每年都根据对流行的病毒株变异的监控数据进行重新评估，这是WHO推荐的并在二月中对北半球进行通告。现今所使用的疫苗，与过去30年一样，是由在受精鸡卵中制备的并随后被灭活的病毒组成(Manuguerra，2001，Repères sur lesinfections bronchopulmonaires，pp.328-324.Edited by P.Léophonte &MoutonPIL)。对于A型病毒，在受精卵中具有高复制能力并具有WHO所指出的HA和NA变异株的重排病毒被制备并提供给工业化疫苗生产商。生产一剂量的三价疫苗需要一个或两个受精卵。各个疫苗生产商进行不同的纯化步骤，但是都遵循这样一个相同的原则尿囊液被取走且病毒在用超速离心法进行纯化之前通过用甲醛或β-丙内酯处理而失活。病毒可以用脂质和/或如Tween80这样的去污溶剂进行破碎。完整的或被破碎的病毒随后被调节为15μg HA/剂量疫苗/毒株的标准水平。在可透析去污剂的存在下的纯化步骤使得可以生成一亚单位疫苗，其只包含病毒的包膜糖蛋白(HA和NA)。由于包含完整病毒的疫苗的强反应原性，事实上今天只有被破碎的疫苗和亚单位疫苗被市场化了。在投入市场之前，疫苗的制备以及其质量经检测符合欧洲标准的时期大约为6个月。由灭活的病毒组成，流感疫苗通常有很好的耐受性且只引起很小的副作用，例如在注射部位的局部反应和注射后48小时内的发热反应和头痛。流感疫苗接种的禁忌征限于对卵蛋白、主要是卵白蛋白过敏和对制备残留物或硫柳汞(Mercurothiolate)过敏。在不知道流感疫苗将会对胎儿发育产生什么样的影响的情况下，流感疫苗不被推荐给处于怀孕最初3个月的妇女使用。由灭活病毒所组成的疫苗抗随后的流感传染的保护效应很难被评估，因为该效应可以在不同的季节差别很大，尤其是当其作为正在流行的病毒与那些包含在疫苗中的病毒之间的抗原相关程度的指标时；还因为该效应还依赖于被接种的人的免疫状态。在法国，疫苗覆盖面在1979-1999年间的增加伴随着与流感相关的死亡率的降低(在1979年每年大约死亡的人数为20,000人，自1985年以来每年死亡人数约为2,500人)，这表明了，即使不能证明，疫苗政策的积极影响。此外，来自众多研究的证据使得有可能估计到对老年人进行疫苗接种能够使得病毒性肺炎和住院治疗的人数减少一半以及使得因流感而至死的事件减少约70％(Large et al.，1995，Annals of InternalMedicine，123，518-527)。II.流感疫苗的发展前景为了以下目的，目前进行了几种研究方法的研究1)提高强度、质量，对由流感疫苗引起的反应的耐受性，以及提高它们的特异性；和2)使得当病毒潜在的流行性亚型出现时能够迅速应答。以下概述了涉及到活疫苗的制备以及在细胞培养物中进行疫苗病毒的生产的工作。也应该注意到，在其它的研究方法中，辅剂、重组亚单位疫苗和多核苷酸疫苗的使用被。活疫苗的制备活流感疫苗有可能引发更广泛的、时间更持久的免疫性，尤其是它经过细胞介导增强了免疫性。活疫苗也可能更为普通人群所接受，因为它是经鼻而非注射的途径给药。目前可展望到两种类型的活疫苗减毒活疫苗和重组活疫苗。减毒活疫苗通过流行的野生型毒株与一供体毒株的重排获得了减毒株，该供体毒株已通过冷适应进行了减毒化且其基因型也已被很好地表征，但是还未很好地建立起观察到的突变与表型(减毒、冷适应、热敏性)之间的关系(Keitel et al.，1998，Textbook of Influenza，pp.373-390.Editedby K.G.Nicholson，R.G.Webster & A.J.Hay.Oxford，EnglandBlackwellScience，Ltd.)。在受精鸡卵中制备减毒活疫苗的方法与上面所描述的方法相类似，但是没有病毒失活步骤。近期由美国研究人员所进行的临床测试的结果表明通过鼻内途径给药的由减毒株组成的三价疫苗对于成年人、老人和儿童是无害的，只是在接种后的48小时内有咽喉疼痛和流鼻涕的副作用。它们可以比灭活疫苗具有更大的保护效力，尤其是由于它们诱导了粘膜免疫应答，但是其传染和逆转的可能性还有待证明。在俄罗斯，已经广泛地进行了用减毒的活病毒进行疫苗接种的实践几十年，但是由于所应用的条件的多样性很难得到一个令人信服的总结论。重组活疫苗最近在用于流感病毒的反求遗传学系统的发展(Neumann et al.，2001，Virology 287，243-50)使得有可能在特异性地引入了遗传修饰的基因组中进行重组病毒的生产，以获得充分减毒化和免疫原性的特性。该方法使得安全性增加(因为没有污染物，例如那些可能会在病毒株取样时带入的污染物；以及更容易地减小和控制疫苗病毒逆转的风险的可能性)，并将使得有可能更加特异性地对各种流行状况进行应答。现有的反求遗传学系统是基于人RNA聚合酶I转录系统的使用。由于RNA聚合酶I严格的物种特异性，其应用被限制于人类或灵长类来源的细胞。其可被用于在细胞培养物中生产重组疫苗病毒，但不能够用于在受精鸡卵中生产重组疫苗病毒。-疫苗病毒在细胞培养物中的生产在生产疫苗流感病毒中使用受精鸡卵的最首要的优点是i)病毒产量大量增加；和ii)被对人有致病性的制剂污染的风险最小，尤其是在非灭活疫苗的制备中。对于在缺乏血清的培养基中所培养的细胞中制备疫苗病毒的可能性也进行了研究。Baxter和Solvay公司近期分别验收通过了用于生产疫苗病毒的衍生自Vero和MDCK细胞系的细胞库。在MDCK细胞中生产的灭活疫苗在2001年获得了市场许可但还未被商业化。几种类型的流感疫苗，灭活疫苗和活疫苗，在受精鸡卵中制备的疫苗和在细胞培养物中制备的疫苗将可能共存于未来的市场上。这些疫苗中的某些可能显示出对于某一类个体的接种是尤其适合的，而对于另一类个体则不是那么适合。当流感爆发时，将需要动用所有可用的制备方法，即应用受精鸡卵或细胞培养物的方法。本专利技术是针对于这些需求和其它对于阅读本专利技术说明书的技术人员来说显而易见的需求。
技术实现思路
本专利技术涉及一种多核苷酸、含有所述多核苷酸的重组DNA，及其用途，尤其是用于制备那些用于疫苗中的未加帽的RNA病毒的用途。更特别地，本专利技术的一个目的是一种分离的或纯化的多核苷酸，其包含图1中所示的序列SEQ ID NO1，或其片段，其优选具有转录启动活性。本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的或纯化的多核苷酸，其包括序列ＳＥＱＩＤＮＯ：１或其片段，所述片段由序列ＳＥＱＩＤＮＯ：１的至少１０个连续的核苷酸组成，且所述多核苷酸具有转录启动活性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：纳迪娅纳夫法哈，帕斯卡莱马斯辛，西尔维范德沃尔夫，
申请(专利权)人：巴斯德研究院，国立科学研究中心，德尼狄德罗巴黎第七大学，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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