人脐带间充质干细胞创面涂抹剂的制备和储存应用方法技术

本发明专利技术公开了一种人脐带间充质干细胞的分离纯化和培养方法及其创面涂抹剂的制备、储存、快速配制应用方法：（１）人脐带间充质干细胞的分离纯化和培养；（２）甲基纤维素复合培养基的制备；（３）人脐带间充质干细胞创面涂抹剂的制备。（４）人脐带间充质干细胞生物学性质的检测。本发明专利技术用甲基纤维素作为基质，将人脐带间充质干细胞混入其中，产生一种人脐带间充质干细胞创面涂抹剂，可均匀涂布于皮肤创面而形成一种覆盖物。本发明专利技术进行了动物毒性试验、热原试验、过敏试验等临床前研究，建立了人脐带间充质干细胞冻存复苏方法和干细胞库，为较大规模生产制备人脐带间充质干细胞创面涂抹剂及其应用做好了准备。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种人脐带间充质干细胞的分离纯化和培养方法，其特征在于：　ａ、经过家属同意，将正常足月分娩胎儿的脐带在５％洗必泰中浸泡１０分钟，同时用洗必泰冲洗脐带中的血管，除去血管中的血液，用手术剪将脐带剪成３－４厘米长的小段，置于含５％洗必泰５０ ｍｌ离心管中浸泡５分钟，再用生理盐水浸泡漂洗３次，每次３分钟；　ｂ、将每段脐带沿纵轴切开，剥去表面羊膜上皮层，暴露脐动脉和脐静脉，剥离并抽去脐动脉和脐静脉，留下的华顿氏胶组织再进行清洗；　ｃ、将华顿氏胶组织切成小片，每两小段脐带 的华顿氏胶组织片置入浓度为１ｍｇ／ｍｌ的胶原酶溶液和含胰蛋白酶２．５ｍｇ／ｍｌ－乙二胺四乙酸０．２ｍｇ／ｍｌ生理盐水的联合消化液１５ｍｌ中，在３７℃、转速为２３０转／分钟的摇床中振荡消化２小时；　ｄ、取出振荡消化后的华顿氏胶组织片，置 于下面连接有不锈钢杯的１００目不锈钢网筛上研磨组织块并用生理盐水冲网筛；　ｅ、收集不锈钢杯中的过滤细胞，用生理盐水稀释过滤细胞，然后再１５００转／分钟离心１０分钟，吸去上清，在５０ｍｌ离心管中加入伊斯科夫改良刀比科氏培养基，混匀过滤细 胞，再１５００转／分钟离心５分钟，并重复洗涤过滤细胞３次，得到单个分散的过滤细胞；　ｆ、将浓度为１ｘ１０↑［４］／ｍｌ的过滤细胞培养于含１０％胎牛血清和１０↑［－６］Ｍ氢化可的松的伊斯科夫改良刀比科氏培养基中，置入１７２ｃｍ↑［２］的 培养瓶中，在３７℃、５％　ＣＯ↓［２］的培养箱中培养，７日后换液，以后每４日换液－次，得到原代间充质干细胞；　ｇ、当培养细胞达８０％融合时，用２．５ｍｇ／ｍｌ胰蛋白酶－０．２ｍｇ／ｍｌ乙二胺四乙酸进行消化，然后将１ｘ１０↑［４］培养细 胞置于预先在瓶底铺有Ｌ－多聚赖氨酸的培养瓶中进行传代培养，得到传代的人脐带间充质干细胞。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：戴育成，胡葵葵，董凤平，
申请(专利权)人：戴育成，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]