一种食用菌液体培养方法技术

本发明专利技术涉及一种好气菌液体培养方法．特别是一种改进了通气发酵方法的食用菌培养方法．由于本发明专利技术采用了多级密封管道系统和灭菌棉花球过滤的小气量深层通气搅拌，革除了摇床，替代了空气压缩机等，从而大为降低了生产成本和提高了产量．本发明专利技术简便易行，所需装置小型便携，不仅适合专业户培养菌种，也适合科研单位实验室和野外培养分离菌种使用，也可以应用于其他好气菌，如医用菌的液体菌种培养．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
。本专利技术涉及一种好气菌液体培养方法，特别是一种改进了通气发酵方法的食用菌液体培养方法。目前多种好气菌生产，特别是食用菌生产栽培用菌种的获得，普遍采用多级固体扩大培养方法，但该方法操作繁琐，劳动强度大，培养时间长达20-25天，菌龄不一致且易衰老，生产成本也相当高昂。近年来已开始将工业发酵液体培养好气菌的方法，使用到食用菌栽培播种用菌种的获得。用液体菌种栽培平菇、凤尾菇、金顶蘑等已能使出菇时间大为缩短。与固体菌种相比，液体菌种具有接种方便、菌龄较一致以及生长较快等优点。但是，培养液体菌种需设备投资多，技术要求高。用量不太大的液体菌种可以用摇床来生产，瓶中液体菌种量只能占容量的五分之一。若要获得大量液体菌种，还必须使用发酵罐，对比文献甲提供了这种食用菌培养方法的工艺流程和装置(见附图一)，投资额都在几十万元到几百万元以上。厂小不仅产值少，而且效率也低，加之食用菌栽培具季节性，即使大型液体培养菌种工厂，经济效益也不佳。并且，一罐菌种在几吨以上，生产一旦不慎，菌种就会污染变质。日本、西欧的食用菌产量都很大，发酵技术也先进，但至今并未建有大规模生产液体食用菌菌种的工厂。对比文献乙提供了一种小型发酵装置，全套装置包括无油气体压缩机、气水分离器、空气过滤器和发酵瓶等部件组成。空气过滤介质选用新型的特制维尼纶棉花，装填密度为250公斤每平方米。这种小型发酵装置价格一千六百至二千元，无需蒸汽锅炉和搅拌机，每天动力消耗仅三、四度电。本专利技术介绍了一种更为小型方便、效率高、造价低的食用菌液体培养方法及装置。本专利技术的目的是改进食用菌液体培养中的通气发酵方法，简化培养装置，有效地避免杂菌污染和提高产量，从而大为降低生产成本。本专利技术的技术特征是1，通气过滤发酵装置和注入发酵瓶内的培养液经常规灭菌处理后，进行无菌操作而联结成多级密封管道系统;2，采用灭菌棉花球过滤的小气量深层通气搅拌。下面结合附图详细叙述本专利技术的实施技术方案附图二为合乎专利技术主题的工艺流程示意图;附图三为合乎专利技术主题的装置示意图。参照附图三，按已知配方配制好培养液，并灌注入发酵用玻璃瓶〔1〕、〔2〕、〔3〕(容量可以为0.5、5、10、15升)，使培养液占据发酵瓶容积的五分之一以上，最佳为十分之七。瓶口安上打有穿过进、排气及采样玻璃管用孔的橡皮塞〔4〕、〔5〕、〔6〕。带有球形膨大内腔的进、排气用玻璃管〔7〕、〔8〕、〔9〕、〔10〕、〔11〕、〔12〕、〔13〕、〔14〕，并在球形内腔内以1.2-1.5克/立方厘米的密度，均匀充填满普通未脱脂的洁净棉花。供抽样检验和扩大培养时级间密封连通的玻璃或金属质分叉多通管〔14〕、〔15〕、〔16〕、〔17〕和优质橡皮管及必要时起启闭作用的管夹〔18〕、〔19〕、〔20〕、〔21〕、〔22〕、〔23〕、〔24〕、〔25〕、〔26〕、〔27〕、〔28〕。将上述〔1〕-〔28〕装置及培养液作常规灭菌处理，然后在火焰上作无菌操作至少应关闭〔22〕、〔24〕、〔28〕处的前提下，联结成如附图三所示的多级密封管道系统。为了使培养液中的菌种处于所要求的最佳生长温度，将盛有培养液的发酵瓶置于能进行温度控制的环境中进行培养，本实施方案中具体采用了一个能调温的发酵箱。该发酵箱为夹层中充填有类似于干木屑等保温材料的双层箱或外表面粘贴有类似于发泡硬塑料板等保温层的单层箱，箱的内表面铺垫有均匀缝固于织物中的电热丝作热源，箱内装有控温用双金属片和氖泡等实施温度的调节控制。进行无菌操作，将选定的固体斜面菌种接种到第一级发酵瓶〔1〕的培养液中，关闭〔19〕、〔20〕、〔22〕、〔23〕处，开通〔18〕、〔21〕处，调节发酵箱内的温度，使培养液中的菌种处于要求的最佳生长温度下，静止培养1-2天后，启动小气量通气装置〔29〕，这种装置可以是利用电磁作用、根据机械原理来实现吸、排气功能的电磁泵，以发酵瓶中每升培养液获得0.1-0.3升/分的小气流量，使空气沿进气管〔7〕、〔8〕，经灭菌处理的棉花球过滤后、送入培养液底部不超过1厘米处，进行小气量通气搅拌培养5-7天，见瓶内培养液中出现0.5-1毫米直径的菌丝球时，并根据需要从取样口〔22〕处取样检验，证实符合要求时，即告完成了一级培养。若需第二级扩大培养时，关闭〔21〕、〔22〕及〔26〕，开通〔23〕，然后启动〔29〕将第一级已培养好的菌种沿封密管道压流至第二级发酵瓶〔2〕中，接着关闭〔18〕，开通〔19〕，启动〔29〕用上述相同的通气发酵方法通气培养1-2天，即可完成二级液体菌种的培养。若所得的数量仍不够的话，可依上述方法，使逐级发酵瓶中培养液的数量，后级比前级增多，最佳为1∶10地扩大数量，进行多级扩大培养，直至生产或科研所需的液体菌种量得到满足为止。本专利技术成功地应用于江苏省丹阳食用菌研究所提供的香菇2株、蘑菇1株、平菇5株、银耳1株、灵芝1株、猴头1株、滑菇1株、金针菇1株、凤尾菇1株、榆黄菇1株、黑木耳1株等17株菌种的液体菌种培养，均获得了具有丰富菌丝球的液体菌种，并使用于生、熟料生产栽培，大多数培育出健壮的子实体;本专利技术还完成了苏云金杆菌等药用菌的液体菌种培养试验。由于本专利技术简便易行，所需装置小型便携，也适合在野外采集、分离虫草、竹荪、松茸等野生菌种，进行培养栽培。因此，本专利技术名为，实际上也可以使用于苏云金杆菌等药用好气菌和虫草、竹荪、松茸等野生菌的菌种培养和分离。由于本专利技术革除了通常好气菌、特别是食用菌液体培养方法中必须的摇瓶培养工序，因此一方面省去了对比文献甲中价格可观的摇床等装置，从而大为降低了成本;另一方面，本专利技术中注入培养液数量占所盛发酵瓶容量的五分之一以上，可以增加至十分之七，从而使发酵瓶等设备利用率提高三倍以上。还由于本专利技术中采用了小气量通气装置，具体装置可以是电磁泵为主的一套通气方法及装置，与对比文献乙中的小型发酵装置相比，替代了价格高得多的无油气体压缩机、气水分离器等通气装置，每日电耗也由3-4度降至0.1-0.3度。这一方面进一步降低了成本，使合乎本专利技术主题的装置造价在一百多元，约合对比文献乙中小型发酵装置造价的十五分之一还低;另一方面是使本专利技术更为小型方便，从而便于推广实用。若配套采用小型压力消毒锅、塑料薄膜折叠活动无菌操作箱，则可根据使用目的不同，做成专业户用简易型、野外科研用便携型、医药科研用精密型等商品化液体菌种培养装置。本专利技术的实施例之一昆研平一841少孢子平菇液体菌种的培养。菌种由丹阳县食用菌研究所从昆明食用菌研究所引入。实施装置(1)。发酵瓶0.5升1只、5升1只、10升或15升4只;上述玻璃发酵瓶相应地配有打好3个直径1厘米圆孔的橡皮塞子;(2).发酵箱内箱体积为40厘米×40厘米×50厘米，内壁铺垫缝固于布上的长10米、线径0.1毫米、电阻率100欧姆/米的电热丝，内、外箱壁均用普通市售纤维板裁成，并用铰链联结，内外箱塑间充填数厘米厚的干木屑，采用市售双金属片和氖泡作控温元件及指示灯;(3).小气量通气装置采用空载气流量大于1.5升/分的、市售电磁泵;(4).通气过滤管道带有球径1.5厘米或2.3厘米球形内腔的、外管径1厘米的玻璃管16根，并在球形内腔中以约1.4克/立方厘米的密度充填普通未脱脂洁净棉花;(5).联结用管径均为1厘米的三叉多通玻璃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在发酵装置中进行通气搅拌培养菌种的食用菌液体培养方法，本专利技术的特征是：通气过滤、发酵装置和注入发酵瓶内的培养液，经常规灭菌处理后，进行无菌操作联结成多级密封管道系统，并采用灭菌棉花球过滤的小气量深层通气搅拌。

【技术特征摘要】
1.一种在发酵装置中进行通气搅拌培养菌种的食用菌液体培养方法，本发明的特征是通气过滤、发酵装置和注入发酵瓶内的培养液，经常规灭菌处理后，进行无菌操作联结成多级密封管道系统，并采用灭菌棉花球过滤的小气量深层通气搅拌。2.按权利要求1规定的方法，其特征是注入培养液数量占所盛发酵瓶容量的五分之一以上，最佳为十分之七。3.按权利要求1、2规定的方法，其特征是逐级发酵瓶中培养液的数量，后级比前级增多，最佳为1∶10地扩大数量。4.按权利要求1规定的方法，其特征是按发酵瓶中每升培养液获得0.1-0.3升/分的小气流量，向培养液中离瓶底部不超过1厘米处通气搅拌。5.按权利要求1、4规定的方法，其特征是用于小气量深层通气搅拌的通气装置，可以利用电磁作用，根据机械原理...

【专利技术属性】
技术研发人员：余兆丰，
申请(专利权)人：余兆丰，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]