【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种生物组织体外培养方法,特别是一种肝细胞的体外培养方法。肝脏是环境中多种有害因素作用的靶器官,用原代培养的肝细胞作外源性毒物、药物代谢研究,目前最有希望的是体外培养的哺乳动物肝细胞。现有的肝细胞体外培养均用体外肝灌流法,用昂贵的胶原酶消化制成肝细胞悬液,再用特定的培养基,在37℃ 5~10%的CO2培养箱中培养。由于方法复杂、混杂的纤维母细胞成分较多、且所需设备价格昂贵、来源困难,因而一般条件的实验室很难开展工作。本专利技术的目的在于提供一种能使肝细胞在体外良好增殖,且能抑制成纤维细胞过度生长的简便易行、无需昂贵仪器、设备、试剂即可实施的肝细胞体外培养方法。本专利技术的目的是通过采用边条参液合成培养基而实现的。下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。边条参溶液合成培养基配方如下RPMI 1640 100ml青霉素 100U./ml链霉素 100mg/ml胰岛素 5mg/ml氢化可的松 10mg/ml10%边条参液 10mg/ml小牛血清占培养基总量的10%。用5.6%NaHCO3调pH至7.2~7.4。10%边条参液的制备方法称10g边条参剪成小片,加入双蒸水100ml,煮沸30分钟(补足其液量),2000转/分离心15分钟,取上清,经无菌过滤,-20℃保存备用。此培养基能为肝细胞在体外增殖提供良好的环境,且能抑制成纤维细胞的过度生长。具体培养方法如下1.取新生1~5天的SD大鼠2~3只,用碘酊酒精消毒皮肤,放血致死,无菌取肝。2.弃净肝包膜及髓质部分,用眼科镊子及剪刀作反复机械分离,小心分离肝组织。3.用无菌Hank′ ...
【技术保护点】
一种肝细胞体外培养方法,包括取肝、分离、清洗、沉淀、消化、培养、接种等步骤,其特征在于采用边条参液合成培养基培养肝细胞。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
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